以正式出版文本为准中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T 5213 —2020 土沉香鉴定方法 Identification of Aquilaria sinensis （Loureiro) Sprengel 2020 -12-30发布 2021 -07-01 实施ICS 65.020.01 CCS B 16 中华人民共和国海关总署 发 布以正式出版文本为准以正式出版文本为准 SN/T 5213—2020I前 言 本文件按照 GB/T1.1— 2020 给出的规则起草。 本文件由中华人民共和国海关总署提出并归口。本文件起草单位：中华人民共和国杭州海关、中华人民共和国合肥海关。本文件主要起草人：张明哲、吴姗、宗凯、张晓峰、尹文秀、周浩、虞惠贞、陈吴健、吴志毅、 林晓佳。以正式出版文本为准以正式出版文本为准1 SN/T 5213—2020土沉香鉴定方法 1 范围 本文件规定了土沉香的鉴定方法。 本文件适用于土沉香的鉴定。 2　规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文 件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适 用于本文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 GB/T 14072 林木种质资源保存原则与方法 SN/T 1193 基因检验实验室技术要求 3　术语、定义和缩略语 3.1　术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1.1　 花序 inflorescence 花在总花柄上的排列方式，花序最简单的形式是单生花，如有多朵花在花序轴上排列，则花序 的类型可分为无限花序和有限花序。 3.1.2 蒴果 capsule 由合生心皮的复雌蕊发育成的果实，子房 1 室或多室，每室有多粒种子。 3.2　缩略语 下列缩略语适用于本文件。bp ：碱基对（base pair）CTAB ：十六烷基三甲基溴化铵（cetyltrithylammonium bromide）dNTP ：脱氧核苷酸三磷酸（deoxyribonucleoside triphosphate）DNA ：脱氧核糖核酸（deoxyribonucleic acid）OD ：光密度值（optical density） Taq酶：栖热水生菌 DNA 聚合酶。以正式出版文本为准2 SN/T 5213—20204　基本信息 土沉香的基本信息如下： 学名： Aquilaria sinensis （Loureiro）Sprengel 异名：香材、白木香、牙香树、女儿香、栈香、青桂香、崖香、芫香英文名：Agarwood中文名：土沉香 分类地位：被子植物门（Angiospermae） ，双子叶植物纲（Dicotyledoneae） ，桃金娘目（Myrtiflorae） ， 瑞香科（Thymelaeaceae） ，沉香属（ Aquilaria ）。 地理分布：主要分布于广东、海南、广西、福建。喜生于低海拔的山地、丘陵以及路边阳处疏林中。 土沉香为《国家重点保护野生植物名录（第一批） 》中的Ⅱ级重点保护野生植物。 5　方法原理 土沉香可能以种子、幼苗、植株、木材等形式出入境，本标准将土沉香的种子、叶片等形态特 征以及分子特征作为鉴定依据。其中种子和叶片等形态特征完整时以形态特征作为鉴定依据，种子或叶片等形态特征不完整以及木材等不具备植物形态特征的样品以分子特征作为鉴定的主要依据。 6　仪器用具和试剂6.1　仪器用具 体视显微镜、电子天平、高压灭菌器、pH 计、恒温水浴锅、研钵、纯水仪、涡旋振荡器、液氮 罐、高速冷冻离心机、核酸蛋白分析仪、荧光定量 PCR 扩增仪、可调移液器（1 000 μL，200 μL， 20 μL，10 μL，2.5 μL）等。 6.2　主要试剂 CTAB 缓冲液、酚、三氯甲烷、异戊醇、异丙醇、乙醇、RNase A、液氮、实时荧光 PCR 预混液、 引物和探针（见附录 A 中表 A.1） ，除另有规定外，均为分析纯或生化纯，水为按照 GB/T 6682 规定 的执行。 7　鉴定方法7.1　形态学方法 7.1.1　瑞香科植株形态特征7.1.1.1 落叶或常绿灌木或小乔木，稀草本；茎通常具韧皮纤维。 7.1.1.2 叶：单叶互生或对生，革质或纸质，稀草质，边缘全缘，基部具关节，羽状叶脉，具短叶 柄，无托叶。 