以正式出版文本为准中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T 5220 —2019 中华人民共和国海关总署 发 布ICS 67.050 C 53 2019 -12-27发布 2020 -07-01 实施出口食品中 3- 氯丙醇酯及缩水甘油酯 的测定 气相色谱 - 质谱法 Determination of 3-chloropropanol esters （3-MCPDE ）and glycidol esters （GE） in food products for export —— Gas chromatography mass spectrometry method以正式出版文本为准以正式出版文本为准I SN / T 5220—2019前 言 本标准按照 GB / T 1.1— 2009 给出的规则编写。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。本标准由中华人民共和国海关总署提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国广州海关。本标准主要起草人：刘青、曾广丰、王志元、庞世琦、陈文锐、邹志飞、韦晓群、康文昱、黄 瑾、张洋子。以正式出版文本为准以正式出版文本为准1 SN / T 5220—2019出口食品中 3- 氯丙醇酯及缩水甘油酯的测定 气相色谱 - 质谱法 1　范围 本标准规定了出口食品中 3- 氯丙醇酯和缩水甘油酯气相色谱 - 质谱测定方法。 本标准适用于食用油、奶粉、油炸膨化食品及焙烤类食品中 3- 氯丙醇酯和缩水甘油酯的定性检 测和定量检测。 2　规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本 文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法。 3　方法原理 本标准通过水解反应将食品中存在的各种 3- 氯丙醇酯（3-MCPDE）和缩水甘油酯（GE）全部 转化为 3- 氯丙醇（3-MCPD） ，经苯基硼酸（PBA）衍生化后，用气相色谱 - 质谱法测定其含量，并 以其表示 3-MCPDE 的总量。 方法通过在水解反应终点分别加入氯化钠 - 冰乙酸溶液（含氯的终止反应液，提供氯元素，使缩 水甘油完全转化为 3-MCPD）和硫酸钠 - 冰乙酸溶液（不含氯的终止反应液，无法使缩水甘油转化为3-MCPD）进行对照试验，衍生化后分别测得 3-MCPDE 与 GE 的总量和 3-MCPDE 的实际含量，利用差减法从而得到 GE 的含量。 4　试剂和材料 除另有说明外，所用试剂均为分析纯。水采用 GB/T 6682 规定的一级水。 4.1　甲醇：色谱纯。 4.2　冰乙酸：色谱纯。4.3　甲醇钠。4.4　无水硫酸钠。4.5　氯化钠。4.6　丙酮：色谱纯。4.7　苯基硼酸。4.8　叔丁基甲醚：色谱纯。4.9　乙酸乙酯：色谱纯。4.10　正己烷：色谱纯。4.11　异辛烷：色谱纯。4.12　0.5 mol/L 甲醇钠 - 甲醇溶液：称取固体甲醇钠（4.3）2.701g 于 100 mL 容量瓶中，以甲醇（4.1）以正式出版文本为准2 SN / T 5220—2019定容至 100 mL，混匀。 4.13　10% 硫酸钠 - 乙酸溶液：称取无水硫酸钠固体（4.4）10 g，溶于 100 mL 水中，再向溶液中加入4 mL 冰乙酸（4.2） 。4.14　20% 氯化钠 - 乙酸溶液：称取氯化钠固体（4.5）20 g，溶于 100 mL 水中，再向溶液中加入 4 mL冰乙酸（4.2） 。4.15　丙酮 - 水溶液（19:1，V/V） ：量取 190 mL 丙酮（4.6）和 10 mL 水，混匀。4.16　苯基硼酸 （PBA） 溶液：称取 2.5 g 苯基硼酸 （4.7） 溶于 20 ml 丙酮 - 水 （19:1，V/V） （4.15） ，混匀。 4.17　叔丁基甲醚 - 乙酸乙酯溶液 （8:2，V/V） ：量取 80 mL 叔丁基甲醚 （4.8） 和 20 mL 乙酸乙酯 （4.9） ， 混匀。4.18　 标准物质：棕榈酸 -3- 氯丙二醇酯（3-MCPDE-Palimtate，CAS 号 51930-97-3，分子量 587.36） ， 和棕榈酸缩水甘油酯（Glycidyl Palmitate，CAS 号 7501-44-2，分子量 312.49） ，纯度均大于 98％。 4.19　 内标物：棕榈酸 -d5-3- 氯丙二醇酯（d5-3-MCPDE-Palimtate，CAS 号 1185057-55-9，分子量 592.39） ，纯度大于 98％。