ICS 65.020.20 CCS B 05 41 河南省 地方标准 DB41/T 2935—2025 大球盖菇液体菌种生产技术规程 2025 - 08 - 08发布 2025 - 11 - 07实施 河南省市场监督管理局 发布 DB41/T 2935 —2025 I 目次 前言 ................................ ................................ ................. II 1 范围 ................................ ................................ ............... 1 2 规范性引用文件 ................................ ................................ ..... 1 3 术语和定义 ................................ ................................ ......... 1 4 生产要求 ................................ ................................ ........... 1 5 摇瓶菌种生产 ................................ ................................ ....... 2 6 发酵罐菌种生产 ................................ ................................ ..... 3 7 贮藏 ................................ ................................ ............... 4 8 留样 ................................ ................................ ............... 4 9 建档和追溯 ................................ ................................ ......... 5 附录A（资料性） 大球盖菇液体菌种生产上常用配方 ................................ ....... 6 附录B（资料性） 大球盖菇液体菌种检测方法及指标 ................................ ....... 7 附录C（资料性） 大球盖菇液体菌种放罐指标 ................................ ............. 8 附录D（资料性） 大球盖菇液体菌种生产记录事项 ................................ ......... 9 参考文献 ................................ ................................ ............. 10 DB41/T 2935 —2025 II 前言 本文件按照 GB/T 1.1 —2020《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。 本文件由河南省农业农村厅提出。 本文件由河南省经济作物标准化技术委员会（ HN/TC 31 ）归口。 本文件起草单位：商丘市农林科学院、河南金隆菇业有限公司、南阳市乡村振兴监测中心、河南省 种业发展中心、商丘市乡村产业发展中心。 本文件主要起草人：黄海洋、利金站、王家才、郭蓓、孙喜云、杨密、张伟、侯磊、朱新利、曹依 静、赵侠科、陈昆、黄新华。DB41/T 2935 —2025 1 大球盖菇液体菌种生产技术规程 1 范围 本文件规定了大球盖菇液体菌种生产要求、摇瓶菌种生产、发酵罐菌种生产、贮藏、留样、建档和 追溯的内容。 本文件适用于大球盖菇液体菌种生产。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。 其中， 注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本 文件。 GB/T 150.1 压力容器 第1部分：通用要求 GB 5749 生活饮用水卫生标准 GB 50073 洁净厂房设计规范 NY/T 528 食用菌菌种生产技术规程 NY/T 1284 食用菌菌种中杂菌及害虫的检验 NY/T 1742 食用菌菌种通用技术要求 NY/T 1935 食用菌栽培基质质量安全要求 NY/T 3819 农产品质量安全追溯操作规程 食用菌 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 液体菌种 培养基为液体状态的菌种。 液体菌种发酵罐 食用菌液体菌种培养专用设备。 发酵罐空消 对尚未加水投料的空发酵罐进行高压蒸汽灭菌。 发酵罐实消 对投料后的发酵罐进行高压蒸汽灭菌。 4 生产要求 DB41/T 2935 —2025 2 工作人员要求 应具有一定的食用菌或微生物专业知识，掌握液体菌种生产等专业技能。 场地要求 选择交通便利，通风良好，远离污染源的农业生产区域，应符合 NY/T 528 的要求。 厂房要求 4.3.1 菌种生产场所 应有各自隔离的原材料库，配料分装室（场）、灭菌室、冷却室、接种室、培养室、菌种检验室等； 设置摇瓶菌种和发酵罐液体菌种培养室。规模要配套，布局要合理，设计应符合 GB 50073 的要求。 4.3.2 菌种生产车间 菌种检验室和母种制作室要有相应的实验检测设备和灭菌设备； 培养基配制室空间洁净度要达到万 级以上；接种间应设置缓冲间和风淋室，缓冲间入口处设置洗手、消毒和干手设施，设置与接种人数相 适应的更衣室，放置封闭式废物桶，安装排气管道或者排风设备，门窗悬挂防蚊蝇纱网；培养室要有调 温设备以满足菌种生产的需要。 室内墙壁和天花板应具有防潮、防霉、防水等性能，且便于清洁；地面应具有防水、防腐蚀、防渗 漏、防滑等性能，且便于清洁；需有 1.0°～1.5°的排水坡度和良好的排水系统，排水沟采用圆弧式明 沟设计。 设备要求 应有液体菌种发酵罐、空气压缩机、高效空气过滤器、液体菌种接种器、高压蒸汽灭菌锅、蒸汽锅 炉、超净工作台、恒温摇床、恒温培养箱、除湿设备、调温设备、冰箱、普通光学显微镜、磁力搅拌机、 磅秤、天平、酸度计和备用电源等设备。其中，高效空气过滤器对粒径 0.1 μm～0.2 μm粒子的捕集效 率在99.999%以上，且所有材质应耐 126 ℃高温灭菌；液体菌种发酵罐、高压蒸汽灭菌锅和蒸汽锅炉应 符合GB/T 150.1 的要求。 5 摇瓶菌种生产 品种选择 选择来源可靠、种性清晰的大球盖菇品种。菌种质量应符合 NY/T 528 、NY/T 1742 的要求。 培养基制作 根据生产规模选择合适容量的培养容器；常用培养基配方见附录 A.1或购买成品培养基；制作培养 基时将原料溶解， 分装量不超过培养器容量的 60%， 瓶塞封口， 并用牛皮纸包扎。 培养基质应符合 NY/T 528、 NY/T 1935 的要求，用水符合 GB 5749的要求。 灭菌 液体培养基分装后应立即灭菌。将分装的摇瓶放入高压蒸汽灭菌锅内进行灭菌，锅内应留有一定空 隙。当压力升至 0.05 MPa时，打开放气阀排除冷空气，如此重复 2次。压力升至 0.11 MPa～0.14 MPa时， 恒压维持 30 min～40 min。灭菌结束后，自然焖锅降压，防止培养基外溢。 DB41/T 2935 —2025 3 接种 将冷却后的培养基放置于消毒过的超净工作台上，严格按照无菌操作规程，用经酒精灯火焰灼烧并 冷却后的接种针挑取 3～4块直径为 2 mm～3 mm的母种块迅速转接于待接种摇瓶培养基内，接种结束后迅 速封口，及时贴好标签。 培养 培养室使用前 2 d，采用药物或者紫外线灯进行消毒处理。将接好的摇瓶菌种放入 25 ℃恒温培养箱 中静置培养 1 d， 然后置于磁力搅拌器或恒温摇床上培养， 温度控制在 25 ℃， 转速140 r/min～160 r/min， 培养6 d～7 d。 检验 摇瓶菌种培养期间，从摇瓶菌种中取样，分别在无菌琼脂平板上培养， 35 ℃～38 ℃培养18 h～24 h， 检测有无细菌菌落生长； 25 ℃～28 ℃倒置培养 3 d～5 d，观察有无霉菌、酵母菌等杂菌生长。每天检查 和记录，及时拣出不合格菌种，检测项目和指标见附录 B，检验方法应符合 NY/T 1284 的要求。 6 发酵罐菌种生产 发酵罐检查 选择生产上常用的气升式发酵罐，检查其全部阀门及压力表，要求完好、正常。重点检查空气过滤 器，滤芯要求无油污、料污、无破损，外壳内