ICS65.120 CCSB46 中华人民共和国国家标准 GB/T13092—2025 代替GB/T13092—2006 饲料中霉菌总数的测定 Enumerationofmoldscountinfeeds 2025-10-31发布 2026-05-01实施 国家市场监督管理总局 国家标准化管理委员会发布前 言 本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则 第1部分:标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 本文件代替GB/T13092—2006《饲料中霉菌总数的测定》,与GB/T13092—2006相比,除结构调 整和编辑性改动外,主要技术变化如下: a) 更改了适用范围(见第1章,2006年版的第1章); b) 更改了霉菌总数的定义(见3.1,2006年版的3.1); c) 增加了稀释液种类(见5.5); d) 更改了培养基(见5.7,2006年版的6.1); e) 增加了样品(见第7章); f) 更改了检验程序(见第8章,2006年版的第7章); g) 增加了油脂类试样的制备(见9.1.1.2); h) 增加了空白实验(见9.1.2.3); i) 更改了培养条件(见9.2,2006年版的9.4); j) 更改了结果计算和表述的要求(见第10章,2006年版的第10章)。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由全国饲料工业标准化技术委员会(SAC/TC76)提出并归口。 本文件起草单位:中国农业科学院农业质量标准与检测技术研究所、全国畜牧总站、中国海关科学 技术研究中心。 本文件主要起草人:刘晓露、张惠媛、樊霞、崔婕、魏咏新、姚婷、李丽蓓、娄迎霞、李会、赵恩泽。 本文件及其所代替文件的历次版本发布情况为: ———1986年首次发布为GB/T13092—1986,1991年第一次修订,2006年第二次修订; ———本次为第三次修订。 ⅠGB/T13092—2025 饲料中霉菌总数的测定 1 范围 本文件描述了饲料中霉菌总数的测定方法。 本文件适用于饲料原料、饲料添加剂和饲料产品中霉菌总数的测定。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中,注日期的引用文 件,仅该日期对应的版本适用于本文件;不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于 本文件。 GB/T6682 分析实验室用水规格和试验方法 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 霉菌总数 moldscount 试样经处理,在特定的培养基、培养温度和时间等条件下培养,所得的每克(g)或每毫升(mL)试样 中霉菌的数量。 4 原理 根据霉菌生理特性,选择适宜于霉菌生长而不适宜于细菌生长的培养基,采用平皿计数方法,测定 霉菌数。 5 试剂或材料 除非另有规定,仅使用分析纯试剂。 5.1 水:GB/T6682,三级。 5.2 氢氧化钠溶液(1mol/L):称取20.0g氢氧化钠,溶于水,冷却至室温后,用水定容至500mL, 混匀。 5.3 盐酸溶液(1mol/L):量取42mL盐酸,用水稀释并定容至500mL,混匀。 5.4 磷酸盐缓冲储备溶液:称取34.0g磷酸二氢钾溶解于500mL水中,用大约175mL氢氧化钠溶液 (5.2)调节pH至7.2后,用水稀释至1000mL,混匀,2℃~8℃贮存。 5.5 无菌磷酸盐缓冲溶液:取磷酸盐缓冲储备溶液(5.4)1.25mL,用水稀释至1000mL,混匀,分装于 适宜容器,121℃高压灭菌15min。 5.6 无菌生理盐水:称取氯化钠8.5g,用水溶解并定容至1000mL,混匀,分装于适宜容器,121℃高 1GB/T13092—2025 压灭菌15min。 5.7 氯硝胺孟加拉红氯霉素琼脂(DRBC)培养基:按照附录A制备,或购买市售培养基。 5.8 无菌液体石蜡:取适量液体石蜡,121℃高压灭菌20min。 5.9 无菌吐温80:取适量吐温80,121℃高压灭菌20min。 5.10 无菌均质杯。 5.11 无菌均质袋。 5.12 无菌培养皿:直径90mm。 6 仪器设备 6.1 培养箱:28℃±1℃。 6.2 天平:精度为0.1g、0.01g和0.1mg。 6.3 均质器:转速8000r/min~10000r/min。 6.4 拍打式均质器。 