以正式出版文本为准中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T 5207 —2020 蓝莓休克病毒检疫鉴定方法 Detection and identification of blueberry shock virus 2020 -12-30发布 2021 -07-01 实施ICS 65.020 CCS B 16 中华人民共和国海关总署 发 布以正式出版文本为准以正式出版文本为准 SN/T 5207—2020I前 言 本文件按照 GB / T 1.1— 2009 给出的规则起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。本文件由中华人民共和国海关总署提出并归口。本文件起草单位：中华人民共和国福州海关、福建省农业科学院、中国检验检疫科学研究院、 福建农林大学。 本文件主要起草人：蔡伟、谢丽雪、李雪珍、李韬、张永江、沈建国、高芳銮、吴祖建、陈 寿铃。以正式出版文本为准以正式出版文本为准1 SN/T 5207—2020蓝莓休克病毒检疫鉴定方法 1 范围 本文件规定了蓝莓休克病毒检疫鉴定的原理，仪器设备、用具及试剂，检测与鉴定，结果判定 与记录，以及样品的保存。 本文件适用于进出境蓝莓种苗中蓝莓休克病毒的检测。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文 件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适 用于本文件。 SN / T 2122 进出境植物及植物产品检疫抽样方法 3 术语和定义 本文件没有需要界定的术语和定义。 4 基本信息 蓝莓休克病毒的基本信息如下：——学名： Blueberry shock virus ，缩写：BlShV。 ——分类地位：雀麦花叶病毒科（ Bromoviridae ） 、等轴不稳环斑病毒属（ Ilarvirus ）成员。 ——蓝莓休克病毒的分类地位、寄主范围、病害症状、分布地区、传播途径、粒体形态、病毒 基因组等参见附录 A。 5 原理 蓝莓休克病毒的血清学和分子生物学特性是制定本检疫鉴定方法的主要依据。 6　仪器设备、用具及试剂 6.1　仪器设备 高速冷冻离心机、电子天平（1 / 1000 g） 、PCR 仪、电泳仪、水平电泳槽、-20 ℃低温冰箱 和 -80 ℃超低温冰箱、全自动酶联免疫分析系统、凝胶成像分析系统、pH 计、微波炉、磁力搅 拌器、恒温水浴锅、高压灭菌锅、超净工作台、酶标仪等。6.2　用具 各种量程的可调移液器（1 000 μL、200 μL、100 μL、20 μL、10 μL、2 μL） 、PCR 反应管、 无 RNase 离心管（1.5 mL） 、研钵、酶联板等。以正式出版文本为准2 SN/T 5207—20206.3　试剂 双抗体夹心酶联免疫吸附测定（DAS-ELISA） 试剂见附录 B，普通 RT-PCR 检测试剂见附录 C， 巢式 RT-PCR 检测试剂见附录 D，实时荧光 RT-PCR 检测试剂见附录 E。 7　检测与鉴定 7.1　抽样检查 按照 SN / T 2122 给出的方法进行抽样、取样，并检查植株是否有矮化、畸型，叶片花叶、斑 驳等疑似病毒危害症状。7.2　DAS-ELISA 检测方法见附录 B。 7.3　普通 RT-PCR 检测 检测方法见附录 C。 7.4　巢式 RT-PCR 检测 检测方法见附录 D。 7.5　实时荧光 RT-PCR 检测 检测方法见附录 E。 8　结果判定与记录8.1　结果判定8.1.1 DAS-ELISA 初步筛检，若检测结果为阴性，则判定样品不携带 BlShV ；若检测结果为阳性， 则采用普通 RT-PCR 检测、巢式 RT-PCR 检测或实时荧光 RT-PCR 检测中的任一方法进行验证。 8.1.2 若验证结果为阳性，则判定样品携带 BlShV。 8.2　结果记录 记录好各项实验数据，包括样品来源、种类、时间，实验的时间、地点、方法和结果等，并 要有经手人和实验人员的签字。血清学检测结果保留吸光值的数据报告，分子生物学检测结果保留电泳照片。 9　样品的保存 经检测结果判定为阳性的样品应妥善保存在 -20 ℃~-80 ℃超低温冰箱中，并作好登记和标记 工作，以备复核用。以正式出版文本为准3 SN/T 5207—2020附　录　A （资料性） 蓝莓休克病毒的背景资料 A.1　分类地位 蓝莓休克病毒是雀麦花叶病毒科（ Bromoviridae ） 、等轴不稳环斑病毒属（ Ilarvirus ）成员。 A.2　寄主范围 已报道的自然寄主为蓝莓（ Vaccinium spp.） 。 A.3　病害症状 主要症状是开花期时花和叶片突然完全坏死，导致不结果。据统计，该病毒侵染蓝莓造成的 损失可达 34% ~90%。BlShV 几乎可侵染所有的蓝莓品种，并表现相似的症状。由于 BlShV 可通 过蜜蜂携带感染的花粉传播，因此在田间扩散速度快，易大面积发生。Blshv 侵染蓝莓后引起的 症状如图 A.1 所示。 注：图 A.1 引自 http ：//www.isaacslab.ent.msu.edu/Extension_Updates/BBshockalert.pdf 图 A.1 BlShV 侵染蓝莓后引起的症状 A.4　分布地区 主要分布于美国、加拿大等国家。 A.5　传播途径 通过蜜蜂携带感染的花粉传播，也可经带毒种苗远距离传播。以正式出版文本为准4 SN/T 5207—2020A.6　粒体形态 病毒粒体呈等轴对称球状，直径约 27 nm。 A.7　病毒基因组 正义单链 RNA 病毒。