以正式出版文本为准中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T 5219 —2019 出口食品中氨氯吡啶酸、氯氨吡啶酸 残留量的测定 液相色谱 -质谱 / 质谱法 Determination of picloram, aminopyralid residues in foods tuffs for export — LC-MS/MS method 2019 -12-27 发布 2020 -07-01 实施ICS 67.050 C 53 中华人民共和国海关总署 发 布以正式出版文本为准以正式出版文本为准 SN/T 5219—2019I前 言 本标准按照 GB/T 1.1— 2009 给出的规则起草。 本标准由中华人民共和国海关总署提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国深圳海关。本标准主要起草人：吴凤琪、赵琼晖、陈波、吴卫东、靳保辉、张建莹、金晓蕾、梁淑雯。以正式出版文本为准以正式出版文本为准1 SN/T 5219—2019出口食品中氨氯吡啶酸、氯氨吡啶酸残留量的测定 液相色谱 -质谱 / 质谱法 1 范围 本标准规定了出口食品中氨氯吡啶酸、氯氨吡啶酸的制样和液相色谱 - 质谱 / 质谱测定方法。 本标准适用于大白菜、菠菜、西红柿、芥蓝、苹果、香蕉、火龙果、梨、大米、小麦、猪肉、 牛肉、鸡肉、虾、鲫鱼等食品中氨氯吡啶酸、氯氨吡啶酸残留量的测定和确证。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 3 方法提要 试样中的氨氯吡啶酸、氯氨吡啶酸用酸化乙腈提取后，利用改进的 QuEChERS（150 mg C18、 900 mg Na2SO4）试剂，对提取液进行净化处理后，采用液相色谱串联质谱仪进行定性定量分析，外 标法定量。4 试剂和材料 除另有规定外，所用试剂均为分析纯，水为符合 GB/T 6682 规定的一级水。 4.1 乙腈：色谱纯。 4.2 甲醇：色谱纯。 4.3 甲酸。 4.4 正己烷。 4.5 无水硫酸镁。 4.6 C18粉末。 4.7 氯化钠。 4.8 乙酸铵。 4.9 无水硫酸钠。 4.10 氨氯吡啶酸（Picloram，C6H3Cl3N2O2，CAS No ：1918-02-1） ：纯度大于或等于 99.0％。 4.11 氯氨吡啶酸（Aminopyralid，C6H4Cl2N2O2， CAS No ：150114-71-9） ：纯度大于或等于 99.0％。 4.12 标准储备溶液：分别准确称取 10 mg 氨氯吡啶酸（4.10） 、氯氨吡啶酸（4.11） ，用甲醇（4.2） 溶解，定容至 10 mL，避光 -18 ℃保存，保存期为 6 个月。 4.13 混合标准使用液：分别移取 100 µL 各物质标准储备溶液（4.12） ，加空白基质提取液定容至 10 mL， 避光 -18 ℃保存，保存期为 1 个月。 4.14 微孔滤膜：0.22 µm，有机系。以正式出版文本为准2 SN/T 5219—20195 仪器与设备 5.1 液相色谱串联质谱仪：配有电喷雾离子源（ESI） 。 5.2 分析天平：感量分别为 0.1 mg 和 0.01 g。 5.3 均质器。 5.4 高速离心机：转速不低于 9 500 r/min。 5.5 氮吹仪。 5.6 涡旋混合器。 5.7 组织捣碎机。 6 试样制备与保存 6.1 试样制备 取有代表性样品 500 g，用组织捣碎机将样品加工成浆状，混匀，装入洁净的盛样容器内，密封 并标明标记。 6.2 试样保存 试样于 -18 ℃以下冷冻保存。 在制样和保存的操作过程中，应防止样品受到污染或发生残留物含量的变化。 6.3 提取 6.3.1 水果、蔬菜类样品 称取试样 10.0 g，精确至 0.01 g，置于 50 mL 离心管中，加入 10 mL 1% 甲酸乙腈，9 500 r/min 均 质 5 min，再加入 4g 无水硫酸美（4.5） 、1g 氯化钠（4.7） ，涡旋振荡 10 min，9 500 r/min 离心 5 min。6.3.2 粮谷类样品 称取试样 5.0 g，精确至 0.01 g，置于 50 mL 离心管中，加入 3 mL 水，涡旋浸润样品后，加入 10 mL 1 % 甲酸乙腈，9 500 r/min 均质 5 min，再加入 4g 无水硫酸美（4.5） 、1g 氯化钠（4.7） ，涡旋振 荡 10 min，9 500 r/min 离心 5 min。 