以正式出版文本为准中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T 5222 —2019 蜂蜜中 20 种全氟烷基化合物的测定 液相色谱 - 串联质谱法 Determination of 20 perfluorinated alkyl substances in honey —— LC-MS/MS method 2019 -12-27发布 2020 -07-01 实施ICS 67.050 C 53 中华人民共和国海关总署 发 布以正式出版文本为准以正式出版文本为准 SN/T 5222—2019I前 言 本标准按照 GB/T 1.1— 2009 给出的规则起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。本标准由中华人民共和国海关总署提出并归口。本标准起草单位：中国检验检疫科学研究院。本标准主要起草人：彭涛、陈辉、代汉慧、胡雪艳、何建丽、李帅、范春林。以正式出版文本为准以正式出版文本为准1 SN/T 5222—2019蜂蜜中 20 种全氟烷基化合物的测定液相色谱 - 质谱 / 质谱法 1 范围 本标准规定了蜂蜜中 20 种全氟烷基化合物的液相色谱 - 质谱 / 质谱方法。 本标准适用于蜂蜜全氟丁酸（PFBA） 、全氟戊酸（PFPeA） 、全氟丁烷磺酸（PFBS） 、全氟己酸 （PFHxA） 、全氟戊烷磺酸（PFPeS） 、全氟庚酸（PFHpA） 、全氟己烷磺酸（PFHxS） 、全氟庚烷磺酸（PFHpS） 、全氟辛酸（PFOA） 、全氟辛烷磺酸（PFOS） 、全氟壬酸（PFNA） 、全氟壬烷磺酸（PFNS） 、 全氟癸酸（PFDA） 、全氟癸烷磺酸（PFDS） 、全氟十一烷酸（PFUdA） 、全氟十二烷酸（PFDoA） 、 全氟十三烷酸（PFTrDA） 、全氟十四烷酸（PFTeDA） 、全氟十六烷酸（PFHxDA） 、全氟十八烷酸 （PFODA）的测定。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB / T 6682 分析实验室用水规格和试验方法。 3 方法提要 蜂蜜中的全氟烷基化合物经含 1.5% 甲酸乙腈溶液提取，PSA 和 C18 填料净化，液相色谱 - 串联 质谱仪检测和确证，基质匹配外标法或基质匹配内标法进行定量。 4 试剂和材料 除另有说明外，所用试剂均为分析纯，水采用 GB/T 6682 规定的一级水。 4.1 乙腈：色谱纯。 4.2 甲醇：色谱纯。 4.3 甲酸：色谱纯。 4.4 无水硫酸镁。 4.5 氯化钠。 4.6 乙酸铵：优级纯。 4.7 乙酸铵水溶液（5 mmol / L） ：称取 0.385g 乙酸铵（4.6） ，用水溶解并定容至 1 000 ml。 4.8 乙酸铵甲醇溶液（5 mmol / L） ：称取 0.385g 乙酸铵（4.6） ，用甲醇溶解并定容至 1 000 ml。 4.9 1.5% 甲酸乙腈溶液：准确吸取 1.5mL 甲酸（4.3） ，用乙腈定容至 100 mL，混匀。 4.10 标准物质：全氟烷基化合物标准品（具体信息见附录 A） ，纯度均大于 98%。 4.11 标准储备液的配制：准确称取适量全氟化合物标准物质（4.10） ，用甲醇溶解、定容，分别配 制成浓度为 50 mg / L 的标准储备溶液。 4.12 混合标准溶液的配制：准确量取 20 种 PFASs 标准溶液（50 mg/L）各 200 μL，置于 10 mL 容量 瓶中，用甲醇定容至刻度，配制质量浓度为 1 mg / L 的混合标准储备液，于 4℃冰箱中避光保存。以正式出版文本为准2 SN/T 5222—20194.13 同位素内标混合储备溶液：13C4- 全氟丁酸（MPFBA） 、13C2- 全氟己酸（MPFHxA） 、18O2-全 氟己烷磺酸钠（MPFHxS） 、13C4- 全氟辛酸（MPFOA） 、13C4- 全氟辛烷磺酸钠（MPFOS） 、13C5- 全氟 壬酸（MPFNA） 、13C2- 全氟癸酸（MPFDA） 、13C2- 全氟十一烷酸（MPFUdA） 、13C2- 全氟十二烷酸 （MPFDoA）混合内标储备液的浓度为 2 μg / mL。 4.14 含有同位素内标的混合基质标准工作溶液：根据需要吸取适量的混合标准溶液（4.12） ，用空 白样品基质溶液配制成 0.2 μg / L、0.4 μg / L、1.0 μg / L、2.0 μg / L、4.0 μg / L 和 10.0 μg / L 的混合标准工 作溶液，同时加入混合内标溶液，内标的浓度为 4 μg / L，使用前配制。 