书书书犐 犆 犛７ １．０ ４ ０犅４ ６ /G21 /G22 /G23 /G24 /G25 /G26 /G27 /G28 /G29 /G2A /G2B /G2C /G2B /G2D /G2E /G2F /G30 /G31 犛 犖／犜５ １ １ ６—２ ０ １ ９ /G32 /G28 /G33 /G34 /G35 /G36 /G37 、 /G38 /G39 /G3A /G3B /G3C /G3D 、 /G3E /G3F /G40 /G41 /G42 /G43 /G44 /G45 /G46  /G47 /G46／ /G47 /G46 /G48 犇 犲 狋 犲 狉 犿 犻 狀 犪 狋 犻 狅 狀狅 犳犿 犪 犾 犪 犮 犺 犻 狋 犲 犵狉 犲 犲 狀犪 狀 犱犮 狉 狔狊 狋 犪 犾狏 犻 狅 犾 犲 狋狉 犲 狊 犻 犱 狌 犲 狊 犻 狀犲 犱 犻 犫 犾 犲犪 犻 狀 犿 犪 犾 狊犪 狀 犱犳 犲 犲 犱 狊犳 狅 狉 犻 犿 狆狅 狉 狋犪 狀 犱犲 狓 狆狅 狉 狋—犔 犆  犕 犛／犕 犛犿 狋 犺 狅 犱 ２ ０ １ ９０ ９０ ３ /G49 /G4A ２ ０ ２ ００ ３０ １ /G4B /G4C /G21 /G22 /G23 /G24 /G25 /G26 /G27 /G28 /G29 /G2A /G2B /G49 /G4A rHgCb@g · ykbûR60
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SÑU.书书书前　　言 本标准按照 Ｇ Ｂ／Ｔ１． １—２ ０ ０ ９给出的规则起草 。本标准由中华人民共和国海关总署提出并归口 。本标准起草单位 ：中华人民共和国上海海关 、中华人民共和国南京海关 、中华人民共和国北京海关 。本标准主要起草人 ：赵善贞、张晓燕、崔凤云、霍忆慧、姜珊、李静静、程甲、宋蓉蓉、伊雄海、邓晓军、郭德华。 Ⅰ犛 犖／犜５ １ １ ６—２ ０ １ ９ rHgCb@g · ykbûR60
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SÑU.进出口食用动物 、饲料孔雀石绿 、结晶紫测定液相色谱 质谱／质谱法 １　范围 本标准规定了进出口食用动物和饲料中孔雀石绿 、结晶紫及其代谢物隐色孔雀石绿 、隐色结晶紫的液相色谱 质谱／质谱测定方法 。本标准适用于鱼 、虾、蟹、贝、鱼粉、植物源性饲料 、浓缩饲料 、配合饲料 、饲料添加剂 、精料补充料中孔雀石绿 、隐色孔雀石绿 、结晶紫、隐色结晶紫的测定 。 ２　规范性引用文件 下列文件对于文本件的应用是必不可少的 。凡是注日期的引用文件 ，仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件 ，其最新版本 （包括所有的修改单 ）适用于本文件 。 Ｇ Ｂ／Ｔ６ ６ ８ ２　分析实验室用水规格和试验方法 。 ３　方法提要 试样中的孔雀石绿 、隐色孔雀石绿 、结晶紫、隐色结晶紫残留用乙腈提取 ，中性氧化铝和阳离子交换 固相萃取柱净化 ，液相色谱 质谱／质谱仪检测 ，内标法定量 。 ４　试剂材料 除另有说明外 ，所用试剂均为分析纯 ，水为去离子水 ，符合Ｇ Ｂ／Ｔ６ ６ ８ ２要求。 ４．１　乙腈：色谱级。 ４．２　甲醇：色谱级。 ４．３　二氯甲烷 ：色谱级。 ４．４　甲酸：色谱级。 ４．５　乙酸铵：色谱级。 ４．６　盐酸羟胺 。 ４．７　对甲苯磺酸 。 ４．８　氨水：２ ５～２ ８％。 ４．９　中性氧化铝柱 ：１ｇ／３ｍＬ，使用前用 ５ｍＬ乙腈活化 。 ４．１ ０　阳离子交换柱 ：６ ０ｍｇ／３ｍＬ，使用前用 ３ｍＬ甲醇，３ｍＬ２％ 甲酸溶液活化 。 ４．１ １　０． ２ ５ｇ／ｍＬ盐酸羟胺溶液 ：称取２ ５ｇ盐酸羟胺 ，用水溶解并定容至 １ ０ ０ｍＬ 。 ４．１ ２　１ｍ ｏ ｌ／Ｌ对甲苯磺酸溶液 ：称取１ ７． ２ｇ对甲苯磺酸 ，用水溶解并定容至 １ ０ ０ｍＬ 。 ４．１ ３　５ｍｍ ｏ ｌ／Ｌ乙酸铵溶液 ：精确称取 ０． ４ ３ ５ｇ乙酸铵（精确至０． ０ １ｇ） ，用水溶解并定容至 １Ｌ。 ４．１ ４　２％甲酸溶液 ：准确移取 ２ｍＬ甲酸，用水定容到 １ ０ ０ｍＬ 。 １犛 犖／犜５ １ １ ６—２ ０ １ ９ rHgCb@g · ykbûR60
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SÑU.４．１ ５　含５％氨水的甲醇溶液 ：准确移取 ５ｍＬ氨水，用甲醇定容到 １ ０ ０ｍＬ 。 ４．１ ６　５ｍｍ ｏ ｌ／Ｌ乙酸铵溶液 ，含０． １％甲酸：精确称取 ０． ４ ３ ５ｇ乙酸铵（精确至０． ０ １ｇ） ，加入１ｍＬ甲酸，用水溶解并定容至 １Ｌ。 ４．１ ７　含０． １％甲酸的乙腈 ；准确移取 １ｍＬ甲酸用乙腈定容到 １Ｌ。 ４．１ ８　标准品：孔雀石绿 （Ｍ ａ ｌ ａ ｃ ｈ ｉ ｔ ｅＧ ｒ ｅ ｅ ｎＣＡ Ｓ 号：２ ４ ３ ７  ２ ９  ８ ） 、Ｄ５孔雀石绿 （Ｄ５ Ｍ ａ ｌ ａ ｃ ｈ ｉ ｔ ｅＧ ｒ ｅ ｅ ｎ ） 、隐色孔雀石绿 （Ｌ ｅ ｕ ｃ ｏ ｍ ａ ｌ ａ ｃ ｈ ｉ ｔ ｅＧ ｒ ｅ ｅ ｎＣＡ Ｓ 号：１ ２ ９  ７ ３  ７ ） 、Ｄ６隐色孔雀石绿 （Ｄ６ Ｌ ｅ ｕ ｃ ｏ ｍ ａ ｌ ａ ｃ ｈ ｉ ｔ ｅＧ ｒ ｅ ｅ ｎ ） 、结晶紫（Ｃ ｒｙｓ ｔ ａ ｌＶ ｉ ｏ ｌ ｅ ｔＣＡ Ｓ 号：５ ４ ８  ６ ２  ９ ） 、Ｄ６结晶紫（Ｄ６ Ｃ ｒｙｓ ｔ ａ ｌＶ ｉ ｏ ｌ ｅ ｔ ） 、隐色结晶紫 （Ｌ ｅ ｕ ｃ ｏ ｃ ｒｙｓ ｔ ａ ｌＶ ｉ ｏ ｌ ｅ ｔＣＡ Ｓ 号：６ ０ ３  ４ ８  ５ ） 、Ｄ６隐色结晶紫 （Ｄ６ Ｌ ｅ ｕ ｃ ｏ ｃ ｒ ｙｓ ｔ ａ ｌＶ ｉ ｏ ｌ ｅ ｔ ） ，纯度均大于 ９ ８％。 ４．