ICS 71.100.40 QB CCS Y43 中华人民共和国轻工行业标准 QB/T5602-2021 口腔清洁护理用品 牙膏中表没食子儿茶 素没食子酸酯的测定 高效液相色谱法 Oral care and cleansing products - Determination of epigallocatechin gallate in toothpastes - High performance liquid chromatography 2021-05-17发布 2021-10-01实施 中华人民共和国工业和信息化部 发布 QB/T5602-2021 前言 本文件按照GB/T1.1一2020《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 本文件由中国轻工业联合会提出。 本文件由全国口腔护理用品标准化技术委员会牙膏分技术委员会（SAC/TC492/SC1）归口。 本文件起草单位：广州薇美姿实业有限公司、好来化工（中山）有限公司、黑龙江省轻工科学研究 院、广州质量监督检测研究院、浙江方圆检测集团股份有限公司。 本文件主要起草人：陈敏珊、何琪莹、李鑫宇、陶丽、周康、李平、黄焕贤、路崴、柳华春、税钮、 夏泽敏、杨铭。 本文件为首次发布。 I QB/T5602—2021 口腔清洁护理用品3 牙膏中表没食子儿茶素没食子酸酯的测定 高效液相色谱法 1范围 本文件描述了采用高效液相色谱法测定牙膏中表没食子儿茶素没食子酸酯（Epigallocatechin gallate，EGCG）的术语和定义、原理、试剂和材料、仪器和设备、分析步骤、结果计算、检出限和定 量限、回收率和精密度、允许差。 本文件适用于样品采用高效液相色谱仪分离，运用色谱法和质谱法测定牙膏中表没食子儿茶素没食 子酸酯的含量。当样品溶液浓度低于0.5μg/mL或者有干扰存在时，需用质谱法进一步判定。 2规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本 文件。 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 GB/T35919口腔清洁护理用品分类和术语 3术语和定义 GB/T35919界定的术语和定义适用于本文件。 4色谱法 4.1原理 试样经含乙二胺四乙酸二钠及抗坏血酸的20%甲醇水溶液提取，过滤后，用高效液相色谱仪测定表 没食子儿茶素没食子酸酯，以紫外检测器检测，外标法定量。 4.2试剂和材料 4.2.1除另有规定外，本试验用水均为GB/T6682中规定的一级水，所有试剂均为分析纯。 4.2.2表没食子儿茶素没食子酸酯（EGCG）对照品（CAS号：989-51-5）：纯度≥92%，或购买经国 家认证并授予标准物质证书的标准物质，信息如下。 化学名称：（2R,3R）-5,7-二羟基-2-（3,4,5-三羟基苯基）苯并吡喃-3-基-3,4,5-三羟基苯甲酸酯。 分子式：C22H18O11。 相对分子质量：459.37（按2013年国际相对原子质量）。 结构式见图1。 1 QB/T5602—2021 OH HO OH OH OH OH OH 图1结构式 4.2.3，乙：色谱纯。 4.2.4甲醇：色谱纯。 4.2.5乙酸。 4.2.6乙二胺四乙酸二钠（EDTA-2Na）溶液：10mg/mL（现配）。 4.2.7# 抗坏血酸溶液：10mg/mL（现配） 4.2.8 稳定溶液：分别将25mLEDTA-2Na溶液（4.2.6）、25mL抗坏血酸溶液（4.2.7）、50mL乙 腈（4.2.3）加入500mL容量瓶中，用水定容至刻度，摇匀。 4.2.9 液相色谱流动相： 流动相A：分别将90mL乙睛（4.2.3）、20mL乙酸（4.2.5）、2mLEDTA-2Na溶液（4.2.6） 加入1000mL容量瓶中，用水定容至刻度，摇匀。溶液应过0.45μm滤膜。 流动相B：分别将800mL乙腈（4.2.3）、20mL乙酸（4.2.5）、2mLEDTA-2Na溶液（4.2.6） 加入1000mL容量瓶中，用水定容至刻度，摇匀。溶液应过0.45um滤膜。 4.2.10表没食子儿茶素没食子酸酯（EGCG）标准储备液：准确称取EGCG标准品（4.2.2）10mg（精 确至0.0001g）于10mL容量瓶中，用稳定溶液（4.2.8）定容至刻度，混匀。 4.2.11表没食子儿茶素没食子酸酯（EGCG）标准工作溶液：用稳定溶液（4.2.8）将标准储备溶液 （4.2.10）分别配成浓度为0.5μg/mL、2.5μg/mL、10.0μg/mL、25.0μg/mL、50.0μg/mL的标准工作溶 液。 4.3仪器和设备 4.3.1 高效液相色谱仪：配紫外检测器或二极管阵列检测器（DAD）。 4.3.2 分析天平：精度为0.0001g。 4.3.3 涡旋振荡器。 4.3.4 超声波清洗器。 4.3.5 离心机：转速5000r/min。 4.3.6 滤膜：孔径为0.45um的聚四氟乙烯过滤膜。 4.4分析步骤 4.4.1 试样处理 将牙膏试样先挤去大约20mm后，称取约2g试样（精确至0.001g）置于25mL容量瓶中，加入20mL 稳定溶液（4.2.8），涡旋震荡至分散均匀，再用甲醇（4.2.4）定容，涡旋混匀后超声提取15min，取摇 2 QB/T5602—2021 匀后适量溶液在离心机转速5000r/min条件下离心10min，取适量上清液经0.45um聚四氟乙烯滤膜过 滤，供高效液相色谱测定。 4.4.2 参考色谱条件 4.4.2.1.1 色谱柱：Ck色谱柱（5μm，250mm×4.6mm） 或等效色谱柱 4. 4. 2.2 检测波长/278nm 4.4.2.3 流量：1mL/min。 4.4.2.4 柱温：35℃。 4.4.2.5 进样量： 20μL。 4.4.2.6 梯度洗脱程序见表1。 表1洗脱程序 时间 流动相A 流动相B min % % 0 95 5 5 95 5 10 70 30 10.5 40 60 15 40 60 15.5 95 19 95 4.4.3测定 4. 4.3.1 标准曲线绘制 分别将标准工作溶液（4.2.11）注入高效液相色谱仪，在（4.4.2）的色谱条件下测定标准溶液，以 浓度为横坐标， 4.4.3.2 样品测定 将按（4.4.1） 处理好的待测试样溶液注入高效液相色谱仪，在（4.4.2）的色谱条件下进行测定，采 用外标法定量。含EGCG牙膏样品的高效液相色谱图见附录A中图A.2 试样溶液中EGCG的响应值应在标准曲线的线性范围内，超过线性范围则应稀释后再进行分析。 4.5结果计算 试样中表没食子儿茶素没食子酸酯的含量X按公式（1）计算 CxVxNxK 1000 ...(1) m 1000 式中： X一试样中EGCG含量，单位为毫克每千克（mg/kg）； 由标准曲线查出试样溶液中EGCG的浓度，单位微克每毫升（μg/mL）； V—样品最终定容体积，单位为毫升（mL）； N稀释倍数； 3