ICS 71.100.40 QB 分类号：Y43 备案号：58778-2017 中华人民共和国轻工行业标准 QB/T50952017 口腔清洁护理用品 牙膏中尿囊素的测定高效液相色谱法 Oral careand cleansingproducts- Determination of alantan in toothpastes- High performance liquid chromatography 2017-04-12发布 2017-10-01实施 中华人民共和国工业和信息化部 发布 QB/T5095—2017 前言 本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草。 本标准由中国轻工业联合会提出。 本标准由全国口腔护理用品标准化技术委员会牙膏分技术委员会（SAC/TC492/SC1）归口。 本标准起草单位：上海美加净日化有限公司、无限极（中国）有限公司、广州市倩采化妆品有限公 司、广州薇美姿实业有限公司。 本标准主要起草人：陈健芬、施裔磊、梁裕昊、黄金莲、徐春生、陈敏珊。 本标准为首次发布。 QB/T5095-2017 口腔清洁护理用品 牙膏中尿囊素的测定高效液相色谱法 1范围 本标准规定了高效液相色谱法测定牙膏中尿囊素的方法要点、试剂与标准物质、仪器、分析步骤、 结果计算、回收率、标准偏差和允许差。 本标准适用于牙膏、漱口水、牙粉中尿囊素含量的测定。 本标准尿囊素的检测限为0.08μg/mL，定量下限为0.20μg/mL。若取1.0g样品，尿囊素的最低检出 浓度为8mg/kg，最低定量浓度为20mg/kg。 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T6682一2008分析实验室用水规格和试验方法 3方法要点 将牙膏用水分散，超声波提取其中的尿囊素成分，然后离心分离并过滤处理，滤液用带紫外检测器 的高效液相色谱仪分析测定，外标法通过峰面积进行定量计算。 4试剂与标准物质 4.1一般规定 除非另有说明，在分析中仅适用确认为分析纯的试剂和水为GB/T6682一2008规定的一级水。 4.2试剂 4.2.1尿囊素对照品：纯度不大于99%。 4.2.2甲醇：HPLC级。 4.2.3磷酸二氢钾。 4.2.4滤膜：0.45μm，水相。 4.3标准储备液 称取尿囊素对照品10mg（精确至0.0001g），用水溶解并定容至100mL，摇匀，作为含尿囊素 100.0μg/mL的标准储备液。储备液于0℃～4℃避光条件下，可保存7天。 4.4标准工作液 将标准储备液用水逐级稀释，配制成浓度为1.0μg/mL、2.0μg/mL、2.5μg/mL、5.0μg/mL、10.0μg/mL 25.0μg/mL、50.0μg/mL、100.0μg/mL的标准工作液。 4.55mmol/L磷酸二氢钾缓冲溶液 称取磷酸二氢钾0.68g（精确至0.0001g），用水溶解并定容至1000mL，经0.45μm水相微孔滤膜 过滤，并超声脱气10min。 5仪器 5.1高效液相色谱仪：配紫外检测器。 5.2DionexAcclaimTM120型C18色谱柱（4.6mmx250mm，5μm），或相当的色谱柱。 1 QB/T5095-2017 5.3 磁力搅拌器。 5.4 超声波清洗器。 5.5离心机。 5.6 分析天平： 精度0.0001g。 分析步骤 6 6.1 试样处理 牙膏试样先挤去大约20mm，再称取1g（精确至0.0001g）试样于100mL容量瓶中，用水溶解并 定容至刻度。磁力搅拌至牙膏分散均匀，超声萃取10min后，将试样溶液装入10mL离心管中，4000r/min 以上离心分离10min。冷却至室温后，上清液经0.45μm水相滤膜过滤，备用。 注：样品称取量可根据牙膏中尿囊素的含量而定，此处尿囊素含量的参考值为1500mg/kg。 6.2测定 6.2.1色谱条件参考 按照表1设定液相色谱条件。 表1 液相色谱条件 仪器参数 设定值 紫外检测器波长/nm 210 进样量/μL 20 柱温/℃ 30 尿囊素对照品用等度洗脱方式分析，洗脱程序见表2。 表2 对照品参考程序 流量/（mL/min） 0.5 流动相 5mmol/L磷酸二氢钾：甲醇=95：5（体积分数） 牙膏试样用梯度洗脱方式分析， 洗脱程序见表3。 表3 牙膏试样参考程序 时间/min A：5mmol/L磷酸二氢钾/% B：甲醇/% 流量/（mL/min） 0.5 95.0 5.0 0 10.00 0.5 95.0 5.0 1.0 55.0 45.0 11.00 19.00 1.0 55.0 45.0 20.00 0.5 95.0 5.0 30.00 0.5 95.0 5.0 6.2.2 标准工作曲线 准确吸取4.4制备的标准工作液20μL，分别注入高效液相色谱仪， 按照6.2.1的色谱条件进行测定 以尿囊素的浓度为X轴，其相应的峰面积为Y轴，绘制标准工作曲线 尿囊素标准溶液的液相色谱图，参照附录中的图A.1。 2 QB/T5095—2017 6.2.3测定 准确吸取20μL经6.1处理的试样溶液，注入高效液相色谱仪测定尿囊素的峰面积，由标准工作曲线 找出试样溶液中尿囊素的浓度。 试样溶液的液相色谱图，参照附录A中的图A.2。 7 结果计算 样品中尿囊素的含量X（mg/kg）按公式（1）计算： 1000 (1) m 1000 式中： X 试样中尿囊素的含量，单位为毫克每千克（mg/kg）； 试样溶液中对应的尿囊素的浓度，单位为微克每毫升（μg/mL）； c V 试样定容体积，单位为毫升（mL）； 试样的质量，单位为克（g）； m N 稀释倍数； K 对照品中尿囊素的纯度。 8回收率 尿囊素在添加浓度4.0μg/mL~43.0μg/mL范围内，本标准方法的回收率为97.6%~103.6%。 9标准偏差 本标准方法的相对标准偏差小于5%（n=5）。 10允许差 在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不应超过算数平均值的10%，取其算术平均值 作为测定结果。 3 QB/T5095-2017 附录A （资料性附录） 液相色谱参考谱图 50.0 5.653 40.0 吸300 光临 1·5.230 10.0 00 10.0 00 20 60 10 0 8.0 [o [min] 图A.1 对照品液相色谱图 100 2-#-5650 80. 60 1 -5.250 Im 40 三 20 .1 -10 0.0 50 10 0 15 0 20.0 25.0 300 (间 [min] 图A.2 牙膏试样液相色谱图 4 QB/T5095-2017 附录A （资料性附录） 液相色谱参考谱图 50.0 2-尿囊素-5.653 40.0 吸30.0 光度 10.0 0.0 -10.0 0.0 2.0 4.0 6.0 8.0 10.0 时间[min] 图A.1 对照品液相色谱图 100 2-尿类素-5.650 80 -5.250 (mAU) 40 20 0 -10 0.0 5.0 10.0 15.0 20.0 25.0 30.0 时间[min] 图A.2 牙膏试样液相色谱图