以正式出版文本为准中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T 5211 —2020 南方红豆杉鉴定方法 Identification of Taxus wallichiana var. mairei （Lem ée & H. L éveill é） L. K.Fu & Nan Li 2020 -12-30发布 2021 -07-01 实施ICS 65.020.01 CCS B 16 中华人民共和国海关总署 发 布以正式出版文本为准以正式出版文本为准I SN/T 5211—2020前 言 本文件按照 GB/T1.1— 2020 给出的规则起草。 本文件由中华人民共和国海关总署提出并归口。本文件负责起草单位：中华人民共和国杭州海关、中华人民共和国重庆海关、中华人民共和国 合肥海关。 本文件起草人：张明哲、尹文秀、滕少娜、李刚、张巧琦、张晓峰、吴姗、虞惠贞、陈吴健、 林晓佳、吴志毅。以正式出版文本为准以正式出版文本为准1 SN/T 5211—2020南方红豆杉鉴定方法 1 范围 本文件规定了南方红豆杉的鉴定方法。 本文件适用于南方红豆杉的鉴定。 2　规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文 件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适 用于本文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 GB/T 14072 林木种质资源保存原则与方法 SN/T 1193 基因检验实验室技术要求 3　术语、定义和缩略语 3.1　术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1.1　苞片 bract 在花或花序基部着生的变态叶，有保护花芽或果实的作用，是有花植物身上的一种特殊的过渡器 官。按其在茎轴上的位置、排列和形态的不同，另有小苞片和总苞之别。通常把包被花或花簇的一轮 苞片称为总苞，着生于花序梗上的小的苞片称为小苞片，总苞的形状和轮数为种属鉴别的特征之一。 3.1.2　假种皮 aril 由珠被之外的组织发育而来的包被着种子的结构。 3.2　缩略语 下列缩略语适用于本文件。 CTAB ：十六烷基三甲基溴化铵（cetyltrithylammonium bromide） 。DNA ：脱氧核糖核酸（deoxyribonucleic acid） 。dNTP ：脱氧核苷酸三磷酸（deoxyribonucleoside triphosphate） 。 Taq酶：栖热水生菌 DNA 聚合酶。 OD ：光密度值（optical density） 。 bp ：碱基对（base pair） 。 4　南方红豆杉基本信息 学名： Taxus wallichiana var. mairei （Lem ée & H. L éveillé）L. K. Fu & Nan Li以正式出版文本为准2 SN/T 5211—2020异名：美丽红豆杉，杉公子，赤推，榧子木，海罗松，红叶水杉 英文名：Maire yew中文名：南方红豆杉分类地位：裸子植物门（Gymnospermae） ，松杉纲（Coniferopsida） ，红豆杉目（Taxales） ，红豆杉 科（Taxaceae） ，红豆杉属（ Taxus ）。 地理分布：分布于安徽南部、浙江、台湾、福建、江西、广东北部、广西北部及东北部、湖 南、湖北西部、河南西部、陕西南部、甘肃南部、四川、贵州及云南东北部。在多数省区常生于海拔 1000 m~1200m 以下的地方。 南方红豆杉为我国特有树种，为《国家重点保护野生植物名录（第一批） 》中的 I 级重点保护野 生植物。 5　方法原理 南方红豆杉可能以种子、幼苗、植株等形式出境，本文件将南方红豆杉的种子、叶片等形态特 征及分子特征作为鉴定的主要依据。6　仪器用具和试剂6.1　仪器用具 体视显微镜、电子天平、高压灭菌器、pH 计、恒温水浴锅、研钵、纯水仪、涡旋振荡器、液氮 罐、高速冷冻离心机、核酸蛋白分析仪、荧光定量 PCR 扩增仪、可调移液器（1000 μL，200 μL，20 μL，10 μL，2.5 μL）等。 6.2　主要试剂 CTAB 缓冲液、酚、氯仿、异戊醇、异丙醇、乙醇、RNase A、液氮、实时荧光 PCR 预混液、引 物和探针，除另有规定外，均为分析纯或生化纯，水为按照 GB/T 6682 规定的执行。