中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T 5171—2019 出口植物源性食品中去甲乌药碱的测定 液相色谱 - 质谱 / 质谱法 Determination of higenamine in plant-origin foodstuffs for export — LC-MS / MS method 2019-10-25 发布 2020-05-01 实施 中华人民共和国海关总署 发 布ICS 67.050 C 53 I SN / T 5171—2019前 言 本标准按照 GB / T 1.1— 2009 给出的规则起草。 本标准由中华人民共和国海关总署提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国武汉海关、湖北省体育科学研究所、湖北省食品质量安全监 督检验研究院、中华人民共和国南京海关。 本标准主要起草人：王晗、赵晓亚、汤一铸、王鹏、张莉、高玲、叶诚、罗静、王振华。1 SN / T 5171—2019出口植物源性食品中去甲乌药碱的测定 液相色谱 - 质谱 / 质谱法 1 范围 本标准规定了出口植物源食品中去甲乌药碱残留量的液相色谱 - 质谱 / 质谱的测定方法。 本标准适用于白菜、火龙果、橙子、花生、辣椒、川芎中去甲乌药碱残留量的测定，其他食品 也可参照使用。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB 2763 食品安全国家标准 食品中农药最大残留限量 GB / T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 3 方法提要 试样加入 0 .5% 甲酸乙醇溶液提取，提取液经分散固相萃取法净化，液相色谱 - 质谱 / 质谱 仪测定，内标法定量。4 试剂和材料 除非另有说明，所有试剂均为分析纯，水为 GB / T 6682 规定的一级水。 4.1 甲酸（HCOOH，CAS 号：64-18-6） 。 4.2 乙醇（C2H5OH，CAS 号：64-17-5） ：色谱纯。 4.3 甲醇（CH3OH，CAS 号：67-56-1） ：色谱纯。 4.4 乙酸铵（CH3COONH4，CAS 号：631-61-8） 。 4.5 无水硫酸镁（MgSO4，CAS 号：7487-88-9） 。 4.6 去甲乌药碱标准物质（C16H17NO3，CAS 号：5843-65-2） ：纯度大于等于 99%。 4.7 非诺特罗标准物质（C17H21NO4，CAS 号：13392-18-2） ：纯度大于等于 99%。 4.8 0.5% 甲酸乙醇溶液：移取 1.0 mL 甲酸（4.1） ，用乙醇（4.2）定容至 200 mL，混匀。 4.9 0.1% 甲酸甲醇溶液：移取 1.0 mL 甲酸（4.1） ，用甲醇（4.3）定容至 1 000 mL，混匀。 4.10 0.1% 甲酸 -0.5 mmol / L 乙酸铵水溶液：称取 0.038 5 g 乙酸铵（4.4） ，用水溶解，向其中加入 1.0 mL 甲酸（4.1） ，定容至 1 000 mL，混匀。 4.11 去甲乌药碱标准储备液：称取适量去甲乌药碱标准物质 （4.6） （精确至 0.000 1 g） ，用甲醇 （4.3） 溶解，配制成浓度为 1.0 mg / mL 的标准储备液，于 -18 ℃以下避光保存。 4.12 非诺特罗标准储备液：称取适量非诺特罗标准物质 （4.7） （精确至 0.000 1 g） ，用甲醇（4.3） 溶解，配制成浓度为 1.0 mg / mL 的标准储备液，于 -18 ℃以下避光保存。2 SN / T 5171—20194.13 去甲乌药碱标准中间液：准确移取 1.0 mL 去甲乌药碱标准储备液（4.11）于 100 mL 容量瓶中， 用甲醇（4.3）定容至刻度，配制成浓度为 10 μg / mL 的标准中间液，于 -18 ℃冰箱内储存。 4.14 非诺特罗内标中间液：准确移取 1.0 mL 非诺特罗标准储备液（4.12）于 100 mL 容量瓶中，用甲 醇（4.3）定容至刻度，配制成浓度为 10 μg / mL 的内标中间溶液，于 -18 ℃冰箱内储存。 4.15 标准工作溶液 ：准确移取适量去甲乌药碱标准中间液（4.13）和非诺特罗内标中间液（4.14） ， 用初始流动相稀释成去甲乌药碱浓度分别为 3.0 ng / mL、5.0 ng / mL、10 ng / mL、30 ng / mL、50 ng / mL 的 系列标准溶液，并保证各标准溶液中非诺特罗内标浓度为 10 ng / mL。4.16 乙二胺 -N- 丙基硅烷化硅胶（PSA） ： 40 μm~60 μm。 