中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T 5170—2019 出口动物源食品中肾上腺素和去甲 肾上腺素的测定 Determination of adrenaline and noradrenaline in animal-origin foodstuffs for export 2019-10-25 发布 2020-05-01 实施 中华人民共和国海关总署 发 布ICS 67.050 C 53 I SN / T 5170—2019前 言 本标准按照 GB / T 1.1— 2009 给出的规则起草。 本标准由中华人民共和国海关总署提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国武汉海关、武汉食品化妆品检验所、湖北省食品质量安全监 督检验研究院。 本标准主要起草人：江小明、王鹏、叶诚、江丰、陈丹、赵晓亚、王晗、罗静、王振华、詹承勇。1 SN / T 5170—2019出口动物源食品中肾上腺素和去甲肾上腺素的测定 1 范围 本标 准规定了出口动物源食品中肾上腺素、去甲肾上腺素残留量的液相色谱测定方法和液相色谱 - 质谱 / 质谱确证方法。 本标准适用于猪肉、牛肉、羊肉、牛奶、鸡蛋中肾上腺素、去甲肾上腺素残留量的测定，其他 食品也可参照使用。 2 规范性引用文件 下列文件对本文件的应用是必不可少的 。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB / T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 3 方法提要 猪肉 、牛肉、羊肉、鸡蛋中肾上腺素和去甲肾上腺素经焦性没食子酸 - 乙二胺四乙酸二钠溶 液提取，三氯甲烷去蛋白，乙腈饱和正己烷溶液除脂；牛奶用高氯酸溶液提取。试样用阳离子固 相萃取小柱净化后，经液相色谱仪测定，基质添加标准曲线外标法定量，阳性样品采用液相色谱 -质谱 / 质谱仪进行定性确证。 4 试剂和材料 除非另有说明，所用试剂均为分析纯，水为 GB / T 6682 规定的一级水。 4.1　甲醇（CH3OH，CAS 号：67-56-1） ：色谱纯。 4.2　乙腈（CH3CN，CAS 号：75-05-8） ：色谱纯。 4.3　甲酸（HCOOH，CAS 号：64-18-6） ：色谱纯。 4.4　正己烷（C6H14，CAS 号：110-54-3） 。 4.5　三氯甲烷（CHCl3，CAS 号：67-66-3） 。 4.6　磷酸（H3PO4，CAS 号：7664-38-2） 。 4.7　高氯酸（HClO4，CAS 号：7601-90-3） ：含量 70%~ 72%。 4.8　磷酸二氢钾（KH2PO4，CAS 号：7778-77-0） 。 4.9　乙酸铵（CH3COONH4，CAS 号：631-61-8） 。 4.10 　焦性没食子酸（C6H6O3，CAS 号：87-66-1） 。 4.11 　乙二胺四乙酸二钠（C10H14N2Na2O8，CAS 号：139-33-3） 。 4.12 　肾上腺素标准物质（C9H13O3N，CAS 号：51-42-3） ：纯度大于等于 95%。 4.13 　去甲肾上腺素标准物质（C8H11NO3，CAS 号：51-41-2） ：纯度大于等于 95%。 4.14 　高氯酸溶液（pH=2.0±0.2） ：吸取约 0.4 mL 高氯酸（4.7）至 1 L 水中，配制成 pH=2.0±0.2 的高氯酸水溶液。4.15 　试样提取液：准确称取 1.26 g 焦性没食子酸（4.10） 、1.86 g 乙二胺四乙酸二钠（4.11） ，加2 SN / T 5170—2019入 950 mL 水，加 50 mL 乙腈（4.2）混合均匀。 4.16 　乙腈饱和正己烷：量取 80 mL 正己烷 （4.4） 于 100 mL 分液漏斗中，加入适量乙腈 （4.2） 后， 剧烈振摇，待分配平衡后，弃去乙腈层即得。4.17 　磷酸二氢钾 - 磷酸水溶液（pH=4.0） ：准确称取 2.72 g 磷酸二氢钾（4.8） ，用水定容至 1 L， 用磷酸（4.6）调节 pH 至 4.0。4.18 　0.1% 甲酸甲醇溶液：准确移取 1 mL 甲酸（4.3） ，用甲醇（4.1）定容至 1 000 mL。 4.19 　洗脱液：移取 2 mL 甲酸（4.3）加入 100 mL 的乙腈 - 水溶液（85 ： 15，体积比）中。 4.20 　100 mmol / L 乙酸铵溶液：准确称取 3.85 g 乙酸铵（4.9） ，用水溶解，定容至 500 mL。 4.21 　40 mmol / L 乙酸铵溶液：准确称取 1.54 g 乙酸铵（4.9） ，用水溶解，定容至 500 mL。 