7.1.1.3 花：花辐射对称，两性或单性，雌雄同株或异株，头状、穗状、总状、圆锥或伞形花序， 有时单生或簇生，顶生或腋生；花萼通常为花冠状，白色、黄色或淡绿色，稀红色或紫色，常连合成钟状、漏斗状、筒状的萼筒，外面被毛或无毛，裂片 4 片 ~5 片，在芽中覆瓦状排列；花瓣缺，或 鳞片状，与萼裂片同数；雄蕊通常为萼裂片的 2 倍或同数，稀退化为 2，多与裂片对生，或另一轮与裂片互生，花药卵形、长圆形或线形，2 室，向内直裂，稀侧裂；花盘环状、杯状或鳞片状，稀不存；子房上位，心皮 2 个 ~5 个合生，稀 1 个，1 室，稀 2 室，每室有悬垂胚珠 1 颗，稀 2 颗 ~3 颗，近以正式出版文本为准3 SN/T 5213—2020室顶端倒生，花柱长或短，顶生或近顶生，有时侧生，柱头通常头状。 7.1.1.4 果：浆果、核果或坚果，稀为 2 瓣开裂的蒴果，果皮膜质、革质、木质或肉质。 7.1.1.5 种子：种子下垂或倒生；胚乳丰富或无胚乳，胚直立，子叶厚而扁平，稍隆起。 7.1.2　沉香属植株形态特征 7.1.2.1 乔木或小乔木。 7.1.2.2 叶：叶互生，具纤细闭锁的平行脉。 7.1.2.3 花：花两性，腋生或顶生，通常组成无梗或具梗的伞形花序，无苞片；萼筒钟状，宿存， 裂片 5 枚，伸张，花瓣退化成鳞片状，10 枚，基部联合成环，着生于花萼喉部，密被绒毛；雄蕊 2 倍于萼裂片，与鳞片状花瓣间生，花丝极短，花药长圆形，背着，药隔宽；下位花盘不存；子房近无柄，被毛，完全或不完全的 2 室，柱头头状，花柱极短。7.1.2.4 果：蒴果具梗，两侧压扁，倒卵形，室背开裂；果皮革质或木质，基部为宿存萼筒所包被。 7.1.2.5 种子：种子卵形或椭圆形，基部具尾状附属物，种皮坚脆，无胚乳，胚具厚而平凹的子叶。 7.1.3　土沉香形态特征 7.1.3.1 乔木，树皮暗灰色，几平滑，纤维坚韧；小枝圆柱形，具绉纹，幼时被疏柔毛，后逐渐脱 落，无毛或近无毛（参见附录 B 和附录 C） 。 7.1.3.2 叶：叶革质，圆形、椭圆形至长圆形，有时近倒卵形，长 5 cm ~9 cm，宽 2.8 cm~6 cm，先 端锐尖或急尖而具短尖头，基部宽楔形，上面暗绿色或紫绿色，光亮，下面淡绿色，两面均无毛，侧脉每边 15 ~20，在下面更明显，小脉纤细，近平行，不明显，边缘有时被稀疏的柔毛；叶柄长约 5 mm~7 mm，被毛。 7.1.3.3 花：花芳香，黄绿色，多朵，组成伞形花序；花梗长 5 mm ~6 mm，密被黄灰色短柔毛；萼 筒浅钟状，长 5 mm ~6 mm，两面均密被短柔毛，5 裂，裂片卵形，长 4 mm ~5 mm，先端圆钝或急 尖，两面被短柔毛；花瓣 10，鳞片状，着生于花萼筒喉部，密被毛；雄蕊 10，排成 1 轮，花丝长约1 mm，花药长圆形，长约 4 mm ；子房卵形，密被灰白色毛，2 室，每室 1 胚珠，花柱极短或无，柱头头状。7.1.3.4 果：蒴果果梗短，卵球形，幼时绿色，长 2 cm~3 cm，直径约 2 cm，顶端具短尖头，基部渐 狭，密被黄色短柔毛，2 瓣裂，2 室，每室具有 1 种子。7.1.3.5 种子：种子褐色，卵球形，长约 1 cm，宽约 5.5 mm，疏被柔毛，基部具有附属体，附属体 长约 1.5 cm，上端宽扁，宽约 4 mm，下端成柄状。 7.2　分子生物学方法7.2.1　DNA 提取 按 CTAB 方法提取 DNA 见附录 A，或采用商品化 DNA 提取试剂盒。 7.2.2　实时荧光 PCR 鉴定方法 土沉香的实时荧光 PCR 检测方法见附录 A，防污染措施应符合 SN/T 1193 的规定。 7.2.3　质量控制 阳性对照：Ct 值小于或等于 35 ； 阴性对照：Ct 值大于或等于 40 ；空白对照：Ct 值大于或等于 40 ；上述指标有一项不符合者，应重做实时荧光 PCR 扩增。以正式出版文本为准4 SN/T 5213—20208　结果判定 样品叶和种子等形态学特征与 7.1.3 的描述相符，则判定该样品为土沉香。 实时荧光 PCR 鉴定时，样品 Ct 值小于或等于 35，阳性对照、阴性对照和空白对照结果正常者， 则判定为土沉香。 9　样品保存与复核9.1　样品保存 物种资源的样品保存方法见 GB/T 14072。 9.2　结果记录与资料保存 完整的实验记录包括：样品的名称与编号、来源、种类、时间，实验的时间、地点、方法和结 果等，并要有经手人和实验人员的签字。生物学测定需有分类鉴别的特征照片，分子生物学检测需有 最终的实验数据。原始数据应归档，妥善保管，以备复验、谈判和仲裁。 9.3　复核 复核工作由海关总署指定的单位或人员负责，主要考察实验记录、照片等资料的完整性和真实 性，必要时由专家对检测结果进行复核。