4.20　标准储备液：分别准确称取 25.0 mg 的标准物质（精确到 0.001g） ，用叔丁基甲醚 - 乙酸乙酯溶液 （4.17）溶解后定容至 50.0 mL 刻度，配制成浓度为 500 mg/L 的标准储备溶液，于 0℃ ~ 4 ℃冰箱内储存， 有效期 12 个月。4.21　 混合标准储备溶液：分别准确吸取 10.6 mL 棕榈酸 -3- 氯丙二醇酯，5.65 mL 棕榈酸缩水甘油酯 标准储备液（4.20）于 50 mL 容量瓶中，用叔丁基甲醚 - 乙酸乙酯溶液（4.17）定容至刻度，配制成浓度为 20.0 mg/L（以 3- 氯丙醇计）的混合标准储备溶液，于 0 ℃ ~ 4 ℃冰箱内储存，有效期 6 个月。4.22　内标溶液：准确称取 1.00 mg 的内标物质（精确到 0.001g） ，用叔丁基甲醚 - 乙酸乙酯溶液（4.17）溶解后定容至 50.0 mL 刻度，配制成浓度为 20.0 mg/L 的内标溶液，于 0℃ ~ 4 ℃冰箱内储存，有效期 12个月。4.23　微孔滤膜：0.22 μm，有机相型。 5　仪器和设备5.1　气相色谱 - 质谱联用仪（GC-MS） ，配电子轰击源（EI 源） 。 5.2　涡旋混合器。5.3　超声波水浴。5.4　冷冻离心机：15℃，10 000 r/min。5.4　氮吹浓缩仪。5.5　水浴恒温振荡器。5.6　分析天平：感量 0.001 g。 6　测定步骤6.1　样品制备 6.1.1　提取6.1.1.1　奶粉样品 称取 2 g（精确至 0.001 g）试样于 50 mL 具塞聚四氟乙烯离心管中（每个样品需要两份作对照） ， 加入 2.0 mL 去离子水，准确加入 50 μL 的 20.0 mg/L 内标溶液（4.22） ，再加入 5 mL 正己烷（4.10） ， 超声提取 15 min，以不低于 10 000 r/min，离心 10 min。取出后，移取上清液于新的 50 mL 离心管中，以正式出版文本为准3 SN / T 5220—2019重复提取 1 次 ~2 次，合并提取液。置于氮吹浓缩仪中，于 40℃ -50℃下用氮气吹至提取液剩余 5 mL 作为待反应液。 6.1.1.2　油炸膨化类食品样品 称取颗粒或粉末状试样 2 g（精确至 0.001 g）于 50 mL 具塞聚四氟乙烯离心管中（每个样品需要 两份作对照） ，加入 2.0 mL 去离子水，准确加入 50 μL 的 20.0 mg/L 内标物溶液（4.22） ，再加入 5mL 正己烷（4.10） ，超声提取 15 min，以不低于 10 000 r/min，离心 10 min。取出后，移取上清液于新的 50 mL 离心管中，重复提取 1 次 ~2 次，合并提取液。置于氮吹浓缩仪中，于 40℃ ~50℃下用氮气吹至提取液剩余 5 mL 作为待反应液。 6.1.1.3　食用油样品 称取 0.5 g （精确至 0.001 g） 油样品于 15 mL 具塞聚四氟乙烯离心管中 （每个样品需要两份作对照） ， 准确加入 50 μL 的 20.0 mg/L 内标物溶液（4.22） ，再加入 2 mL 叔丁基甲醚 - 乙酸乙酯溶液（4.17） ， 将离心管置于超声波清洗器于 45℃下，超声混合提取 15 min，作为待反应液。 6.1.1.4　焙烤类食品样品 称取颗粒状试样 2 g（精确至 0.001 g）于 50 mL 具塞聚四氟乙烯离心管中（每个样品需要两份作 对照） ，加入 2.0 mL 去离子水，准确加入 50 μL 的 20.0 mg/L 内标物溶液（4.22） ，再加入 5 mL 正己 烷（4.10） ，超声提取 15 min，以不低于 10 000 r/min，离心 10 min。取出后，移取上清液于新的 50 mL 离心管中，重复提取 1 次 ~2 次，合并提取液。置于氮吹浓缩仪中，于 40℃ ~50℃下用氮气吹至提取液剩余 5 mL 作为待反应液。 6.1.2　水解反应 在 6.1 的待反应液中加入 1 mL 叔丁基甲醚 - 乙酸乙酯溶液（食用油无需加入该溶液） ，再向离心 管中加入 0.5 mL 甲醇钠 - 甲醇溶液（4.12）进行水解反应，严格控制反应时间，7 min 后，向每一组 对照样品中分别加入 3 mL 10% 硫酸钠 - 乙酸溶液（4.13） 、3 mL 20% 氯化钠 - 乙酸溶液（4.14） ，充分振荡，使水解反应及时终止。再加入 3 mL 正己烷进行脱脂，充分混匀后静置，待水相有机相分层明显后，吸取上层弃去，脱脂操作进行两遍。 6.1.3　衍生化反应 脱脂后，向各离心管中加入 0.2 mL PBA 溶液（4.16） ，振荡混匀后，置于水浴恒温振荡器中，于 70℃环境衍生反应 20 min。衍生后，离心管冷却至室温，加入 5 mL 乙酸乙酯涡旋提取两遍，合并两 次提取液于 40℃下用氮气吹干，残留物用 1.00