ICS 71. 080. 99 G 15 HG 备案号：50891—2015 中华人民共和国化工行业标准 HG/T 4850.2—2015 稳定性同位素氙标记试剂 第2部分：沙丁胺醇-D3 Stable isotope deuterium labelled reagents Part 2: Salbutamol-D3 2016-01-01实施 2015-07-29发布 中华人民共和国工业和信息化部发布 HG/T4850.2—2015 前言 HG/T4850《稳定性同位素氛标记试剂》分为3个部分： -第1部分：甲萘威-D3； 一第2部分：沙丁胺醇-D：； 第3部分：恩诺沙星-D。 本部分为HG/T4850的第2部分。 本部分按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。 本部分由中国石油和化学工.业联合会提出， 本部分由全国肥料和土壤调理剂标准化技术委员会（SAC/TC105）！ 归口。 本部分起草单位：上海化工研究院、上海稳定性同位素工程技术研究中心 本部分主要起草人：郑波、罗勇、杜晓宁、雷雯、徐建飞、李美华。 (13) HG/T4850.2—2015 稳定性同位素氙标记试剂 第2部分：沙丁胺醇-D3 1范围 HG/T4850的本部分规定了稳定性同位素氛标记试剂沙丁胺醇-D3的要求，试验方法，检验规 则，标识，包装、运输和贮存。 本部分适用于以水杨酸和溴乙酰氯为原料、经有机合成反应后再用硼尔化钠还原制备所得的稳定 性同位素氙标记沙丁胺醇-D：产品。 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 GB/T8170—2008 数值修约规则与极限数值的表示和判定 3分子结构式 OH D TOH ID LDH HO -CH KCHy CH, 4符号 下列符号适用于本文件。 "A：同位素原子，其中A表示元素符号，m表示该元素的同位素的相对原子质量数。例如：2H 表示氢元素中相对原子质量数为2的同位素氢原子，通常以D表示。 "A：同位素原子标记个数，其中A表示元素符号，Ⅲ表示该元素的同位素的相对原子质量数， n表示含该元素的同位素原子的个数。例如："H：表示氢元素中相对原子质量数为2的同位素氢原子有 3个．通常以D3表示。 atom%"A：同位素丰度的单位，表示A元素的相对原子质量数为m的原子占A元素的原子百 分数。例如：atom%D表示相对原子质量数为2的同位素氢原子在氢元素中所占的原子百分数。 5 要求 5.1外观 白色粉末。 5.2技术指标 产品的技术指标应符合表1的要求。 (15) 1 HG/T4850.2—2015 表1产品技术指标 指 标 项 日 优级品 合格品 纯度（质量分数）/% 99.0 98.0 D同位素丰度/（atom%D) 99. 0 97. 0 6 试验方法 本实验方法所用试剂、溶液除非另有规定，在分析中仅使用确认为优级纯的试剂和GB/T6682 规定的一级水。 6.1外观 目视检验。 6.2纯度——高效液相色谱法 6.2.1方法原理 高效液相色谱法测定沙丁胺醇-D；的纯度，以天然丰度沙丁胺醇标准品作为外标建立标准工作曲 线，测定稳定性同位素标记沙丁胺醇-D3的纯度。 6.2.2试剂和材料 6. 2. 2. 1 甲醇：色谱纯。 6. 2. 2. 2 乙腈：色谱纯。 6.2. 2.3 沙丁胺醇标准品：纯度≥99%。 6.2. 2.4 磷酸：分析纯。 6.2. 2.5 三乙胺：分析纯。 6.2.2.6 磷酸盐水溶液：0.02mol/L。 称取0.98g磷酸于烧杯中，加人500mL水，搅匀，用三乙胺调节pH至2.94，经0.45um滤膜 过滤，超声30min，待用。 6. 2.3 仪器和设备 6. 2. 3.1 通常实验室用玻璃仪器及设备。 6. 2. 3. 2 涡旋混合器。 6. 2. 3. 3 高效液相色谱仪：配紫外检测器或PDA阵列检测器。 6.2. 3.4 微量进样器：25uL。 6.2.3.5 分析天平：精度十万分之一。 6. 2. 3. 6 微孔滤膜：孔径0.22μm。 6.2. 3.7 超声波脱气仪。 6.2.4 色谱条件 推荐的色谱条件如下，也可选择其他达到同等分离效果的条件。 色谱柱：氨基色谱柱，250mm×4.6mm1.D.，5μm，或相当者； 柱温：40℃； 进样量：10μL； 检测器波长：UV220nm； 流速：1.0ml/min.分流器分流0.8mL/min； 流动相：A为磷酸盐水溶液（0.02mol1/L），B为乙腈； 洗脱条件：A/B=60/40，等度洗脱； 2 (16) HG/T4850.2—2015 半微量检测池温度：40℃； PDA光栅狭缝宽度：1.2nm； 数据采集频率：3.125Hz。 