ICS 65.020 SN B 16 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T 5010—2017 燕麦花叶病毒检疫鉴定方法 Detection and identification of Oat mosaic virus 2017-11-07发布 2018-06-01实施 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 发布 SN/T5010—2017 前言 本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任 本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。 本标准起草单位：中华人民共和国珠海出人境检验检疫局、中国检验检疫科学研究院。 本标准主要起草人：张卫东、权永兵、黄永辉、张永江、迟远丽、廖力、徐淼锋、张芷欣。 S SN/T 5010—2017 燕麦花叶病毒检疫鉴定方法 1范围 本标准规定了燕麦花叶病毒血清学、分子生物学的检测和鉴定方法。 本标准适用于可能携带燕麦花叶病毒的苗木及其产品中燕麦花叶病毒的检疫鉴定。 2规范性引用文件 2 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本 文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 SN/T2122进出境植物及植物产品检疫抽样方法 SN/T2964植物病毒检测规范 3燕麦花叶病毒基本信息 学名：Oatmosaicvirus 中文名：燕麦花叶病毒 名：Soil-borneoatmosaic virus；Oatapicai mosaic virus;Avenavirus maculans；Marmorterrestre; Oatsoil-bornemosaicvirus;Oatmosaicpotyvirus 缩写：OMV 分类地位：马铃薯Y病毒科（Potyviridae），大麦黄花叶病毒属（Bymovirus）。 燕麦花叶病毒的其他信息参见附录A。 4方法原理 燕麦花叶病毒的血清学特性、分子生物学特性和生物学特性是本标准制定的主要依据。 5 仪器设备、设施和主要试剂 5.1 仪器设备 酶标仪、洗板机、PCR仪、荧光PCR仪、微量分光光度仪、生物安全柜、高压灭菌锅、培养箱、 天平（感量：0.001g）、冰箱、离心机、酸度计、水浴锅、电泳仪、凝胶成像系统。 5.2用具 移液器（1000μL、200μL、100μL、10μL、2.5μL）及配套枪头、酶联板、离心管、研钵、镊 子等。 5.3主要试剂 除另有规定外，所有试剂均为分析纯。主要试剂和缓冲液见附录B和附录C。 1 SN/T5010—2017 抽样和检测样品的制备 6 6.1抽样 抽样按照SN/T2122的规定执行。 6.2 2检测样品的制备 对于有症状的植物样品单独检测，重点选取表现症状种苗类样品的幼嫩叶片；对于无症状的样 品至少选取20株的幼嫩叶片进行混样检测。 检疫鉴定方法 7.1 DAS-ELISA检测 DAS-ELISA检测方案设计按照SN/T2964。在一次血清学检测试验中，设置2个阳性对照孔、 2个阴性对照孔、2个空白对照孔作为质量控制，并根据送检样品数量设置待检测样品孔数，要求每 个待测样品设两次重复。所有反应孔都安排在酶联板内部，防止边际效应的发生，影响检验结果的准 确性。 具体操作见附录B。 7.2 2RT-PCR检测 RT-PCR检测用健康的植物组织作阴性对照，用OMV作阳性对照，用ddH,O作空白对照，每个反 应体系设置两个平行样。 具体操作见附录C。 7.3 实时荧光RT-PCR检测 实时荧光RT-PCR检测用健康的植物组织作阴性对照，用OMV作阳性对照，用ddH,O作空白对 照，每个反应体系设置两个平行样。 具体操作见附录D。 8结果判定 样品经DAS-ELISA、普通RT-PCR或实时荧光RT-PCR检测为阴性时，可判定样品不携带燕麦花 叶病毒。 样品经DAS-ELISA、普通RT-PCR和实时荧光RT-PCR中两种方法的检测结果为阳性时，可判定 样品检出燕麦花叶病毒。一般是DAS-ELISA测定为阳性后，RT-PCR为阳性即可判定样品携带燕麦花 叶病毒。 9样品保存和复核 9.1样品的保存 经检验确定携带OMV的样品应在合适的条件下保存，病叶经液氮干燥后在80℃条件下保存。 2 SN/T5010—2017 9.2结果记录与资料保存 完整的实验记录包括：样品的来源、种类、时间，实验的时间、地点、方法和结果等，并要有 实验人员和审核人员签字。若是酶联免疫方法需有酶联免疫实验的原始数据，RT-PCR检测需附扩增 图谱。 S 3 SN/T5010—2017 附录A （资料性附录） 燕麦花叶病毒相关资料 A.1寄主范围 OMV的寄主明显地只局限于燕麦属（Avenaspp.），自然寄主包括燕麦AvenaSativa。 接种寄主：小麦Triticumaestivum、拜占庭燕麦Avenabyzantina、毛燕麦Avenastrigosa、大麦 Hordeumvulgare、狗尾草Setariaviridis。 A.2危害症状 OMV主要引起秋季播种的燕麦发病。间症状随着燕麦品种、病毒株系、土壤感染程度以及环 境条件的不同而有所不同。感染的植株在刚生成的新叶最早出现症状，呈现淡绿色条纹或者短条，主 要局限于内叶脉区域。随着新叶的生长，淡绿色区域逐渐变长并且扩展至2个～3个叶脉，从而形成 淡绿和暗绿相间的花叶症状，矮化是季节后期可见的最主要的症状。但是症状的发展随着病毒株系、 栽培品种以及栽培环境的不同而不同。实验中，OMV对燕麦品种Peniarth和Powys的开花影响不大， 但是谷物颗粒减少了25%，重量减产可以达到33%。在美国，Hebert等人的研究也发现，OMV可引起 耐病品种25%~50%、感病品种100%的产量损失。 注：引自中国国家有害生物检疫信息系统。 图A.1燕麦花叶病毒（OMV）在燕麦上引起的症状 A.3分布地区 美国、加拿大、新西兰、意大利、英国、法国、爱尔兰。 A.4传播方式 OMV通过禾谷多粘菌（Polymyxagramonis）以持久性方式传播，机械接种也能传播，种子不能传毒。 4