ICS 65.020.20 LY B61 中华人民共和国林业行业标准 LY/T2428--2015 杉木组织培养育苗技术规程 Technical regulation for tissue culture of Cunninghamia lanceolata 2015-01-27发布 2015-05-01实施 国家林业局 发布 LX/T2428—2015 前言 本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。 本标准由福建省林业厅提出。 本标准由全国林木种子标准化技术委员会（SAC/TC115)归口。 本标准起草单位：福建省林业科学研究院、南京林业大学、福建省洋口国有林场、福建省将乐国有 林场。 本标准主要起草人：郑仁华、肖晖、施季森、黄金华、方禄明、李勇、谢汝根、叶代全、苏顺德、方扬辉。 L I LY/T2428--2015 杉木组织培养育苗技术规程 1范围 本标准规定了杉木组织培养育苗技术的外植体、培养基、接种、组织培养、移裁与苗木管理、苗木调 查和出圃、技术档案。 本标准适用于杉木组织培养育苗生产。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单适用于本文件。 GB/T6001 1育苗技术规程 LY/T1000 容器育苗技术 LY/T1882 林木组织培养育苗技术规程 3外植体 3.1 母株选择 外植体的供体母株应是杉木良种的优树原株或其无性系分株。 3.2外植体采集 3.2.1 来集时间 宜在春季或冬季晴好天气采集。 . 3.2.2采集部位及方法 母株根颈部或经截干处理的干基部15cm左右长的萌芽条，截取半木质化、生长健壮、无病虫害的 . 萌芽条作外植体。 3.2.3保藏 外植体采集后，宜用保湿材料包扎，用配备冰袋的塑料泡沫保鲜箱低温保藏，保藏期不宜超过2d～ 3 d. 3.3表面灭菌 3.3.1清洗 用中性洗洁剂溶液洗净外植体表面，用清水冲洗30min~60min。 3.3.2灭菌 在超净工作台中，用75%酒精浸泡外植体8s~10s，倒去酒精后用无菌水漂洗1次；再用0.1%升 1 LY/T2428—2015 汞加3滴～5滴表面活性剂吐温一20浸没外植体，并不断轻摇以除去气泡，时间宜控制在6min～ 10min，倒去升汞溶液后，用无菌水漂洗4次5次，每次5min。 4培养基 4.1培养基类别 培养基分为诱导培养基、继代培养基和生根培养基，配方见附录A。 4.2培养基配制 培养基配制方法见LY/T1882。 5接种 5.1准备 5.1.1接种人员保洁 接种操作人员进入接种室前，在缓冲间更换拖鞋，穿接种服，戴帽子、口罩，用洗洁剂洗净手。 5.1.2 物品灭菌 接种器械、接种器皿、纱布等物品使用前应先进行湿热灭菌，在蒸汽压力为0.105MPa、温度121℃ 的条件下，灭菌时间为15min20min。 5.1.3接种室灭菌 按如下步骤进行接种室灭菌： 接种人员先打开超净工作台、接种室和缓冲间的紫外灯进行灭菌30min，在关闭紫外灯 a) 15min后人员方可进人接种。 接种人员对超净工作台上的工具、台面和两侧挡板用75%酒精或0.1%新洁尔灭进行擦拭灭 b) 菌，灭菌后对超净工作台开机通风30min。 在开始接种前15min打开接种用电热灭菌器。 5.1.4母瓶和培养基准备 对母瓶进行检查，发现污染、裂瓶、裂盖立即剔除。母瓶和转接培养容器用75%酒精表面擦拭灭菌 后，置于超净工作台边备用。 5.2接种操作 5.2.1消毒 接种人员在接种操作前用75%酒精对手部进行擦拭消毒。 5.2.2灭菌 接种操作过程要对接种器械进行灭菌。使用过的器血要更换，使用过的刀、剪、镊子等接种器械用 75%酒精浸湿的无菌纱布擦净后，重新灭菌后晾放备用，避免交叉污染。灭菌选用下列方法之一： a）使用酒精灯灭菌，接种器械在酒精灯火焰外焰上灼烧10s以上。 2 LY/T2428—2015 b）使用电热灭菌器灭菌，接种器械插人280℃～290℃的导热石英珠中灭菌15s以上。 5.2.3接种方法 接种操作时接种器械在接种器血的斜上方操作，将培养材料切割后接种到培养基上。接种材料与 培养基要接触良好，深浅适中，分布均匀。接种后及时盖好容器盖，注明品种代号、培养基类型、人员编 号和接种日期。 5.2.4接种后处理 熄灭酒精灯或关闭电热灭菌器、清洁超净工作台和接种室，最后关闭超净工作台及电源。 6组织培养 6.1诱导培养 6.1.1外植体接种 外植体灭菌后切成1.0cm~1.5cm茎段，垂直或斜插接种到诱导培养基。 6.1.2 2芽诱导 在诱导培养基中诱导出芽后转接至继代培养基。 6.1.3培养条件 培养室的温度控制在25℃士2℃。接种后需暗培养4d6d，再转人光照培养。光照培养每天光 照时间为12h～14h，光照强度为15001x~2000lx。 6.2继代培养 6.2.1继代接种 将外植体诱导出的芽或继代增殖的芽切割后，接种到继代培养基；250mL培养瓶接种量为丛生芽 不少于6丛/瓶或芽数不少于12个/瓶。 6.2.2 继代周期 每隔30d～35d将继代苗转接至新鲜培养基，培养条件见6.1.3。 6.2.3 3继代苗质量要求 继代苗质量要求如下： a）叶色墨绿或灰绿，茎叶无玻璃化、白化、褐化。 b）继代增殖系数大于2.0。 c) 茎叶切口无烫伤。 d）无污染。 6.2.4 4继代培养代数 继代培养控制在25代内。 3