以正式出版文本为准中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T 5176 —2021 代替 SN/T 1162— 2002 国境口岸传染病快速检测技术规范 Rapid test codes for infectious disease at frontier port 中华人民共和国海关总署 发 布ICS 11.020 CCS C 62 2021 -06-18发布 2022 -01-01 实施以正式出版文本为准中华人民共和国出入境检验检疫 开本 880×1230 1/16 印张 0.75 字数 22 千字 2021 年 7 月第一版 2021 年 7 月第一次印刷 印数 1—500 书号：155175·106 定价：14.00 元国境口岸传染病快速检测技术规范行 业 标 准 SN/T 5176—2021 * * *北京市朝阳区东四环南路甲 1 号 （100023） 编辑部： （010）65194242-7531 中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷中国海关出版社有限公司出版发行 网址 www.customskb.com/book以正式出版文本为准I SN/T 5176—2021前 言 本文件按照 GB/T 1.1— 2020《标准化工作导则　第 1 部分：标准化文件的结构和起草规则》的规 定起草。 本文件由中华人民共和国海关总署提出并归口。 本文件起草单位：中华人民共和国福建国际旅行卫生保健中心、中华人民共和国四川国际旅行 卫生保健中心、中华人民共和国上海国际旅行卫生保健中心、中华人民共和国北京国际旅行卫生保健中心。 本文件主要起草人：王宇平、郑晖、郑爱萍、石莹、陆晔、杨美琼、刘翌、高博。以正式出版文本为准以正式出版文本为准1 SN/T 5176—2021国境口岸传染病快速检测技术规范 1　范围 本文件规定了国境口岸病原生物实验室进行传染病快速检测的技术方法和要求。 本文件适用于国境口岸病原生物实验室对入出境人员进行传染病快速检测。 2　规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文 件，仅该日期对应的版本适用于本文件，不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适 用于本文件。 GB 19489　实验室生物安全通用要求SN/T 1239　国境口岸霍乱检验规程SN/T 2752　卫生检疫人员的自我防护规范WS 233　病原微生物实验室生物安全通用准则WS 259　疟疾的诊断 3　术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1　　国境口岸病原生物实验室　pathogen testing laboratory at forntier port 国境口岸设立从事病原生物检测的专设场所，主要开展入出境人员传染病现场快速检验，是卫 生检疫的基层实验室。3.2　　快速检测　rapid test 相对于传统方法而言，能缩短检测时间，以及在样品制备、实验准备、操作过程简化和自动化 上简化的方法。3.3　　　流感样症状　flu -like symptoms 与流行性感冒相类似的临床症状，表现为：发热，体温 37.5 ℃以上，伴畏寒、乏力、头痛、头 晕、全身酸痛等；呼吸道有卡他症状，常有咽痛，少数有鼻塞、流涕等；少数有恶心、呕吐、食欲不振、腹泻、腹痛等症状。3.4　　　免疫层析试验　immunochromatographic test 利用微孔膜的毛细管作用，通过液体样品在层析介质中的移动，以免疫胶体金或免疫酶染色， 检测特异性抗原或抗体的免疫学方法。3.5　　　实时荧光 PCR　real -time PCR 在 PCR 反应体系中加入荧光基团，基于荧光共振能量转移原理，选择合适的荧光基因和淬灭基以正式出版文本为准2 SN/T 5176—2021团对核酸探针进行标记，利用对荧光信号积累的实时检测来监测整个 PCR 进程，通过扩增曲线对样 品中特定的核酸进行定量或定性分析。3.6　　制动试验　immobilization test 取采集的水样便或呕吐物，制成悬滴样本或压滴样本，直接在显微镜下观察，霍乱弧菌常表现 为穿梭状或流星状运动，在悬滴样本中加入 O1 群或 O139 群霍乱弧菌特异性诊断血清后，若原活泼运动现象停止，细菌凝集成块，为制动试验阳性，可初步推断为疑似 O1 群或 O139 群霍乱弧菌。 4　实验室设备4.1　二级生物安全柜。 4.2　高速冷冻离心机。 4.3　全自动核酸提取仪。4.4　荧光定量 PCR 仪 / 便携式荧光定量 PCR 仪。4.5　生物显微镜 / 倒置生物显微镜。4.6　高压灭菌器。4.7　冰箱。