ICS 67.040 LS X 11 中华人民共和国粮食行业标准 LS/T 6127—2017 粮油检验 粮食中脱氧雪腐镰刀菌 烯醇的测定 超高效液相色谱法 Inspection of grain and oils-Determination of deoxynivalenol in grains- Ultra-high performance liquid chromatography 2017-10-27发布 2017-12-20实施 国家粮食局 发布 LS/T6127—2017 前言 本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。 本标准由国家粮食局提出。 本标准由全国粮油标准化技术委员会（SAT/TC270）归口。 本标准起草单位：国家粮食局科学研究院、吉林省粮油卫生检验监测站、安徽国家粮食质量监测中 心、北京农业质量标准与检测技术研究中心。 本标准主要起草人：谢刚、李丽、黎睿、叶金、王松雪、徐振斌、胡斌、崔华、吴宇、辛媛媛、陆安祥。 LS/T6127—2017 粮油检验粮食中脱氧雪腐镰刀菌 烯醇的测定超高效液相色谱法 1范围 本标准规定了粮食及其制品中脱氧雪腐镰刀菌烯醇超高效液相色谱法测定的原理、试剂与仪器设 备、分析步骤、结果计算等内容。 本标准适用于粮食及其制品中脱氧雪腐镰刀菌烯醇的测定。 本标准方法脱氧雪腐镰刀菌烯醇的检出限为0.05mg/kg，定量限为0.15mg/kg。 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T602化学试剂杂质测定用标准溶液的制备 GB/T5491粮食、油料检验扦样、分样法 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 3原理 经过水提取试样中的脱氧雪腐镰刀菌烯醇，免疫亲和柱净化、富集后，用超高效液相色谱紫外检测 器测定，外标法定量。 4 试剂与仪器设备 除另有规定外，所用试剂均为分析纯，实验用水应符合GB/T6682中一级水的要求。 4.1试剂 4.1.1甲醇(CH:OH)：色谱纯。 4.1.2乙腈(CHCN)：色谱纯。 4.1.3 聚乙二醇（相对分子量8000）：分析纯。 4.1.4乙腈十水（10十90）：取10mL乙腈（4.1.2）加人90mL水。 其他试剂符合GB/T602的要求。 4.2标准品 4.2.1脱氧雪腐镰刀菌烯醇标准品：纯度≥99%；或经国家认证并授予标准物质证书的标准物质。 4.2.2标准储备液：准确称取脱氧雪腐镰刀菌烯醇标准品（4.2.1)1mg（准确至0.01mg），用乙腈溶解并 定容至10mL，配成浓度为100mg/L的标准储备液，一20℃避光保存。 4.2.3标准工作液：根据使用需要，准确移取适量的脱氧雪腐镰刀菌烯醇标准品储备液（4.2.2），用流动 相定容至10mL，分别配成浓度为0.1mg/L、0.2mg/L、0.5mg/L、1mg/L、2mg/L、5mg/L的标准工 1 LS/T6127—2017 作液。4℃避光密封保存，有效期一周。 4.3材料与仪器设备 4.3.1脱氧雪腐镰刀菌烯醇免疫亲和柱。 4.3.2 2定性滤纸：Φ12cmWhatman4号，或性能相当者。 4.3.3 3玻璃纤维滤纸：9cmWhatmanGF/A，或性能相当者。 4.3.4滤膜：0.22μm孔径，有机相。 4.3.5 注射器：10mL。 4.3.6 离心管：50mL。 4.3.7 三角瓶：250mL。 4.3.8 量简。 4.3.9 高速粉碎机。 4.3.10 高速均质器：转速6500r/min~24000r/min。 