6.5 恒温装置:42℃±2℃。 6.6 涡旋混合器。 6.7 pH计:精度±0.02。或精密pH试纸。 6.8 放大镜或菌落计数器。 6.9 振荡器:往复式。 7 样品 实验室收到样品后应尽快进行检测,以防污染和微生物的变化。 8 检验程序 霉菌总数平板计数法的检验程序见图1。 2GB/T13092—2025 图1 霉菌总数平板计数法的检验程序 9 试验步骤 9.1 试样溶液的制备和稀释 9.1.1 试样溶液的制备 9.1.1.1 试样(油脂类除外) 以无菌操作取25g(mL)试样,按以下三种方式之一进行均质,制成1∶10的试样匀液: ———置于含有225mL无菌磷酸盐缓冲溶液(5.5)或无菌生理盐水(5.6)的无菌均质杯(5.10)内, 8000r/min~10000r/min均质1min~2min; ———放入盛有225mL无菌磷酸盐缓冲液(5.5)或无菌生理盐水(5.6)的无菌均质袋(5.11)中,用拍 打式均质器拍打1min~2min; ———放入盛有225mL无菌磷酸盐缓冲液(5.5)或无菌生理盐水(5.6)的无菌玻璃三角瓶中,置振荡 器上振摇30min。 9.1.1.2 油脂类试样 以无菌操作取25g(mL),置于无菌锥形瓶中,先加12.5mL无菌液体石蜡(5.8),再加25mL无菌 吐温80(5.9),42℃±2℃恒温装置中振荡混合10min,加入42℃±2℃的无菌磷酸盐缓冲液(5.5)或 无菌生理盐水(5.6)187.5mL,42℃±2℃恒温装置中乳化1min~2min,制成1∶10的试样匀液。 3GB/T13092—2025 9.1.2 试样溶液的稀释 9.1.2.1 用1mL无菌移液管或微量移液器吸取1∶10试样匀液(9.1.1.1或9.1.1.2)1mL,沿管壁慢慢 注入含有9mL无菌磷酸盐缓冲液(5.5)或无菌生理盐水(5.6)的无菌试管中,涡旋混合30s,制成 1∶100的试样匀液。 9.1.2.2 按9.1.2.1操作方法,作10倍递增稀释,每递增稀释一次应更换一次无菌移液管或无菌微量移 液器吸头,制成1∶10n的试样匀液。 9.1.2.3 选择2个~3个适宜连续稀释度的试样匀液(液体样品可包括原液),每个稀释度分别吸取 1mL试样匀液于2个无菌平皿内。同时,吸取1mL无菌磷酸盐缓冲液(5.5)或无菌生理盐水(5.6)置 于无菌平皿内作空白对照。 9.2 培养与结果记录 试样匀液移入无菌平皿后,将46℃~50℃的DRBC培养基(5.7)20mL~25mL倾注无菌平皿,小 心转动平皿使试样匀液与培养基充分混匀。从稀释试样匀液到倾注培养基时间不超过30min。待培 养基凝固后,水平倒置平板于28℃±1℃培养箱中培养,第3天观察并记录结果。观察完后将平板放 回培养箱中继续培养至第5天,再次观察并记录结果。每次观察时应轻拿轻放平板,切勿打开皿盖。 9.3 菌落计数 9.3.1 霉菌菌落计数时,可用肉眼观察,必要时可借助于放大镜或菌落计数器检查,以防遗漏。霉菌计 数以菌落形成单位(CFU)表示。 9.3.2 选择菌落数在10CFU~100CFU之间,无蔓延菌落生长的平板计数。低于10CFU的平板记 录具体菌落数,大于100CFU的可记录为多不可计。霉菌蔓延生长覆盖整个平板的可记录为菌落 蔓延。 10 结果和报告 10.1 霉菌总数的计算 10.1.1 若只有一个稀释度的平板上的菌落数在10CFU~100CFU范围内,计算两个平板菌落数的平 均值,再将平均值乘以相应稀释倍数,作为每克(g)或每毫升(mL)试样中霉菌总数结果。示例见附录 B中的示例1。 10.1.2 若有两个连续稀释度的平板菌落数在10CFU~100CFU范围内时,则试样中的霉菌总数以N 计,数值以菌落形成单位每克或每毫升(CFU/g或CFU/mL)表示,按式(1)计算: N=∑C (n1+0.1n2)d…………………………(1) 式中: ∑C———菌落数在10CFU~100CFU范围内的平板菌落数之和,单位为菌落形成单位(CFU); n1———第一稀释度(低稀释倍数)平板个数; 0.1———对第二稀释度平板数量的权重调整系数; n2———第二稀释度(高稀释倍数)平板个数; d———稀释因子(第一稀释度,未经稀释的液体试样稀释因子为1)。 计算结果作为每克(g)或每毫升(mL)试样中霉菌总数结果。示例见附录B中的示例2。 10.1.3 若所有稀释度的平板上菌落数均大于100CFU,则对稀释度最高的平板进行计数,其他平板可 记录为多不可计,结果按平均菌落数乘以最高稀释倍数计算。示例见附录B中的示例3。 4GB/T13092—2025