书书书犐 犆 犛６ ７．０ ５ ０犆５ ３ 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 犛 犖／犜５ １ ４ ９—２ ０ １ ９ 出口动物源食品中卡麦角林残留量的测定液相色谱 质谱／质谱法 犇 犲 狋 犲 狉 犿 犻 狀 犪 狋 犻 狅 狀狅 犳犮 犪 犫 犲 狉 犵狅 犾 犻 狀 犲狉 犲 狊 犻 犱 狌 犲 狊 犻 狀犳 狅 狅 犱 狊 狋 狌 犳 犳 狊狅 犳犪 狀 犻 犿 犪 犾狅 狉 犻 犵犻 狀犳 狅 狉犲 狓 狆狅 狉 狋犔 犆  犕 犛／犕 犛犿 犲 狋 犺 狅 犱 ２ ０ １ ９１ ０２ ５发布 ２ ０ ２ ００ ５０ １实施 中华人民共和国海关总署 发 布书书书前　　言 　　本标准依据 Ｇ Ｂ／Ｔ１． １—２ ０ ０ ９给出的规则起草 。请注意本文件的某些内容可能涉及专利 ，本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任 。本标准由中华人民共和国海关总署提出并归口 。本标准起草单位 ：中华人民共和国石家庄海关 。本标准主要起草人 ：马育松、李玮、刘蓓蕾、王敬、陈瑞春、郭春海、艾连峰、张海超。 Ⅰ犛 犖／犜５ １ ４ ９—２ ０ １ ９出口动物源食品中卡麦角林残留量的测定液相色谱 质谱／质谱法 １　范围 本标准规定了出口动物源食品中卡麦角林液相色谱 质谱／质谱检测方法 。本标准适用于鸡肉 、猪肉、牛肉、牛脂肪、牛肝及牛奶等动物源食品中卡麦角林残留量的检测 。 ２　规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的 。凡是注日期的引用文件 ，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件 ，其最新版本 （包括所有的修改单 ）适用于本文件 。 Ｇ Ｂ／Ｔ６ ６ ８ ２　分析实验室用水规格和试验方法 ３　原理 采用乙腈提取样品中的卡麦角林 ，用乙腈饱和的正己烷脱脂 ，中性氧化铝柱净化 ，液相色谱 质谱／质谱仪测定 ，内标法定量 。 ４　试剂和材料 除非另有规定外 ，所有试剂均为分析纯 ，水为Ｇ Ｂ／Ｔ６ ６ ８ ２规定的一级水 。 ４．１　乙腈：高效液相色谱级 。 ４．２　正己烷：高效液相色谱级 。 ４．３　甲醇：高效液相色谱级 。 ４．４　甲酸：高效液相色谱级 。 ４．５　无水硫酸钠 。 ４．６　０． １％甲酸：准确量取 １． ０ｍＬ 甲酸（４． ４）溶于１Ｌ水中。 ４．７　０． １％甲酸水乙腈溶液 （９＋１，ｖ／ｖ） ：量取９ ０ｍＬ ０． １％ 甲酸水溶液 （４． ６）和１ ０ｍＬ乙腈，混匀。 ４．８　乙腈饱和的正己烷溶液 ：２ ０ｍＬ乙腈中加入 １ ０ ０ｍＬ 正己烷，充分振荡后 ，静置分层 ，取上层正己烷层备用 。 ４．９　卡麦角林 （Ｃ ａ ｂ ｅ ｒｇｏ ｌ ｉ ｎ ｅ，ＣＡ Ｓ：８ １ ４ ０ ９  ９ ０  ７ ，分子式：Ｃ２ ６Ｈ３ ７Ｎ５Ｏ２） ：纯度大于 ９ ９． ０％。 ４．１ ０　卡麦角林  Ｄ ５：纯度大于 ９ ９． ０％。 ４．