4.3.11 氮气吹干仪。 4.3.12 天平：感量0.1g和0.01mg。 4.3.13 离心机：转速≥5000r/min。 4.3.14 调速多用振荡器（振荡频率≥150次）。 4.3.15 空气压力泵。 4.3.16 试验筛：1mm孔径。 4.3.17 液相色谱柱：C18柱（柱长50mm或100mm，柱内径2.1mm，填料粒径1.7μm），或性能相 当者。 4.3.18 超高效液相色谱仪：包括超高效液相色谱仪、超高压液相色谱仪和超高速液相色谱仪，配备 PDA或紫外检测器和数据处理系统。 色谱参考条件： 色谱柱：C18柱（4.3.17）。 流动相：A：乙腈（4.1.2)，B：水；等度洗脱，A：B=10：90。 流速：0.1mL/min。 紫外检测波长218nm。 进样量：10μL。 柱温：25℃。 5分析步骤 5.1扦样与分样 按GB5491执行，在采样过程中，注意防止样品污染。 5.2样品制备 5.2.1提取 样品用高速粉碎机（4.3.9）粉碎，过1mm孔径试验筛（4.3.16），混合均匀后，取有代表性样品不少 于500g，供检测用。准确称取25g（m，精确到0.1g）充分混匀的试样，置于均质杯或250mL三角瓶 中，加入5.0g聚乙二醇（4.1.3)和100mL(V,）水，高速均质提取2min，或者使用调速多用振荡器（4.3.14) 振荡提取30min，用定性滤纸（4.3.2)过滤或转移25mL的提取液于50mL的离心管中，于5000r/min 2 LS/T6127—2017 离心5min。再用玻璃纤维滤纸（4.3.3)过滤或于7000r/min离心10min，滤液或离心液备用。 5.2.2净化 将免疫亲和柱（4.3.1)与10mL注射器（4.3.5）下端连接，准确移取2.0mL(V2）滤液于注射器中，将 空气压力泵（4.3.15）与注射器另一端连接，调节压力使溶液以药1滴/s的流速缓慢通过免疫亲和柱，直 柱。准确加入1.0mL(V)甲醇（4.1.1)洗脱，流速为1滴/s，收集全部洗脱液于样品瓶中，于55℃下氮气 吹至近干，准确加人1mL(V)乙腈/水溶液（4.1.4)溶解残渣，涡旋混合30s，过0.22μm滤膜（4.3.4)，作为待 测样液备用。 注：对于脱氧雪腐镰刀菌烯醇含量较高的样品，可将提取滤液进行适当稀释，以保证脱氧雪腐镶刀菌烯醇的含量不 超过免疫亲和柱的吸附容量。由于不同厂商提供的亲和柱操作程序可能有所不同，实际操作时，请参照免疫亲 和柱厂商提供的操作说明和程序使用。 5.3标准曲线的制作 脱氧雪腐镰刀菌烯醇标准工作液（4.2.3）由低到高注入快速高效液相色谱仪进行分析，以脱氧雪腐 镰刀菌烯醇浓度为横坐标，相对应色谱峰峰面积为纵坐标，建立标准工作曲线。 5.4试验溶液的测定 待测样液（5.2)中待测化合物的响应值应在标准曲线线性范围内，浓度超过线性范围的样品则应重 新按5.2进行处理符合要求后再进样分析。待测样液中脱氧雪腐镰刀菌烯醇的浓度为C1。液相色谱图 详见附录A。 5.5空白试验 不称取试样，按5.2的步骤做空白实验，分析得到空白试样中待测物的浓度为c。。 5.6 平行试样 按5.2的步骤，对同一试样进行平行试验测定。 6结果计算 试样中脱氧雪腐镰刀菌烯醇的含量按式（1）、式（2）计算： =(c1Co)×V X, = （1) W 其中： .(2) 式中： X,i C1—样液中脱氧雪腐镰刀菌烯醇的含量，单位为毫克每升(mg/L)； 空白试验脱氧雪腐镰刀菌烯醇的含量，单位为毫克每升（mg/L）； V样液最终定容体积，单位为毫升（mL）； W—最终样液所代表的试样质量，单位为克(g)； m试样称取量，单位为克(g)；