4.17 十八烷基硅烷键合硅胶（C18） ：40 μm~60 μm。 4.18 石墨化碳黑（GCB） ：40 μm ~60 μm。 4.19 微孔滤膜：有机系，0.22 μm。 5 仪器和设备 5.1 液相色谱 - 质谱 / 质谱仪：配电喷雾离子源（ESI） 。 5.2 组织捣碎机。 5.3 振荡器。 5.4 涡旋混合器。 5.5 电子分析天平：感量为 0.000 1 g 和 0.01 g。 5.6 离心机：转速不低于 8 000 r / min。 5.7 氮气吹干仪。 6 试样制备与保存 蔬菜、水果及药用植物的取样部位按照 GB 2763 的规定执行，取样品 500 g，用组织捣碎机均质， 充分混匀，均分为 2 份，密封并标明标记，于 -18 ℃条件下保存。 坚果样品去壳取全果 500 g，用组织捣碎机均质，充分混匀，均分为 2 份，密封并标明标记，于 0 ℃~4 ℃条件下保存。 调味料样品去柄、去根取全果或整棵 500 g，用组织捣碎机均质，充分混匀，均分为 2 份，密封 并标明标记，于 0 ℃~4 ℃条件下保存。 7 测定步骤 7.1 提取 称取约 2 g 试样（精确至 0.01 g）置于 50 mL 离心管中，加入 20 μL 非诺特罗内标中间液（4.14） ， 加入 20 mL 0.5% 甲酸乙醇溶液（4.8） ，涡旋混匀，振荡提取 30 min，以 8 000 r / min 的转速离心 5 min，待净化。 7.2 净化 取 2 mL 7.1 中的待净化上清液于 10 mL 净化管中，加入 50 mg PSA（4.16） 、50 mg C18（4.17） 、7.5 mg GCB（4.18）和 150 mg 无水硫酸镁（4.5） ，涡旋混合，以 8 000 r / min 的转速离心 5 min，取上清液过 微孔滤膜（4.19） ，供液相色谱 - 质谱 / 质谱仪测定。3 SN / T 5171—20197.3 测定 7.3.1 液相色谱条件 7.3.1.1 色谱柱：C18色谱柱，100 mm×3.0 mm（内径） ，粒径 3.5 μm 或性能相当者。 7.3.1.2 柱温：30 ℃。 7.3.1.3 流动相：A 为 0.1% 甲酸 - 0.5 mmol / L 乙酸铵水溶液 （4.10） ，B 为 0.1% 甲酸甲醇溶液 （4.9） ， 梯度洗脱，洗脱程序见表 1。 表 1 液相色谱的梯度洗脱程序 时间 / min 流动相 A / % 流动相 B / % 0.00 95 5 2.00 95 5 3.00 45 55 5.00 45 55 6.00 5 95 8.00 5 95 8.10 95 5 10.00 95 5 7.3.1.4 流速：0.4 mL / min。 7.3.1.5 进样量：5 μL。 7.3.2 质谱条件 7.3.2.1 离子源：电喷雾离子源（ESI） 。 7.3.2.2 扫描方式：正离子扫描。 7.3.2.3 检测方式：多反应监测模式（MRM） 。 7.3.2.4 监测离子对、定量离子对见表 2。 表 2 去甲乌药碱的监测离子对、定量离子对和非诺特罗的定量离子对 被测物 监测离子对（m / z） 定量离子对（m / z） 去甲乌药碱272.0 / 107.0 272.0 / 255.0272.0 / 107.0 非诺特罗 — 304.2 / 135.3 7.3.2.5 雾化气、气帘气 、辅助气、碰撞气均为高纯氮气及其他适合气体，使用前应调节各气体流 量以使质谱灵敏度达到检测要求，喷雾电压、去簇电压、碰撞气能量等参数值应优化至最佳灵敏度， 其他参考质谱参数参见附录 A。 7.3.3 液相色谱 - 质谱 / 质谱测定 7.3.3.1 定性测定 按照液相色谱 - 质谱 / 质谱条件测定试样和标准工作液，试样中目标化合物的保留时间与标准工4 SN / T 5171—2019作液中对应化合物的保留时间偏差在 ±2.5% 之内；定性离子对的相对丰度与浓度相当的标准工作液 的相对丰度一致，相对丰度偏差不超过表 3 的规定，且每个离子的信噪比均≥ 3，则可判断试样中存在相应的被测物。 表 3 定性确证时相对离子丰度的最大允许偏差 相对离子丰度 / % >50 20~50（含） 10~20（含） ≤ 10 允许的相对偏差 / % ±20 ±25 ±30 ±50 7.3.3.2 定量测定 将标准工作液和试样溶液依次注入液相色谱 - 质谱 / 质谱仪中，测得定量离子峰面积。标准工作 液和待测液中，去甲乌药碱和非诺特罗的响应值均应在仪器检测的定量线性范围内。在上述仪器条件下，去甲乌药碱的提取离子色谱图参见附录 B。 7.4 空白试验 除不加试样外，均按上述测定条件和步骤进行。 8 结果计算和表述 采用标准工作曲