QB ICS67.180 分类号：Y69 备案号：57053-2017 中华人民共和国轻工行业标准 QB/T5030—2017 溶菌酶 Lysozyme 2017-01-09发布 2017-07-01实施 中华人民共和国工业和信息化部 发布 QB/T5030-2017 前言 本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。 本标准由中国轻工联合会提出。 本标准由全国食品发酵标准化中心归口。 本标准起草单位：浙江艾杰斯生物科技有限公司、中国食品发酵工业研究院、大连韩伟食品有限公 司。 本标准主要起草人：张蔚、潘宏涛、王洪荣、王首锋、刘捷。 本标准为首次发布。 QB/T5030-2017 溶菌酶 1范围 本标准规定了溶菌酶的产品分类、要求、试验方法、检验规则和标志、包装、运输及贮存。 本标准适用于微生物源或从蛋清中经提取、精制等工艺制得的溶菌酶。 规范性引用文件 2 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T191 包装储运图示标志 GB/T601 化学试剂标准滴定溶液的制备 GB/T603 化学试剂试验方法中所用制剂及制品的制备 GB5009.3 食品安全国家标准食品中水分的测定 GB5009.4 食品安全国家标准食品中灰分的测定 GB/T6682一2008分析实验室用水规格和试验方法 GB7718 食品安全国家标准预包装食品标签通则 3产品分类 按产品状态分为固体和液体。 4要求 4.1 感官要求 应符合表1的规定。 表1 感官要求 项 目 固体 液体 状 态 粉末 液态 色 泽 白色至淡黄色 浅黄色至深褐色 杂 质 无正常视力可见外来杂质 4.2理化要求 应符合表2的规定。 表2理化要求 要 求 项 目 固体 液体 酶活力/[/mg(mL)] 符合标示值 水分/% ≤ 6 灰分/% ≤ 1.5 0.3 pH 3.0~7.0 QB/T5030-2017 注：不同来源的溶菌酶抗菌谱范围不同，可参照附录A给出的方法验证溶菌酶对不同菌的抑菌能力。 5试验方法 本方法中所用的水 在未注明其他要求时，应符合GB/T6682-2008中二 级水的规格，所用试剂， 在未注明其他规格时，均指分析纯（AR）。分析中所用标准滴定溶液、制剂及制品，在没有注明其他 要求时，均按GB/T601、GBT603的规定制备。 5.1感官 取适量试样，在自然光线下，又 观察试样的色泽、状态和有无外来杂质， 并记录 5.2酶活力 5.2.1原理 溶菌可水解细菌的细胞壁，造成藤黄微球菌的游解而引起溶液吸光度值的降低。 个溶菌酶活力单位定义为25C，pH62条件下，使用藤黄微球菌悬浊液在450nm处每分钟引起吸 光度变化0.001所需溶菌酶的量 5.2.2试剂和溶液 5.2.2.1藤黄微球菌 ATCC4698或CICC10680 5.2.2.2溶菌酶标准品 相同来源的商品化溶菌酶标准品。 5.2.2.3磷酸盐缓冲液（0.1mol/L，pH6.2） 称取11.70g磷酸二氢钠（NaH2PO42H2O）、7.86g磷酸氢二钠（Na2HPO412H2O）及0.372g乙二 胺四乙酸二钠（EDTA-2Na）溶于经高压灭菌的水中并稀释定容至1ODOmL。调整沪溶液pH至 6.2±0.1。 注：用小份缓冲溶液检查pH，以避免缓冲溶液被污染。如果需要，道过加入更多的磷酸二氧钠落液或磷酸氢二钠溶 液调整pH。 5.2.2.4底物溶液 用磷酸盐缓冲液 备50mL藤黄微球菌悬浊液。使用前，底物于37c培养30mm 该底物溶液室温 下可稳定2h。以磷酸盐缓冲液调分光光度计零点，然后测定底物溶液的吸光度， 450 nm下读数应为 0.70±0.1。 5.2.3仪器和设备 5.2.3.1分光光 度计：精 度±0.001。 5.2.3.2pH计。 注：所用的器血应保持无菌 保证工作环 境的清洁。 5.2.4分析步骤 5.2.4.1试样溶液的制 准确称取（100.0士01）mg试样，置于50mL容量瓶中，加人磷酸盐缓冲液搅拌溶解并稀释定容， 充分混匀。再转移3mL上述试样制备溶液至100mL容量瓶中，用磷酸盐缓冲液搅拌溶解并稀释定容。 5.2.4.2标准溶液的制备 精确称取50mg溶菌酶标准品于50mL容量瓶中，加入磷酸盐缓冲液搅拌溶解并稀释定容，充分 混匀（如果需要，冷冻该溶液以备后续测定）。转移3mL上述标准制备溶液至100mL容量瓶中，用磷 酸盐缓冲液搅拌溶解并稀释定容。 5.2.4.3测定 取3份标准溶液和3份试样溶液进行测定。 2 QB/T5030—2017 25℃室温下，将装有磷酸盐缓冲液的1cm比色血放入分光光度计，调整吸光度零点。吸2.9mL 底物溶液于比色血，最初450nm处吸光度应为0.70土0.13 min之内初始吸光度值变化不大于0.003 时，方可开始测定。