ICS 83. 060 HG G 40 备案号：36868—2012 中华人民共和国化工行业标准 HG/T4301—2012 橡胶防霉性能测试方法 Test method for determining resistance of rubber to fungi 2012-05-24发布 2012-11-01实施 中华人民共和国工业和信息化部发布 HG/T 4301—2012 前言 本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。 本标准使用重新起草法参考ASTMG21一2009《合成聚合物材料防霉性能测定方法》（英文版）编 制，与ASTMG21一2009的--致性程度为非等效。 本标准由中国石油和化学工业联合会提出。 本标准由全国橡胶与橡胶制品标准化技术委员会通用试验方法分技术委员会（SAC/TC35/SC2） 归口。 本标准起草单位：广东省微生物研究所、北京橡胶工业研究设计院、广州合成材料研究院有限公司。 本标准主要起草人：谢小保、欧阳友生、谢君芳、丁晓英、谢宇芳、陈仪本。 本标准为首次发布。 HG/T4301—2012 橡胶防霉性能测试方法 警告：使用本标准的人员应有正规实验室工作的实践经验，本标准并未指出所有可能的安全问题， 使用者有责任采取适当的安全和健康措施，并保证符合国家有关法规规定的条件。 注意事项：本标准的某些步骤中生成的物质和废料可能对当地的环境有所损害。应制定使用后安 全处理的有关文件。 1范围 本标准规定了橡胶材料及其制品的防霉性能试验和评价方法。本标准不涉及防霉产品安全性的 评价。 本标准适用于橡胶材料及其制品。其他高分子材料及其制品也可参照执行。 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单)适用于本文件。 GB/T2941橡胶物理试验方法试样制备和调节通用程序（ISO23529） GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法（ISO3696） YY0569—2005生物安全柜 3术语和定义 下列术语和定义适用于本标准。 3. 1 霉菌moulds 丝状真菌的俗称，通常指菌丝体较发达又不产生肉质子实体结构的真菌。霉菌的菌体由菌丝构成， 菌丝可无限制伸长和产生分枝，分枝的菌丝相互交织在一起形成絮状、绒毛状和网状的肉眼可见的培 养物。 3. 2 防霉性能anti-mouldactivity 产品具有抑制霉菌孢子萌发及菌丝体生长的能力。 4用途和意义 4.1橡胶材料及其制品中的聚合物成分不具有霉菌生长所需的碳源，对霉菌生长有抑制作用。而橡胶 中的其他成分如硫化促进剂、补强填充剂等是造成霉菌侵染的主要原因。在材料最易遭受霉菌侵染的 环境下（温度2℃～38℃和相对湿度60%～100%），验证其抵抗霉菌侵染的能力是很重要的 4.2橡胶材料及其制品受霉菌侵染后，可观察到橡胶材料及其制品表面被腐蚀、褪色和其他相关性能 下降等现象。 4.3经过水淋、自然老化和热处理等条件作用后，样品的防霉性能会受到影响，本标准不包括产品受这 些作用影响后的防霉性能测试。 5仪器设备 5.1恒温恒湿培养箱 1 HG/T4301—2012 温度能保持在29℃士1℃，相对湿度能保持在85%或以上。 5.2高压蒸汽灭菌锅 温度能保持在121℃士1℃，压力能保持在103kPa士5kPa。 5.3干热灭菌箱 温度能保持在160℃士2℃。 5.4天平 精度0.0001g。 5.5pH计 精度0.1。 5.6离心机 转速能达到4000r/min。 5.7生物安全柜 应为符合YY0569一2005规定的Ⅱ级生物安全柜。 5.8显微镜 普通光学显微镜。 5.9冰箱 温度能保持在3℃~10℃。 5. 10 喷雾器 30mL显色喷雾器。 5.11量筒 容量为1000mL。 5.12 2培养器血 宜采用玻璃或塑料培养皿盛放样品。根据样品的尺寸，可选择以下器皿： a）直径小于75mm的样品，用100mm×100mm的塑料盒或者直径为150mm的有盖培养皿。 b) 直径为75mm及以上的样品，可用尺寸为400mm×500mm的玻璃器皿。 6试剂和材料 6.1i 试剂纯度 除另有规定，所有试验均使用化学纯或化学纯级别以上的试剂。 6.2水 所用的水应为符合GB/T6682规定的三级水。 6.3 营养盐培养基（供培养样品使用） 6.3.1组分 0.7 g 磷酸二氢钾（KH2PO） 0.7 g 七水硫酸镁（MgSO4·7H2O) 1.0 g 硝酸铵（NH,NO3） 氯化钠(NaCI) 0.005 g 0. 002 g 七水硫酸亚铁(FeSO4·7H2O) 七水硫酸锌（ZnSO4·7H2O) 0.002 g 0.001 g 一水硫酸锰（MnSO4·H2O) 磷酸氢二钾（K2IHIPO4） 0.7 g 琼脂 15. 