4.22 　0.5 mmol / L 乙酸铵溶液：准确称取 0.038 5 g 乙酸铵（4.9） ，用水溶解，定容至 1 L。 4.23 　标准储备液：准确称取适量的肾上腺素标准物质（4.12） 、去甲肾上腺素标准物质（4.13） ，均 精确至 0.000 1 g，用 0.1% 甲酸甲醇溶液（4.18）溶解，配制成浓度为 1 000 mg / L 的标准储备液，-18 ℃ 条件下避光保存，有效期 3 个月。4.24 　混合标准中间溶液：分别准确移取 5.0 mL 肾上腺素、去甲肾上腺素的标准储备液（4.23）至 100 mL 棕色容量瓶中，用 0.1% 甲酸甲醇溶液（4.18）稀释至刻度，配制成浓度为 50.0 mg / L 的标准中间溶液，于 -18 ℃条件下避光保存，有效期 1 个月。 4.25 　基质混合标准工作溶液：将混合标准中间溶液（4.24）用磷酸二氢钾 - 磷酸水溶液（4.17） 稀释成浓度为 2.50 mg / L~ 50.0 mg / L 的标准系列溶液，称取与试样基质相应的阴性样品 5 g，加入 标准系列溶液 100 μL，与试样同时进行提取和净化，得到浓度分别为 125 μg / L~ 2 500 μg / L 的基质混 合标准工作溶液。4.26 　阳离子固相萃取（SPE）小柱：填料为 N- 乙烯基吡咯烷酮 - 二乙烯苯共聚物基质 -COOH 6 mL（150mg）或性能相当者。使用前依次用 6 mL 甲醇（4.1） 、6 mL 水对柱子进行活化。4.27 　微孔滤膜：通用型，0.22 μm。 5　仪器与设备 5.1　液相色谱仪：配荧光检测器。 5.2　液相色谱 - 质谱 / 质谱仪：配电喷雾离子源（ESI） 。5.3　组织捣碎机。5.4　涡旋混合器。5.5　电子分析天平：感量为 0.000 1g 和 0.01g。5.6　高速冷冻离心机：转速不低于 8 000 r / min。5.7　氮气吹干仪。5.8　pH 计。 6　试样制备与保存 6.1　试样制备6.1.1　猪肉、牛肉、羊肉 猪肉、牛肉、羊肉各约 500 g，放入组织捣碎机均质，充分混匀，均分成 2 份，分别装入清 洁容器内，并标明标记。3 SN / T 5170—20196.1.2　鸡蛋 取 16 枚新鲜鸡蛋（约 1 kg） ，洗净、去壳后充分混匀，均分成 2 份，分别装入清洁容器内， 并标明标记。 6.1.3　牛奶 将牛奶从冰箱中取出，放置至室温、摇匀，备用。 制样操作过程中，应防止样品受到污染或发生残留物含量的变化。 6.2　试样保存 猪肉、牛肉、羊肉、鸡蛋试样于 -20 ℃以下条件下保存；牛奶试样置于 0 ℃~4 ℃条件 下保存。 7　测定步骤 7.1　提取7.1.1　猪肉、牛肉、羊肉、鸡蛋 称取试样 5 g （精确到 0.01 g）于 50 mL 具塞离心管中，加入 10 mL 试样提取液（4.15） ，涡 旋提取 1 min，加入 5 mL 三氯甲烷（4.5） ，涡旋混匀 30 s，以 8 000 r / min 的转速离心 10 min 后，取全部上清液于另一 50 mL 离心管中，加入 5 mL 乙腈饱和正己烷（4.16） ，涡旋混匀 30 s，以 8 000 r / min 的转速离心 3 min，收集下层清液，用 100 mmol / L 乙酸铵溶液（4.20）定容到25 mL，待净化。 7.1.2　牛奶 称取试样 5 g（精确到 0.01 g）于 50 mL 具塞离心管中，加入 20 mL 高氯酸溶液（4.14） ，静置 20 min，于 4 ℃经涡旋提取 1 min，以 8 000 r / min 的转速离心 10 min，取出上清液，用 100 mmol / L 乙酸铵溶液（4.20）定容到 50 mL，待净化。7.2　净化 猪肉、牛肉、羊肉、鸡蛋样品取 7.1.1 中待净化溶液 12.5 mL 过 SPE 小柱 （4.26） ；牛奶样品取 7.1.2 待净化溶液 25 mL 过 SPE 小柱（4.26） 。控制流速为 1 mL / min~ 2 mL / min，再依次用 5 mL 40 mmol / L 乙酸铵溶液 （4.21） 和 5 mL 甲醇 （4.1） 淋洗柱子，经真空抽干，用 5 mL 洗脱液 （4.19） 洗脱，控制流速为 1 mL / min~ 2 mL / min，收集洗脱液，用氮气吹至干，用磷酸二氢钾 - 磷酸水 溶液（4.17）定容至 1 mL，过 0.22 μm 微孔滤膜（4.27） ，供液相色谱仪分析。 7.3　测定 7.3.1　液相色谱条件7.3.1.1 色谱柱：C18色谱柱，250 mm×4.6 mm（内径） ，粒径 5.0 μm 或性能相当者。 7.3.1.2 柱温：35 ℃。 7.3.1.3 流 动相：A 为磷酸二氢钾 - 磷酸水溶液（pH=4.0） （4.