吸0.1mL标准溶液加入底物溶液，充分混合。记录3min吸光度值的变化，每15s 记录1次吸光值。每分钟吸光度值变化应在0.03一0.08之间，若不在要求范围需调整试样溶液的浓度。 重复操作测定试样溶液。 反应1min后稳定，计算时忽略最初1min的读数 5.2.5结果计算 酶活力X值按公式（1计算 数值以u/mg（mL）表示： A-42 .(1) X 2xm×0.001 式中： 试样的酶活力 单位为u/mg(ml） Xi 试样在450mm 处反应1min时的吸光度： A1 试样在450mm 处反应3min时的吸光度； A2 吸光度读数所用的时间间隔，单位为分 2 用于分析的试样制备溶液中的浴菌酶质量，单位为毫克（mg）或毫升（mL）： m 0.001 由单位溶菌酶每分钟引起的吸光度降低的值 5.2.6精密度 在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不应超过算术平均值的109 5.3水分 按GB5009.3规定的方法测定。 5.4灰分 按GB5009.4规定的方法测定 5.5pH 5.5.1仪器和设备 酸度计：精度0.01 1pH备有玻璃电极和甘汞电极（或复合电极 5.5.2分析步骤 5.5.2.1测定 按仪器使用说 明书调试和校正酸度计。 用经高压灭菌 的水配制15g/L的溶菌酶待测液（液体产品直接测定）。用水冲洗电极探头，用滤纸 轻轻吸干，将电极插入待测液中，调节温度调节器，使仪器指示温度与待测液温度相同，稳定后读数。 所得结果表示至小数点后1位 5.5.3精密度 在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不应超过算术平均值的1%。 6 检验规则 组批 同一班次、同一工艺、同一包装线当天包装出厂（或入库的），质量均一的产品为一批。 6.2取样与抽样 6.2.1采用适宜的方法保证取样具有代表性，保证取样部位和取样瓶的清洁。对用于微生物试验的取 样，应使用无菌操作。 6.2.2根据批量大小，按表3规定随机抽取样本，取样总量不少于10g（或10mL）。 3 QB/T5030-2017 表3溶菌酶抽样表 批量/（桶或箱） 样本量/（桶或袋） <50 2 50~500 3 >500 4 注：批量是指批中所包含的单位商品数，单位为桶或箱。样本量是指样本中所包含的样本单位数，单位为桶或袋 6.3 出厂检验 6.3.1成品出厂前应经检验部门逐批检验。检验合格方可出厂。 6.3.2出厂检验项目为感官、酶活力、水分（固体）。 6.4型式检验 检验项目为本标准要求中规定的全部项目。一般情况下，型式检验半年进行1次。有下列情况之一 时，亦应进行型式检验： 原辅材料有较大变化时： b) 更改关键工艺或设备时： c) 新试制的产品或正常生产的产品停产3个月后，重新恢复生产时； d) 出厂检验与上次型式检验结果有较大差异时； e） 国家质量监督检验机构按有关规定需要抽检时。 6.5判定规则 检验结果若有感官或1项理化指标不合格，可加倍抽样进行复验，以复检结果为准：若复检结果 仍有1项不合格，判该批次产品为不合格。 标志、包装、运输、贮存 7 7.1标志 食品用溶菌酶标签应符合GB7718的规定。包装储运标识应符合GB/T191的规定。 7.2包装 包装容器应整洁、卫生、无破损，并应符合相应的规定。 7.3运输 运输工具应清洁卫生。不应与有毒、有害、有腐蚀性和含有异味的物品混装、混运，应避免受潮、 受压、曝晒。装卸时，应轻拿轻放，不应直接钩扎外包装。 7.4存 本品应储存在阴凉、干燥、清洁、低温的仓库内，严防日晒雨淋，严禁火种。不应与有毒、有害、 有腐蚀性和含有异味的物品放在一起。 QB/T5030-2017 附录A （资料性附录） 溶菌酶的抑菌作用 A.1试剂和溶液 A.1.1 供试菌：金黄色葡萄球菌（Staphylococcusaureus，ATCC6538）、大肠埃希氏菌（Escherichiacoli， ATCC11229)。 A.1.2 胰蛋白陈（生化试剂）。 A.1.3 琼脂粉（生化试剂）。 A.1.4 酵母提取物（生化试剂）。 A.1.5 氯化钠。 A.1.6 1mol/L氢氧化钠溶液。 A. 1. 7 无菌生理盐水。 A.2 仪器和设备 A. 2. 1 电子天平。 A. 2. 2 超净工作台。 A.2.3 高压灭菌锅。 A.2. 4 恒温培养箱。 A.2.5 摇床。 A.2.6 手持比浊计。 A.2.7 微量移液器。 A.2.8 游标卡尺。 A.2.9 培养皿（90mm）。 A.2.10 无菌枪头盒（配有10μL，200μL，1000μL三种枪头）。 A.2.11 无菌棉签。 A.2.12 无菌打孔器。 A.2.