6.3.3 肉类样品 称取试样 2.0 g，精确至 0.01 g，置于 50 mL 离心管中，加入 2 mL 5 mmoL/L 的乙酸铵缓冲液，涡 旋浸润样品后，加入 10 mL 5 % 甲酸乙腈和 5 mL 乙腈饱和的正己烷，9 500 r/min 均质 5 min，再加入 4g MgSO4、1g NaCl，涡旋振荡 10 min，9 500 r/min 离心 5 min。 6.4 净化 6.4.1 水果、蔬菜类样品 取 6 mL 上清液，加入预先加有 150 mg C18粉末（4.6） 、900 mg 无水硫酸钠（4.9）的 15 mL 离 心管中，涡旋振荡 3 min，9 500 r/min 离心 5 min。移取 1 mL 上清液于 15 mL 离心管中，氮吹近干， 用 10 % 甲醇水溶液定容至 1 mL，涡旋混合，过 0.22 µm 微孔滤膜 （4.14） ，供液相色谱串联质谱仪测定。以正式出版文本为准3 SN/T 5219—20196.4.2 粮谷类样品 取 6 mL 上清液，加入预先加有 150 mg C18粉末（4.6） 、900 mg 无水硫酸钠（4.9）的 15 mL 离 心管中，涡旋振荡 3 min，9 500 r/min 离心 5 min。移取 2 mL 上清液于 15 mL 离心管中，氮吹近干，用 10 % 甲醇水溶液定容至 1 mL，涡旋混合，过 0.22 µm 微孔滤膜（4.14） ，供液相色谱串联质谱仪测定。 6.4.3 肉类样品 取 6 mL 上清液，加入预先加有 150 mg C18粉末（4.6） 、900 mg 无水硫酸钠（4.9）的 15 mL 离 心管中，涡旋振荡 3 min，9 500 r/min 离心 5 min。移取 5 mL 上清液于 15 mL 离心管中，氮吹近干，用 10 % 甲醇水溶液定容至 1 mL，加入 2 mL 乙腈饱和的正己烷，涡旋混合，9 500 r/min 离心 5 min，过 0.22 µm 微孔滤膜（4.14） ，供液相色谱串联质谱仪测定。 7 测定 7.1 液相色谱 / 质谱条件 7.1.1 色谱柱：Eclipse Plus C18 色谱柱， 50 mm×2.1 mm（内径） ，粒径 1.8 µm 或性能相当者。 7.1.2 柱温：30 ℃。 7.1.3 进样量：5 µL。 7.1.4 流动相：A 为 0.2 % 甲酸，2 mmoL/L 乙酸铵水溶液，B 为甲醇（4.2） 。 7.1.5 流速：0.3 mL/min。 7.1.6 梯度：参见附录 A 表 A.1。 7.1.7 质谱条件：参见附录 A 表 A.2。 7.2 液相色谱 / 质谱检测 在仪器最佳工作条件下，对基质标准校准溶液进样，以被测物峰面积为纵坐标，基质校准溶液 为纵坐标，绘制标准工作曲线。用标准工作曲线对样品进行定量，待测样液中氨氯吡啶酸、氯氨吡啶 酸的响应值均应在仪器检测的线性范围内，上述色谱和质谱条件下，标准物质多反应监测质量色谱图参见附录 B。 7.3 液相色谱 / 质谱定性 如果样液与标准工作溶液的质量色谱图中，在相同保留时间有色谱峰出现，允许偏差小于 ±2.5 %， 所选择离子的丰度比与标准品对应离子的丰度比，其值在允许范围内（允许范围见表 1） ，则可判断 样品中存在相应的被测物。在 7.1 条件下，氨氯吡啶酸、氯氨吡啶酸的液相色谱 -质谱多反应监测相 对离子丰度的最大允许偏差见表 2。 表 1 定性液相色谱 -质谱时相对离子丰度的最大允许偏差 相对离子丰度 / % ＞ 50 ＞ 20~50 ＞ 10~20 ≤ 10 允许的相对偏差 / % ±20 ±25 ±30 ±50以正式出版文本为准4 SN/T 5219—2019a表 2 氨氯吡啶酸及氯氨吡啶酸的监测离子对和定量离子对1） 序号 化合物名称 参考保留时间 / min 母离子 / （m/z） 子离子 / （m/z） 碰撞能量（CE）/eV 1 氯氨吡啶酸 1.74208.9 190.9a20 208.9 162.9 30 2 氨氯吡啶酸 2.87242.9 224.8a20 242.9 196.7 30 注 ： 对于不同质谱仪器，仪器参数可能存在差异，测定前应将质谱参数优化到最佳。 a 为定量离子。 7.4 空白试验 除不加试样外，均按上述测定条件和操作步骤进行。 8 结果计算和表述 用色谱数据处理软件中的外标法或按式（1）计算试样中药物的残留量： 10001000××=mVcX ……………………………（1） 式中： X——试样中待测组分的含量，单位为微克每千克（ µg/kg） ； c——从基质标准曲线上得到的样液中分析