１ １　标准储备溶液 （１ ０ ０μｇ／ｍＬ） ：精确称取卡麦角林标准品 １ ０ｍｇ（精确至０． １ｍｇ） ，用甲醇溶解并定容至１ ０ ０ｍＬ ，配制成１ ０ ０μｇ／ｍＬ的标准储备液 。此溶液在 －１ ８℃避光保存 ，有效期３个月。 ４．１ ２　标准中间溶液 （１μｇ／ｍＬ） ：准确移取标准储备液 １． ０ｍＬ（４． １ １）至１ ０ ０ｍＬ 容量瓶中 ，用甲醇定容至刻度，配制浓度为 １μｇ／ｍＬ，－１ ８℃以下避光保存 ，有效期为 １个月。 ４．１ ３　标准工作液 ：根据需要用定容液将标准中间液逐级稀释成所需的标准工作溶液 ，标准工作溶液需现用现配 。 ４．１ ４　标准内标储备溶液 （１ ０μｇ／ｍＬ） ：精确称取卡麦角林  Ｄ ５标准品１ｍｇ（精确至０． １ｍｇ） ，用甲醇溶 １犛 犖／犜５ １ ４ ９—２ ０ １ ９解并定容至 １ ０ ０ｍＬ ，配制成１ ０μｇ／ｍＬ的标准内标储备液 。此溶液在 －１ ８℃避光保存 ，有效期３个月。 ４．１ ５　标准内标工作液 （１ ０ ０ｎｇ／ｍＬ） ：准确移取标准内标中间溶液 ０． ５ｍＬ（４． １ ４）至５ ０ｍＬ容量瓶中 ，用甲醇定容至刻度 ，配制浓度为 １ ０ ０ｎｇ／ｍＬ，－１ ８℃避光保存 ，此溶液有效期一周 。 ４．１ ６　固相萃取柱 ：中性氧化铝柱 （Ａ ｌ ｕ ｍ ｉ ｎ ａ  Ｎ ） ，１０ ０ ０ｍ ｇ，３ｍＬ。 ４．１ ７　微孔滤膜 ：０． ２ ２μｍ，有机相针式过滤器 。 ５　仪器和设备 ５．１　液相色谱 质谱／质谱仪：配电喷雾离子源 （Ｅ Ｓ Ｉ） 。 ５．２　分析天平 ：感量分别为 ０． ０ １ｇ和０． １ｍｇ。 ５．３　均质器，转速不小于 １ ５０ ０ ０ｒ ／ｍ ｉ ｎ。 ５．４　离心机，转速不小于 ４０ ０ ０ｒ／ｍ ｉ ｎ。 ５．５　涡旋混合器 。 ５．６　组织捣碎机 。 ５．７　固相萃取装置 。 ５．８　氮吹仪。 ６　样品制备与保存 ６．１　鸡肉、猪肉、牛肉、牛脂肪、牛肝等动物组织取代表性样品约 ５ ０ ０ｇ，用粉碎机捣碎并混合混匀 ，装入洁净的容器中 ，密封并标识 ，将试样置于 －１ ８℃下保存。 ６．２　牛奶取代表性样品约 ５ ０ ０ｇ，装入洁净的容器中 ，密封并标识 ，将试样置于 ０℃～４℃下保存。 注：在取样、制样过程中 ，应防止样品受到污染或发生目标物含量的变化 。 ７　分析步骤 ７．１　提取 准确称取 ５ｇ（精确至０． ０ １ｇ）试样于５ ０ｍＬ离心管中 ，准确加入 ２ ５μＬ内标工作液 （４． １ ５） ，然后加入５ｇ无水硫酸钠和 ２ ５ｍＬ乙腈（４． １） ，１ ００ ０ ０ｒ ／ｍ ｉ ｎ均质２ｍ ｉ ｎ，５０ ０ ０ｒ／ｍ ｉ ｎ离心１ ０ｍ ｉ ｎ，取６ｍＬ上清液加入 １ ０ｍＬ乙腈饱和的正己烷 （４． ８） ，涡旋振荡 ２ｍ ｉ ｎ、离心，弃去上层溶液 ，下层溶液待净化 。 ７．２　净化 用５ｍＬ乙腈（４． １）活化中性氧化铝柱 （４． １ ６） ，当溶剂液面到达柱吸附表面时 ，立即移取 ５ｍＬ提取液（７． １）通过固相萃取柱 ，２ｍＬ乙腈洗涤中性氧化铝柱 ，收集全部流出液 ，于３ ５℃下用氮气吹干 。用 １ｍＬ０． １％ 甲酸水乙腈溶液 （４． ７）溶解残渣 ，涡旋２ｍ ｉ ｎ，过０． ２ ２μｍ有机相微孔滤膜后 ，供液相色谱 质谱／质谱测定 。 ７．