书书书犐 犆 犛７ １．１ ０ ０．７ ０犢４ ２ 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 犛 犖／犜５ １ ５ １—２ ０ １ ９ 防晒化妆品中 ７种二苯酮类物质的测定高效液相色谱法 犇 犲 狋 犲 狉 犿 犻 狀 犪 狋 犻 狅 狀狅 犳狊 犲 狏 犲 狀犫 犲 狀 狕 狅 狆犺 犲 狀 狅 狀 犲 狊 犻 狀狊 狌 狀 狊 犮 狉 犲 犲 狀犮 狅 狊 犿 犲 狋 犻 犮 狊犫 狔犺 犻犵犺狆犲 狉 犳 狅 狉 犿 犪 狀 犮 犲 犾 犻 狇狌 犻 犱犮 犺 狉 狅 犿 犪 狋 狅 犵狉 犪狆犺狔 ２ ０ １ ９１ ０２ ５发布 ２ ０ ２ ００ ５０ １实施 中华人民共和国海关总署 发 布书书书前　　言 　　本标准按照 Ｇ Ｂ／Ｔ１． １—２ ０ ０ ９给出的规则起草 。请注意本文件的某些内容可能涉及专利 。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任 。本标准由中华人民共和国海关总署提出并归口 。本标准起草单位 ：中国检验检疫科学研究院 。本标准主要起草人 ：孟宪双、马强、李海玉、白桦、张庆、郭项雨、吕庆。 Ⅰ犛 犖／犜５ １ ５ １—２ ０ １ ９防晒化妆品中 ７种二苯酮类物质的测定高效液相色谱法 １　范围 本标准规定了防晒化妆品中 ７种二苯酮类物质的高效液相色谱测定方法 。本标准适用于乳液类和膏霜类防晒化妆品中 ７种二苯酮类物质的测定 。 ２　规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的 。凡是注日期的引用文件 ，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件 ，其最新版本 （包括所有的修改单 ）适用于本文件 。 Ｇ Ｂ／Ｔ６ ６ ８ ２　分析实验室用水规格和试验方法 ３　原理 试样经溶剂提取 ，微孔滤膜过滤后 ，经高效液相色谱法测定 ，外标法定量 ，液相色谱 质谱确认 。 ４　试剂和材料 除非另有说明 ，所用试剂均为分析纯 ，水为Ｇ Ｂ／Ｔ６ ６ ８ ２规定的一级水 。 ４．１　甲醇：色谱纯。 ４．２　四氢呋喃 ：色谱纯。 ４．３　标准品：７种二苯酮类物质标准品中文名称 、英文名称 、ＣＡ Ｓ号、分子式、结构式、相对分子质量参见附录Ａ中的表Ａ． １，纯度不小于 ９ ５％。 ４．４　７种二苯酮类物质的标准储备液 ：准确称取每种二苯酮类标准物质 （４． ３）各１ ０ｍｇ，精确至０． １ｍｇ，分别置于 １ ０ｍＬ容量瓶中 ，用甲醇（４． １）溶解并定容至刻度 ，摇匀，配制成浓度分别为 １０ ０ ０μｇ／ｍＬ的标准储备液 ，于４℃保存，可使用三个月 。 ４．５　７种二苯酮类物质的混合标准储备液 ：分别准确移取各标准储备液 （４． ４）１ｍＬ于２ ０ｍＬ容量瓶中，用甲醇（４． １）稀释至刻度 ，溶液中二苯酮类物质的浓度均为 ５ ０μｇ／ｍＬ。 ４．６　混合标准工作溶液 ：临用时准确移取 ７种二苯酮类物质的混合标准储备液 （４． ５）用甲醇（４． １）稀释成０． ５μｇ／ｍＬ、１μｇ／ｍＬ、２μｇ／ｍＬ、５μｇ／ｍＬ、１ ０μｇ／ｍＬ、２ ０μｇ／ｍＬ等系列浓度的工作溶液 。 ５　仪器和设备 ５．１　高效液相色谱 （ＨＰ Ｌ Ｃ）仪：配有紫外检测器或二极管阵列检测器 。 ５．２　液相色谱 质谱／质谱（Ｌ Ｃ  ＭＳ／ＭＳ）仪：配有电喷雾离子源 （Ｅ Ｓ Ｉ） 。 ５．３　分析天平 ：感量为０． ０ ０ ０１ ｇ和０． ０ ０ １ｇ。 ５．４　离心机：转速不低于 １ ００ ０ ０ｒ ｐｍ。 ５．５　超声波水浴 。 １犛 犖／犜５ １ ５ １—２ ０ １ ９５．６　涡旋混合器 。 ５．７　氮吹仪。 ５．８　具塞比色管 ：２ ５ｍＬ。 ５．９　具塞塑料离心管 ：１ ０ｍＬ。 ５．１ ０　微孔滤膜 ：０． ４ ５μｍ，有机相。 ６　测定步骤 ６．１　试样处理 称取０． １ｇ（精确至０． ０ ０ １ｇ）试样于２ ５ｍＬ具塞比色管 （５． ８）中，向比色管中加入 ２ｍＬ四氢呋喃 （４． ２） ，涡旋振荡混匀 ，加入８ ０％甲醇水溶液 （狏／狏）并定容至 １ ０ｍＬ，涡旋１ｍ ｉ ｎ，超声提取 １ ０ｍ ｉ ｎ。取部分提取溶液转移至 １ ０ｍＬ具塞塑料离心管 （５． ９）中，以１ ００ ０ ０ｒ ｐｍ离心１ ０ｍ ｉ ｎ，取１ｍＬ上清液经氮吹至近干后 ，用１ｍＬ甲醇重新溶解 ，过０． ４ ５μｍ微孔滤膜 （５． １ ０）后进行测定 。 ６．２　测定 ６．２．１　色谱条件 由于测试结果取决于所使用的仪器 ，因此不可能给出仪器分析的普遍参数 。经证明，采用下列操作条件是较为合适的 ： ａ）　色谱柱：Ｃ１ ８柱，５μｍ，２ ５ ０ｍｍ×４． ６ｍｍ （内径） ，或相当者 ； ｂ）　流动相：Ａ（含０． １％甲酸的水溶液 ，狏／狏） ，Ｂ（含０． １％甲酸的甲醇溶液 ，狏／狏） ，梯度洗脱程序见表１； ｃ）　流速：１． ０ｍＬ／ｍ ｉ ｎ； ｄ）　柱温：２ ５℃； ｅ）　检测波长 ：２ ９ ０ｎ ｍ； ｆ）　进样量：１ ０μＬ。 表１　梯度洗脱程序 时间／ｍ ｉ ｎ Ａ／％ Ｂ／％ ０ ４ ５ ５ ５ ８ ２ ０ ８ ０ １ ０ ２ ０ ８ ０ １ ３ ０ １ ０ ０ １ ５ ０ １ ０ ０ １ ６ ５ ５ ４ ５ ２ ０ ５ ５ ４ ５ ６．２．２　标准工作曲线的绘制 按６． ２． １的测定条件 ，将混合标准工作溶液浓度由低到高依次进样测定 ，以色谱峰的峰面积为纵坐标，与其对应的溶液浓度为横坐标作图 ，绘制标准工作曲线 。７种二苯酮类物质的高效液相色谱图参见附录Ｂ中的图Ｂ． １。 ２犛 犖／犜５ １ ５ １—２ ０ １ ９６．２．３　试样测定 按６． ２． １的测定条件对待测样液进行测定 ，用外标法定量 。待测样液中对二苯酮类物质的响应值应在标准曲线的线性范围内 ，超过线性范围则应稀释后再进样分析 。进行样品测定时 ，如果检出二苯酮类物质的色谱峰的保留时间与标准品一致 ，则可初步确认样品中存在被测二苯酮类物质 。必要时，阳性样品需用液相色谱 质谱进行确认试验 （参见附录 Ｃ） 。７种二苯酮类物质的多反应监测色谱图参见附录 Ｄ中的图Ｄ． １。 ６．３　空白试验 除不加试样外 ，均按上述测定条件和步骤进行 。 ７　结果计算 结果按式 （１）计算，计算结果保留两位小数 （计算结果应扣除空白值 ） ： 犆＝犇×ρ×犞犿…………………………（ １） 　　式中： 犆— — —化妆品中目标物质的含量 ，单位为毫克每千克 （ｍｇ／ｋｇ） ； 犇— — —稀释倍数 （若不稀释 ，则为１） ； ρ— — —由标准工作曲线计算出的样液中目标物质的浓度 ，单位为微克每毫升 （μｇ／ｍＬ） ； 犞— — —样液最终定容体积 ，单位为毫升 （ｍＬ） ； 犿— — —试样的质量 ，单位为克 （ｇ） 。 ８　测定低限 本方法中二苯酮  １和二苯酮  ８的测定低限为 ０． １ｍｇ／ｇ，二苯酮 ２、二苯酮 ３、二苯酮 ６和二苯酮  １ ０的测定低限为 ０． ２ｍｇ／ｇ，二苯酮 １ ２的测定低限为 ０． ４ｍｇ／ｇ。 ９　回收率 ７种二苯酮类物质的平均回收率为 ８ ４． ９％～９ ５． ２％；相对标准偏差为 １． ７％～８． ５％。 １ ０　允许差 在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不应超过算术平均值的 １ ０％。 ３犛 犖／犜５ １ ５ １—２ ０ １ ９附　录　犃（资料性附录 ） ７种二苯酮类物质信息 表犃．１　７种二苯酮类物质信息 中文名称 英文名称 ＣＡ Ｓ号 分子式 结构式 相对分子质量 二苯酮 １ Ｂ ｅ ｎ ｚ ｏ ｐｈ ｅ ｎ ｏ ｎ ｅ  １ １ ３ １  ５ ６  ６ Ｃ１ ３Ｈ１ ０Ｏ３ ２ １ ４． ２ ２ 二苯酮 ２ Ｂ ｅ ｎ ｚ ｏ ｐｈ ｅ ｎ ｏ ｎ ｅ  ２ １ ３ １  ５ ５  ５ Ｃ １ ３Ｈ１ ０Ｏ５ ２ ４ ６． ２ ２ 二苯酮 ３ Ｂ ｅ ｎ ｚ ｏ ｐｈ ｅ ｎ ｏ ｎ ｅ  ３ １ ３ １  ５ ７  ７ Ｃ １ ４Ｈ １２Ｏ３ ２ ２ ８． ２ ４ 二苯酮 ６ Ｂ ｅ ｎ ｚ ｏ ｐｈ ｅ ｎ ｏ ｎ ｅ  ６ １ ３ １  ５ ４  ４ Ｃ１ ５Ｈ１ ４Ｏ５ ２ ７ ４． ２ ７ 二苯酮 ８ Ｂ ｅ ｎ ｚ ｏ ｐｈ ｅ ｎ ｏ ｎ ｅ  ８ １ ３ １  ５ ３  ３ Ｃ １ ４Ｈ１ ２Ｏ４ ２ ４ ４． ２ ４ 二苯酮 １ ０ Ｂ ｅ ｎ ｚ ｏ ｐｈ ｅ ｎ ｏ ｎ ｅ  １ ０ １ ６ ４ １  １ ７  ４ Ｃ １ ５Ｈ１ ４Ｏ３ ２ ４ ２． ２ ７ 二苯酮 １ ２ Ｂ ｅ ｎ ｚ ｏ ｐｈ ｅ ｎ ｏ ｎ ｅ  １ ２ １ ８ ４ ３  ０ ５  ６ Ｃ ２ １Ｈ２ ６Ｏ３ ３ ２ ６． ４ ３ ４犛 犖／犜５ １ ５ １—２ ０ １ ９附　录　犅（资料性附录 ） ７种二苯酮类物质的高效液相色谱图 　　１— — —二苯酮 ２； ２— — —二苯酮 １； ３— — —二苯酮 ８； ４— — —二苯酮 ６； ５— — —二苯酮 ３； ６— — —二苯酮 １ ０； ７— — —二苯酮 １ ２。 图犅．１　７种二苯酮类物质的高效液相色谱图 ５犛 犖／犜５ １ ５ １—２ ０ １ ９附　录　犆（资料性附录 ） 高效液相色谱 质谱确证条件 犆．１　高效液相色谱条件 高效液相色谱条件如下 ： ａ）　色谱柱：Ｃ１ ８，３． ５μｍ，１ ５ ０ｍｍ×２． １ｍｍ （内径） ，或相当者 ； ｂ）　流动相：梯度洗脱程序见表 Ｃ． １； ｃ）　流速：０． ３ｍＬ／ｍ ｉ ｎ； ｄ）　柱温：３ ０℃； ｅ）　进样量：５μＬ。 表