4.15 N- 丙基乙二胺固相吸附剂（primary secondary amine，PSA） 。 4.16 十八烷基硅烷吸附剂（C18）。 4.17 微孔滤膜：0.22 μm。 4.18 聚丙烯离心管：15 mL 和 50 mL，具塞。 5 仪器和设备 5.1 液相色谱 - 质谱 / 质谱联用仪：配有电喷雾离子源（ESI） 。 5.2 涡旋振荡混匀器。 5.3 水平振荡器。 5.4 高速冷冻离心机：10 000r / min。 5.5 氮吹仪。 5.6 分析天平：感量 0.1mg 和 0.001g。 6 测定步骤 6.1 提取和净化 称取 5.0 g（精确至 0.01g）蜂蜜样品于 50 mL 聚丙烯离心管中，依次加入 5 μL 2 mg / L 混合内标 标准溶液（4.13） 、5 mL 水和 10 mL 含 1.5%（v / v）甲酸的乙腈溶液（4.9） ，漩涡 1 min 后，加入 1 g 氯化钠和 4 g 无水硫酸镁，振摇 10 min 后，以 10000 r / min 离心 10 min。 取上层乙腈层转移至装有 40 mg PSA、80 mg C18 填料和 900 mg 无水硫酸镁的 15 mL 离心管中， 振摇 10 min 后，以 10000 r / min 离心 10 min，移出上清液并用乙腈定容至 10 mL，然后移取 4 mL 上清液（相当于 2.0 g 提取液） ，于 40℃氮吹至干，用 1 mL 甲醇定容后，过 0.22 μm 滤膜（4.17） ，待 HPLC-MS/MS 分析。 为防止引入高背景值，实验过程避免使用聚四氟乙烯材质的器皿。 6.2 测定 6.2.1 液相色谱条件 为降低液相色谱管道中引入的 PFAS 污染，将部分特氟龙材质管路替换为 PEEK 管路或不锈钢管 路。液相色谱条件如下： a）色谱柱：C18色谱柱，150 mm×2.1 mm（内径） ，3.0 μm，或相当者； b）柱温：40℃ ； c）进样量：10 µL； d）流动相、流速及梯度洗脱条件见表 1。以正式出版文本为准3 SN/T 5222—2019表 1 流动相、流速及梯度洗脱条件 时间 min 流速 µL/min 5 mmol/L 乙酸铵水溶液 % 5 mmol / L 乙酸铵甲醇溶液 % 0 300 90 10 3.0 300 70 30 13.0 300 0 100 14.0 300 90 10 20.0 300 90 10 6.2.2 质谱条件 质谱条件如下： a）离子化模式：电喷雾离子源（ESI） ，ESI-模式； b）扫描方式：多反应监测（MRM） ；c）分辨率：单位分辨率；d）其它参考条件参见附录 B。 6.2.3 定性测定 在相同实验条件下，样品中待测物质的保留时间，与基质标准溶液的保留时间偏差在 ±2.5% 之 内；每种化合物的质谱定性离子至少应包括一个母离子和一个子离子，且样品中各组分定性离子的相 对丰度与浓度接近的基质混合标准工作溶液中对应的定性离子的相对丰度进行比较，偏差不超过表 2规定的范围，则可判定为样品中存在对应的待测物。 表 2 定性确证时相对离子丰度的最大允许偏差 相对离子丰度 ＞ 50% ＞ 20% 至 50% ＞ 10% 至 20% ≤ 10% 允许的最大偏差 ±20% ±25% ±30% ±50% 6.2.4 定量测定 在仪器最佳条件下，对混合基质标准工作溶液进样。PFPeS、PFHpS 和 PFTrDA 未找到性质相同 的同位素内标，采用基质匹配外标法，其它 17 种 PFAS 采用基质匹配内标法进行定量分析。PFAS 与 对应的内标参见附录 C。 标准工作也和待测样液中全氟烷基化合物的响应值应在标准曲线线性范围内，超过线性范围则 应稀释后再进样分析。全氟烷基化合物标准溶液的多反应监测（MRM）色谱图参见附录 D。 6.3 空白试验 除不加试样外，均按上述步骤进行测定。 7 结果计算和表述 用 LC-MS/MS 数据处理软件或者按照公式（1）计算试样中全氟烷基化合物残留量：以正式出版文本为准4 SN/T 5222—2019()0− ××=ii icc VfXm …………………………………（1） 式中： Xi——试样中全氟烷基化合物的含量，单位为微克每千克（ μg/kg） ； ci——从标准工作曲线得到的样液被测组分溶液浓度，单位为微克每升（ μg/L） ； ci0——从标准工作曲线得到的空白样液被测组分溶液浓度，单位为微克每升（ μg/L） ； V——试液最终定容体积，单位为毫升（mL） ；f——试液稀释倍数；m——试样的质量，单位为克（g） 。 8 方法的定量限和回