３　测定 ７．３．１　液相色谱条件 液相色谱条件如下 ： ２犛 犖／犜５ １ ４ ９—２ ０ １ ９ａ）　色谱柱：Ｂ ＥＨＣ １ ８ ，１ ５ ０ｍｍ×２． １ｍｍ （ｉ ． ｄ．） ，１． ７μｍ；或相当者 ； ｂ）　柱温：４ ０℃； ｃ）　进样量：５μＬ； ｄ）　流速：０． ４ｍＬ／ｍ ｉ ｎ； ｅ）　流动相：梯度洗脱程序见表 １。 表１　流动相梯度洗脱程序 时间／ｍ ｉ ｎ ０． １％甲酸／％ 乙腈／％ ０． ０ ０ ９ ０ １ ０ １． ０ ０ ９ ０ １ ０ ５． ９ ０ １ ０ ９ ０ ６． ０ ０ ９ ０ １ ０ ７． ０ ０ ９ ０ １ ０ ７．３．２　质谱条件 质谱条件如下 ： ａ）　离子源：电喷雾离子源 ； ｂ）　扫描方式 ：正离子扫描 ； ｃ）　检测方式 ：多反应监测 （ＭＲＭ） ； ｄ）　使用前应调节各参数使质谱灵敏度达到检测要求 ，参考条件参见附录 Ａ。 ７．３．３　定量测定 在仪器最佳工作条件下 ，对标准工作溶液和样液进样 。内标法定量 ，标准工作溶液和样液中分析物的响应值均应在仪器的检测线性范围内 。对标准工作溶液和样液等体积进样测定 。在上述色谱条件下，卡麦角林标准溶液的多反应监测色谱图见附录 Ｂ。 ７．３．４　定性测定 在相同的试验条件下 ，样品与标准工作液中待测物质的质量色谱峰相对保留时间在 ２． ５％以内，并且在扣除背景后的样品谱图中 ，所选择的离子对均出现 ，同时与标准品的相对丰度允许偏差不超过表 ２规定的范围 ，则可判断样品中存在对应的被测物 。 表２　定性时相对离子丰度的最大允许偏差 相对离子丰度 ＞５ ０％ ＞２ ０％～５ ０％ ＞１ ０％～２ ０％ ≤１ ０％ 允许的相对偏差 ±２ ０％ ±２ ５％ ±３ ０％ ±５ ０％ ７．３．５　空白实验 除不称取样品外 ，均按上述测定条件和步骤进行 。 ８　结果计算和表述 用数据处理软件中的内标法 ，按照式（１）计算样品中卡麦角林残留量 ： ３犛 犖／犜５ １ ４ ９—２ ０ １ ９犡＝犚×犮×犞犚ｓ×犿…………………………（ １） 　　式中： 犡— — —试样中卡麦角林的含量 ，单位为微克每千克 （μｇ／ｋｇ） ； 犚— — —样液中的分析物与内标物峰面积比值 ； 犮— — —标准溶液中分析物的浓度 ，单位为纳克每毫升 （ｎｇ／ｍＬ） ； 犞— — —试样溶液最终定容体积 ，单位为毫升 （ｍＬ） ； 犚Ｓ— — —标准溶液中的分析物与内标物峰面积比值 ； 犿— — —试样的质量 ，单位为克 （ｇ） ； 注：计算结果应扣除空白值 。 ９　定量限、回收率 ９．１　定量限： 本方法对卡麦角林的定量限为 ０． １μｇ／ｋｇ。 ９．２　回收率范围 ： 部分回收率实验数据见表 ３。 表３　卡麦角林添加回收率 （狀＝８） 食品名称添加浓度 （μｇ／ｋｇ）平均值 （μｇ／ｋｇ）回收率 （％） 牛肉０． １ ０． ０ ９ ５ ８ ４． ０ ～１ １ ２． ０ ０． ２ ０． １ ８ ７ ８ ５． ５ ～１ ０ ５． ５ １． ０ ０． ９ ７ ０ ８ ８． ０ ～１ ０ ５． ０ 猪肉０． １ ０． ０ ９ ６ ８ ７． ０ ～１ ０ ５． ０ ０． ２ ０． １ ８ ８ ８ ８． ０ ～１ ０ １． ０ １． ０ ０．