ICS 65.020.30 CCS B 40 15 内蒙古自治区 地方 标准 DB15/T 1528—2025 代替DB15/T 1528 —2018 绒山羊皮肤毛囊密度切片测定法 Determination of skin follicle density by tissue section of cashmere goat 2025-10-30发布 2025-11-30实施 内蒙古自治区市场监督管理局 发布 DB15/T 1528 —2025 I 前言 本文件按照 GB/T 1.1 —2020《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 本文件代替 DB15/T 1528 —2018《绒山羊皮肤毛囊密度切片测定法》，与 DB15/T 1528 —2018相比， 除结构调整和编辑性改动外，主要技术变化如下： a) 删除了术语和定义中 “次级毛囊 /初级毛囊” （见 2018年版的3.2） 、 采样部位及时间 （见 2018 年版的4）、毛囊密度的校正（见 2018年版的6.4.4）； b) 增加了附录 A和附录B（见附录）。 本文件由内蒙古自治区畜牧业标准化技术委员会 (SAM/TC 19) 归口。 本文件起草单位：内蒙古自治区农牧业科学 院、巴彦淖尔市农牧科学研究所、鄂尔多斯市农牧业科 学研究院、内蒙古民族大学、巴彦淖尔市同和太种畜繁育中心、乌拉特中旗绿色产业发展中心、乌拉特 中旗农牧和科技局。 本文件主要起草人：吴铁成、刘斌、王涛、刘俊阳、胥福勋、朝鲁孟、何亭漪、高玉林、意乐其、 谷英、勿都巴拉、王静雅、孙春河、杨燕、乌兰花。 本文件及其所代替文件的历次版本发布情况为： —— 2018年首次发布为 DB15/T 1528 —2018； —— 本次为第一次修订。 DB15/T 1528 —2025 1 绒山羊皮肤毛囊密度切片测定法 1 范围 本文件规定了绒山羊皮肤毛囊切片测定法的器械及试剂、测定方法等内容。 本文件适用于皮肤毛囊密度的测定。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。 其中， 注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本 文件。 GB/T 8170 数值修约规则与极限数值的表示和判定 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 毛囊密度 density of hair follicle s 单位面积内皮肤初级和次级毛囊数。 皮肤收缩率 skin shrinkage rate 皮肤组织在脱水后面积与采样面积的比率。 4 器械及试剂 器械 皮肤取样器、手术刀、镊子、显微镜、切片机等。 试剂 4%多聚甲醛、无水乙醇、蒸馏水、二甲苯、石蜡、伊红 -苏木素、碘伏、止血药等。 5 测定方法 样品采集及处理 DB15/T 1528 —2025 2 在采样区域 进行手术备皮，消毒后，用皮肤 取样器采集皮肤样本约 1 cm2。试验羊创口进行消毒， 止血和包扎。 切片制作 5.2.1 皮肤组织切片制作 皮肤组织石蜡切片制作见附录 A。 5.2.2 切片染色 皮肤组织石蜡切片染色采用 H.E染色法，见附录 B。 显微镜观测 绒山羊毛囊一般以毛囊群的形式存在，一个初级毛囊周围分布若干次级毛囊，组成一个毛囊群，群 之间有明显界限（见附录 C）。显微镜下记录确定区域内毛囊数量，在具有显微成像系统的实验室中， 可以利用分析软件直接选取面积并做毛囊计数； 也可在盖玻片上人工框定计数面积或放置孔径为 1 mm～ 2 mm的垫片、网格板等，使用显微镜对视野内毛囊数量进行计数，通过选定皮肤面积内毛囊计数结果计 算毛囊密度。 皮肤毛囊密度计算 5.4.1 皮肤收缩率 皮肤组织在脱水透明后皮肤面积与活体样皮肤面 积的比值 ，结果按照 GB/T 8170 的规定修约到两位 小数。 5.4.2 毛囊密度 绒山羊皮肤组织切片法测定单位面积内初级和次级毛囊数，结果按照 GB/T 8170 的规定修约到两位 小数。计算方法为： ................................................................... （1） 式中： ρ──毛囊密度的数值，单位为每平方厘米的数量（个 /cm2）； n ──选定区域内毛囊数量的数值，单位为个（个）； m ──选定区域皮肤面积的数值，单位为平方厘米（ cm2）； r ──皮肤收缩率的数值，单位为百分号（ %）。 DB15/T 1528 —2025 3 A A 附录 A （资料性） 石蜡切片制作流程 A.1 4%多聚甲醛固定 采集的皮肤样品用镊子展平，置于 4%多聚甲醛溶液中浸泡 24 h。 A.2 梯度浓度酒精脱水 将固定后的皮肤组织依次浸入 75%、85%、95%、100%酒精溶液中 各脱水不少于6 h， 最后保存于 100% 酒精中备用。 A.3 二甲苯透明 将脱水后的皮肤组织放入二甲苯中 1 h～2 h，中途可更换二甲苯，透明过程中观察透明效果，确 保透明完全。 A.4 石蜡包埋 将透明后的皮肤组织浸入石蜡中 2 h～4 h，浸蜡最好 在真空中进行，浸蜡完成后，组织包埋制成 蜡块。 A.5 切片 使用切片机垂直于绒毛生长方向切成 5 μm薄片，切片于温水中展开，置于用载玻片上， 60 ℃烘 烤20 min，室温冷却。 DB15/T 1528 —2025 4 B B 附录 B （资料性） H.E染色流程 B.1 二甲苯脱蜡 将载玻片上的皮肤组织分别两次置于二甲苯中，每次 5 min～15 min，确保石蜡完全溶解。 B.2 梯度浓度酒精回水 将载玻片上皮肤组织脱蜡后，依次浸入 100%、95%、85%、75%酒精溶液中各回水 5 min，最后用蒸馏 水冲洗2 min。 B.3 伊红-苏木素染色 首先，置于苏木素中浸染 8 min～10 min，用水冲洗。其次，置于分化液（ 1%盐酸酒精）中（ 3 s～ 5 s）,使切片褪色至淡兰红色即可，用水冲洗。再次，置于饱和碳酸锂水溶液 15min。最后置于伊红液 中,浸染2 min～5 min，用水冲洗多余的染料。 B.4 梯度浓度酒精脱水 将染色后的皮肤组织依次浸入 75%、85%、95%、100%酒精溶液中各脱水 5 min。 B.5 二甲苯透明 将载玻片上的皮肤组织分别两次置于二甲苯中，每次 5 min～15 min。 B.6 中性树脂封片 在皮肤组织中央滴加适量的中性树脂后，一手持载玻片，一手持盖玻片，轻轻让盖玻片中心点接触 到中性树脂脂滴的凸点，待其两者接触后，缓缓放下盖玻片，让中性树脂自然地在盖玻片下扩散开来即 可，避免气泡产生，切片封固后 ,平置凉干后装盒。