0 g 2 HG/T4301—2012 水 1000mL 6.3.2制法 将6.3.1组分加热溶解，用0.01mol/LNa0H溶液调pH达到6.0~6.5.分装，121℃高压灭 菌20min。 6.4营养盐溶液（稀释孢子液用） 除不加琼脂外营养盐溶液与6.3.1的其他组分相同，加热溶解，用0.01mol/LNaOH溶液调pH 达到6.0~6.5，分装，121℃高压灭菌20min。 6.5马铃薯-葡萄糖培养基(培养霉菌用) 6.5.1组分 马铃薯 200 g 葡萄糖 20 g 20 g 琼脂 水 1000 mL 6.5.2制法 取新鲜的马铃薯，去皮切片，在水中煮沸20min后过滤，取汁，按6.5.1要求加人其余组分，加热溶 化，定容至1000mL后进行试管分装，经121℃高压灭菌20min后，趁热取出试管并倾斜摆放，自然凝 固成斜面后备用。 6.6混合霉菌孢子悬浮液 6.6.1试验菌种 试验所用霉菌菌种见表1，试验菌种应由国家级微生物菌种保藏中心提供。根据橡胶的特定用途 或试验特殊需要，还可增选其他霉菌菌种。 表1防霉试验菌种 序号 中文名称 拉丁名 菌株号 CGMCC 3.5487 1 黑曲霉 Aspergillus niger 或ATCC9642 CGMCC3.3875 2 绳状青霉 Penicillium funiculosum 或ATCC11797 CGMCC3.3601 3 球毛壳霉 Chaetomium globosum 或ATCC6205 CGMCC3.3987 4 Gliocladium sp. 或ATCC9645 CGMCC 3.837 5 出芽短梗霉 Aureobasidium pullulans 或ATCC15233 注1:CGMCC为中国普通微生物菌种保藏管理中心。 注2：ATCC为美国典型微生物菌种保藏中心。 6.6.2分别接种各霉菌于马铃薯-葡萄糖培养基（6.5)上，于28℃～30℃培养箱中培养至斜面长满孢 子，并置于3℃～10℃条件下保存，保存时间不宜超过4个月。 6.6.3在无菌条件下，用接种环分别刮取按照6.6.2规定培养的各霉菌孢子，再次接种于马铃薯-葡萄 糖培养基（6.5)上，于28℃～30℃的培养箱中培养7d～20d，当培养基表面长满孢子时，向试管中加 人10mL无菌水或含有0.05g/L的润湿剂（如琥珀辛酯磺酸钠）无菌水，用接种环在无菌操作条件下轻 轻地刮取霉菌培养物表面的孢子，制成孢子悬浮液，备用。 6.6.4将孢子悬浮液倒人125mL带有塞子的无菌锥形瓶中，瓶内装有45mL无菌水和10个～15个 直径5mm的玻璃珠。用力振荡锥形瓶以打散孢子团并使孢子从子实体中释放出来。 3 HG/T4301—2012 6.6.5将带有无菌玻璃棉的玻璃漏斗置于无菌锥形瓶上，把振荡后的孢子悬浮液倒人漏斗内过滤，以 除去菌丝和培养基碎片。 6.6.6无菌条件下用离心机以4000r/min的速度离心已过滤的孢子悬浮液，去掉上清液，将孢子沉淀 物用50mL无菌水重新制作悬浮液并再离心。 6.6.7用上述方法清洗孢子3次，将清洗离心之后的孢子沉淀物用营养盐溶液（6.4)稀释，用血细胞计 数板测定孢子含量，使悬浮液中的孢子含量为1.0×106cfu/mL～5.0×106cfu/mL。也可采用平板培 养计数法等其他计数方法测定孢子含量。 6.6.8试验中用到的每种霉菌均重复以上操作，并等量混合，获得混合的孢子悬浮液。 6.6.9每次试验都要准备新鲜的孢子悬浮液，或者将孢子悬浮液在3℃～10℃保存不超过4d。 注：霉菌接种需在生物安全柜（5.7)中进行。 7孢子活力检查 准备3片边长为25mm大小的正方形滤纸，灭菌后，分别将滤纸平放在装有营养盐培养基（6.3)的 平血中，再用灭菌的喷雾器将混合霉菌孢子悬浮液（6.6)均匀喷酒洒于滤纸表面，使整个滤纸表面湿润，然 后将已接种的平皿置于28℃～30℃、相对湿度≥85%的恒温恒湿培养箱中培养14d。取出观察，在3 片滤纸上均应有明显可见霉菌生长，如果没有霉菌生长，重新制备霉菌孢子液进行试验。 8试验样品 8.1按GB/T2941中的规定，将样品制成50mmX50mm的方形试样或直径为50mm的圆形试样。 选择合适的清洗方法进行清洁，烘干备用。 8.2每个样品做3个平行试样，如果样品的正反面材质不同，试样的正反面都要进行试验。 9试验步骤 9.1接种 向灭菌后的平Ⅲ中倒人约20mL营养盐培养基（6.3），当培养基凝固后，在无菌条件下将3个平行 试样分别放置在3个平皿培养基表面中央。 液（6.6)，使整个试样表面和培养基表面湿润。 9.2培养条件 9.2.1培养 盖好已接种试样的培养平皿，并置于温度28℃～30℃、