6.2.5分析步骤 6.2.5.1外标标准储备溶液的制备 称量100mg（精确到0.01mg）沙丁胺醇标准品，溶于色谱流动相，转移至100mL容量瓶中定 容，得到浓度为1000mg/L的标准储备溶液，避光保存于冰箱中，可使用3个月。 6.2.5.2外标标准工作溶液的制备 将上述标准储备溶液用乙睛稀释得到浓度分别为20mg/L、40mg/L、80mg/L、200mg/L、 400mg/L.的标准T.作溶液，避光保存于冰箱中，可使用1个月。 6.2.5.3试样的溶解 做两份试料的平行测定。每份称取10mg（精确到0.01mg）样品，溶于色谱流动相，定容于 25mL容量瓶中，得到浓度为400mg/L的样品储备溶液。稀释样品储备溶液得到浓度为200mg/L 的样品分析液。 6.2.5.4标准工作曲线的建立 待高效液相色谱仪稳定后，将6.2.5.2得到的系列标准T作溶液用孔径0.22μm的微孔滤膜过滤 后，用微量进样器分别注入仪器，每个浓度的标准工作溶液均重复测定3次，以标准工作溶液的浓度 为横坐标、每个浓度3次重复测定得到的外标物峰面积平均值为纵坐标绘制标准工作曲线 6.2.5.5试样的测定 将6.2.5.3得到的试料溶液用孔径0.22μm的微孔滤膜过滤后，用微量进样器注人仪器，每份试 料液重复进样测定3次，计算得出3次测定的峰面积平均值，得到试料溶液的浓度，代人公式（1） 可得试样的纯度。 6.2.6分析结果的计算与表述 6.2.6.1产品的纯度 纯度w以质量分数计，数值以%表示，按公式（1）计算： cVXsT =m X 100 (1) 000x 式中： k——稳定同位素D标记沙丁胺醇与沙丁胺醇标准品的质量校正系数：1.01； 试样峰面积平均值在标准工作曲线上对应的产品溶液的浓度的数值，单位为微克每升 (μg/L) ; V一试料溶液的定容体积的数值，单位为升（L)； XsT一沙丁胺醇标准品标注纯度的数值，以质量分数表示： m—试样的质量的数值，单位为毫克（mg）。 计算结果保留到小数点后1位。取平行测定结果的算术平均值为测定结果。 6.2.6.2允许差 平行测定结果的绝对差值≤0.5%。 不同实验室测定结果的相对偏差≤土0.5%。 6.3D同位素丰度——液相色谱-质谱法 6.3.1方法原理 将样品用无水甲醇溶解，引入液相色谱-质谱的电喷雾离子源（ESI），使样品溶液发生静电喷雾， 在近大气压下的干燥气流中形成带电雾滴。随着溶剂蒸发，通过离子蒸发等机制形成气态离子，进人 质谱分析。按离子的质荷比（m/）不同加以分离，最终被离子收集检测器采集到相应的质谱信息， (17) 3 HG/T4850.2—2015 经计算、校正后输出各m/=峰强度，用“质量簇”分类法计算试样沙丁胺醇-D:的D同位素丰度值。 “质量簇”分类法原理参见附录A。 6.3.2试剂和材料 6.3.2.1甲醇：色谱纯。 6.3.2.2离心管：1.5mL。 6.3.3仪器和设备 6.3.3.1通常实验室用玻璃仪器及设备。 6. 3. 3. 2 液相色谱-质谱联用仪。 6.3.3.3进样针：0.50mL。 6.3.3.4蠕动泵。 6.3.4质谱条件 电喷雾电压：4kV； 调谐滤镜电压：70V； 脱溶剂管温度：250℃； 雾化气流量：4L/min； 加热模块温度：350℃； 干燥气流量：10L/min； 单次质谱扫描时间：0.1s； 质谱谱图叠加次数：>20； 扫描模式：正离子模式： 扫描范围：m/=［M+H］±10dalton； 蠕动泵流速：10μl./min。 6.3.5分析步骤 6.3.5.1试样的溶解 做两份试料的平行测定。取少量试样，置于离心管中，加入1ml.无水甲醇，充分溶解，浓度约 为10mg/L。 6.3.5.2试样的测定 将6.3.5.1得到的试料溶液吸人进样针，连接到质谱仪进样系统，待仪器真空度低于2×10‘Pa 后利用蠕动泵将进样针内的溶液推人质谱仪离子源，采集正离子模式扫描的m/=240～243的信号 峰，输出相应的信号峰强度数据A24、A241、A242、A243。通过公式计算得到试样的D同位素丰度。 6.3.6分析结果的计算与表述 6.3.6.1不同D标记度的摩尔分数计算 (j=0.1,2,3)。 [A240=r laln X0.858 A241=.rlabnX0.127+r labiX0.858 A242=.rlaboX0.014+.rlabiX0.127+."lab2X0.858 ......(2) A243=.r labo X0.001+.r lab1 X0. 014+. lab2 X0.127+.r lab3 X0.858 [ = q+ r+ 1i+ 0q2 式中