4.8　-80 ℃超低温冰箱。 5　试剂 5.1　免疫层析试剂。 5.2　手工 / 仪器核酸提取试剂。5.3　荧光 PCR 检测试剂： ——商品化病原体核酸检测试剂盒；——免核酸提取病原体核酸检测试剂盒；——荧光 PCR 试剂盒，病原体核酸检测引物、探针。 5.4　霍乱弧菌诊断血清：O1 群霍乱弧菌多价诊断血清、O139 群霍乱弧菌诊断血清。5.5　瑞氏染色液。 6　检测范围 国境口岸病原生物实验室对入出境人员开展传染病快速检测项目应根据疫情通报、航运部门关 于入出境人员传染病报告、现场流行病学调查等进行选择，或参见附录 A 确定。7　生物安全7.1　个人防护 国境口岸现场采样人员、实验室检验人员应根据传染病风险等级评估选择个人防护装备。防护方 法和装备见 SN/T 2752。 7.2　实验室生物安全 实验室生物安全应符合 GB 19489 和 WS 233 中的规定。以正式出版文本为准3 SN/T 5176—20217.3　实验室废弃物 实验室废弃物按照 GB 19489 确定的要求进行无害化处理。 8　检测对象 8.1　国境口岸入出境人员中疑似传染病患者 下列情况可判定为疑似传染病患者： ——体温（腋温）≥ 37.5 ℃或有流感样症状者；——有呕吐、腹泻或腹泻症状者；——医学巡查中发现的其他疑似传染病症状者；——主动申报疑似传染病人员。 8.2　其他人员 自愿在国境口岸现场进行传染病快速检测的入出境人员。 9　样品采集 9.1　确定采集样品种类 按照国境口岸卫生检疫要求，对检测对象进行流行病学调查，确定需要进行现场快速检测的传 染病种类及采集样品种类。 9.2　样品采集 9.2.1　鼻咽拭子、唾液：采集后立即置于 3 mL～ 5 mL 样品保存液。 9.2.2　 全血：采集静脉血 1 mL ～3 mL，颠倒试管，使其与抗凝剂混匀（需进行核酸检测的全血应使用 非肝素抗凝剂） 。 9.2.3　 血清：采集静脉血 3 mL ～5 mL，室温静置 30 min 使其凝固，然后 1 500 r/min～ 2 000 r/min 离心 10 min，收集血清于 2 mL 无菌冻存管。9.2.4　 粪便、肛拭子：选取有脓血、粘液部分的成形便 3 g ～5 g 或水样便 1 mL～ 3 mL 置于无菌容器； 无法获得粪便时，可用湿润的棉拭插入肛门 3 cm ～5 cm（小儿 2 cm～ 3 cm）处轻轻旋转，确保退出棉 拭上有可见粪便，将棉拭放入无菌容器或插入 Cary -Blair 运送培养基底部。 9.2.5　 呕吐物：采集自然呕吐的呕吐物于无菌容器中，水样呕吐物采集 1 mL ～3 mL，非水样呕吐物采 集 3 g～ 5 g。 9.2.6　尿液：采集尿液标本 10 mL，置于无菌 50 mL 塑料尖底离心管中，2 000 r/min 离心 5 min 去沉淀，将上清分装入 15 mL 无菌离心管中，每份 5 mL。 9.3　采样知情同意 有创性采样前需告知被采样人员填写《采样知情同意书》 （见附录 B） 。 10　实验室检验 10.1　免疫层析检验 10.1.1　检验方法10.1.1.1　从冰箱中取出免疫层析检测卡，平衡至室温。以正式出版文本为准4 SN/T 5176—202110.1.1.2　样品处理、检测步骤按产品说明书进行操作。 10.1.2　结果判断与质量控制10.1.2.1　 在有效的实验条件下，质控区应出现明显沉淀线，否则表示检测卡失效或实验失败，应再取 一个检测卡重新实验。 10.1.2.2　检测区出现明显沉淀线，表明所测抗原 / 抗体阳性，结果报告按产品说明书要求进行。 10.1.2.3　免疫层析检测试剂应尽量选择在国家食品药品监督管理局通过注册审批的产品。 10.2　实时荧光 PCR 检验10.2.1　核酸提取 采用商品化手工核酸提取试剂盒或全自动核酸提取仪提取样品核酸（DNA/RNA） 。 注： 采用核酸提取和荧光检测一体化的全自动检测工作站或者使用免提核酸荧光 PCR 检测试剂，可不需要提取 核酸直接加样。 10.2.2　检验方法10.2.2.1　 按商品化核酸检测试剂盒说明书 / 相关检测标准规定进行荧光 PCR 反应试剂配制和加样，试 剂配制和加样应在冰上进行。使用依据相关检测标准自行合成引物、探针进行荧光 PCR 检测时，应注 意严格按照标准要求设置阴性对照和阳性对照。10.2.2.2　 按照商品化核酸检测试剂盒说明书 / 相关检测标准进行荧光定量 PCR 仪扩增循环参数、反应 体积的设置和荧光通道、荧光检测点的选择。 10.2.3　结果判断与质量控制10.2.3.1　 基线和阈值的设定：基线调整选择 6 个 ～15 个循环的荧光信号，阈值设定的原则以阈值线刚 好超过阴性对照检测荧光曲线的最高点。 10.2.3.2　 在有效的实验条件下，阳性对照应有明显的“S”形扩增曲线，Ct 值符合商品化核酸检测试 剂盒说