7　鉴定方法7.1　形态学方法 7.1.1　红豆杉科植株形态特征7.1.1.1 常绿乔木或灌木。 7.1.1.2 叶：叶条形或披针形，螺旋状排列或交叉对生，上面中脉明显、微明显或不明显，下面沿 中脉两侧各有 1 条气孔带，叶内有树脂道或无。 7.1.1.3 花：球花单性，雌雄异株，稀同株；雄球花单生叶腋或苞腋，或组成穗状花序集生于枝顶， 雄蕊多数，各有 3 个 ~9 个辐射排列或向外一边排列有背腹面区别的花药，药室纵裂，花粉 无气囊；雌球花单生或成对生于叶腋或苞片腋部，有梗或无梗，基部具多数覆瓦状排列或 交叉对生的苞片，胚珠 1 枚，直立，生于花轴顶端或侧生于短轴顶端的苞腋，基部具辐射对称的盘状或漏斗状珠托。 7.1.1.4 种子：种子核果状，无梗则全部为肉质假种皮所包，如具长梗则种子包于囊状肉质假种皮 中、其顶端尖头露出；或种子坚果状，包于杯状肉质假种皮中，有短梗或近于无梗；胚乳丰富；子叶 2 枚。以正式出版文本为准3 SN/T 5211—20207.1.2　红豆杉属植株形态特征 7.1.2.1 常绿乔木或灌木；小枝不规则互生，基部有多数或少数宿存的芽鳞，稀全部脱落；冬芽芽 鳞覆瓦状排列，背部纵脊明显或不明显。 7.1.2.2 叶：叶条形，螺旋状着生，基部扭转排成二列，直或镰状，下延生长，上面中脉隆起，下 面有两条淡灰色、灰绿色或淡黄色的气孔带，叶内无树脂道。 7.1.2.3 花：雌雄异株，球花单生叶腋；雄球花圆球形，有梗，基部具覆瓦状排列的苞片，雄蕊 6枚~14 枚，盾状，花药 4 ~9，辐射排列；雌球花几无梗，基部有多数覆瓦状排列的苞片， 上 端2对~3 对苞片交叉对生，胚珠直立，单生于总花轴上部侧生短轴之顶端的苞腋，基部 托以圆盘状的珠托，受精后珠托发育成肉质、杯状、红色的假种皮。 7.1.2.4 种子：种子坚果状，当年成熟，生于杯状肉质的假种皮中，稀生于近膜质盘状的种托之上， 种脐明显，成熟时肉质假种皮红色，有短梗或几无梗；子叶 2 枚，发芽时出土。 7.1.3　南方红豆杉形态特征 7.1.3.1 乔木，树皮浅灰色或暗褐色，纵裂，呈长薄条片状剥落（参见附录 A 和附录 B） 。 7.1.3.2 叶：叶条形，多呈弯镰状，通常长 2cm ~3.5cm（~4.5cm） ，宽 3mm~4mm（~5mm） ，上部常 渐窄，先端渐尖，下面中脉带上无角质乳头状突起点，或局部有成片或零星分布的角质乳 头状突起点，或与气孔带相邻的中脉带两边有一至数条角质乳头状突起点，中脉带明晰可见，其色泽与气孔带相异，呈淡黄绿色或绿色，绿色边带亦较宽而明显。 7.1.3.3 花：雌雄异株，球花单生叶腋；雄球花圆球形，有梗，基部具覆瓦状排列的苞片，雄蕊 6枚~14 枚，盾状，花药 4 ~9，辐射排列；雌球花几无梗，基部有多数覆瓦状排列的苞片， 上 端2对~3 对苞片交叉对生，胚珠直立，单生于总花轴上部侧生短轴之顶端的苞腋，基部托以圆盘状的珠托，受精后珠托发育成肉质、杯状、红色的假种皮。 7.1.3.4 种子：种子通常较大，微扁，多呈倒卵圆形，上部较宽，稀柱状矩圆形，长 7mm ~8mm，径 5mm，有纵楞脊，种脐常呈椭圆形。 7.2　分子生物学方法 7.2.1　DNA 提取 按 CTAB 方法提取 DNA（参见附录 C） ，或采用商品化 DNA 提取试剂盒。 7.2.2　实时荧光 PCR 鉴定方法 南方红豆杉的实时荧光 PCR 检测方法见附录 C，防污染措施应符合标准 SN/T 1193 的规定。 7.2.3　质量控制 阳性对照：Ct 值小于或等于 35 ； 阴性对照：Ct 值大于或等于 40 ；空白对照：Ct 值大于或等于 40 ；上述指标有一项不符合者，应重做实时荧光 PCR 扩增。 8　结果判定 样品叶和种子等形态学特征与 7.1.3 的描述相符，且实时荧光 PCR 鉴定样品 Ct 值小于或等于 35， 则判定该样品为南方红豆杉。以正式出版文本为准4 SN/T 5211—20209　样品保存与复核 9.1　样品保存 物种资源的样品保存方法见标准 GB/T 14072。 9.2　结果记录与资料保存 完整的实验记录包括：样品的名称与编号、来源、种类、时间，实验的时间、地点、方法和结 果等，并要有经手人和实验人员的签字。生物学测定需有分类鉴别的特征照片，分子生物学检测需有 最终的实验数据。原始数据应归档，妥善保管，以备复验、谈判和仲裁。 9.3　复核 复核工作由海关总署指定的单位或人员负责。主要考察实验记录、照片等资料的完整性和真实 性，必要时由专家对检测结果进行复核。