１ ９　标准工作溶液的配制 ：分别称取 ０． ０ １ｇ（精确到０． ０ ０ ００ １ ｇ）孔雀石绿 、隐色孔雀石绿 、结晶紫、隐色结晶紫标准品 ，分别用乙腈溶解并定容至 １ ０ｍＬ，各种标准储备溶液浓度为 １ｍｇ／ｍＬ；标准储备溶液于－１ ８℃冰箱内避光保存 ，有效期为 ６个月。分别移取适量上述标准储备溶 ，用乙腈溶液逐级稀释 ，配成１ ０ ０ｎｇ／ｍＬ的标准工作溶液 ，于４℃冰箱内避光保存 ，有效期为 １个月。 ４．２ ０　内标标准工作溶液的配制 ：分别称取 ０． ０ １ｇ（精确到０． ０ ０ ００ １ ｇ）Ｄ５孔雀石绿 、Ｄ６隐色孔雀石绿 、 Ｄ６结晶紫、Ｄ６隐色结晶紫标准品 ，分别用乙腈溶解并定容至 １ ０ｍＬ，各种内标标准储备溶液浓度为 １ｍｇ／ｍＬ；标准储备溶液于 －１ ８℃冰箱内避光保存 ，有效期为 ６个月。分别移取适量上述内标标准储备溶，用乙腈溶液逐级稀释 ，配成１ ０ ０ｎｇ／ｍＬ的内标标准工作溶液 ，于４℃冰箱内避光保存 ，有效期为 １个月。 ４．２ １　标准曲线的绘制 ：根据需要吸取一定量的标准工作溶液以及内标标准工作溶液 ，用空白溶液配制成标准曲线 ，临用前现配 。 ４．２ ２　滤膜：０． ２ ２μｍ有机相滤膜 。 ５　仪器和设备 ５．１　液相色谱 质谱／质谱仪：配有电喷雾离子源 （Ｅ Ｓ Ｉ） 。 ５．２　分析天平 ：精确至０． ０ ０ ００ １ ｇ和０． ０ １ｇ。 ５．３　均质器。 ５．４　离心机：转速可达 １ ００ ０ ０ｒ ／ｍ ｉ ｎ。 。 ５．５　超声波发生装置 。 ５．６　旋转蒸发仪 。 ５．７　固相萃取装置 。 ６　试样制备与保存 　　取样品中有代表性的部分约 ５ ０ ０ｇ，均分成两份 ，分别装入洁净容器作为试样 ，密封，并标明标记 。将试样置于 －１ ８℃避光保存 。 注：在制样的操作过程中 ，应防止样品污染或发生残留物含量的变化 。 ７　前处理步骤 ７．１　鱼、虾、蟹、贝样品的提取 、净化 ７．１．１　提取 称取５ｇ样品（精确到０． ０ １ｇ）于５ ０ｍＬ塑料离心管中 ，加入２ ０μＬ内标标准工作液 ，加入１ ０ｍＬ乙 ２犛 犖／犜５ １ １ ６—２ ０ １ ９ rHgCb@g · ykbûR60
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SÑU.腈，匀浆２ｍ ｉ ｎ（１ ００ ０ ０ｒ ／ｍ ｉ ｎ） ，超声提取 １ ０ｍ ｉ ｎ，离心３ｍ ｉ ｎ（３０ ０ ０ｒ／ｍ ｉ ｎ） ，取上清液 ，再加入１ ０ｍＬ乙腈，重复提取一次 ，用乙腈定容到 ２ ５ｍＬ待净化。 ７．１．２　净化 取５ｍＬ提取液至中性氧化铝柱上 ，用４ｍＬ乙腈淋洗固相萃取柱 ，收集流出液 ，４ ５ ℃氮吹至 ０． ５ｍＬ左右，残液用乙腈定容至 １ｍＬ，加入１ｍＬ乙酸铵溶液混匀 ，过０． ２ ２μｍ微孔滤膜 ，上机分析 。 ７．２　其他样品的提取 、净化 ７．２．１　提取 称取２ｇ样品（精确到０． ０ １ｇ）于５ ０ｍＬ塑料离心管中 ，加入２ ０μＬ内标标准工作液 ，依次加入 １ｍＬ盐酸羟胺溶液 ，２ ｍＬ对甲苯磺酸溶液 、２ ｍＬ乙酸铵缓冲溶液 、４ ０ ｍＬ 乙腈溶液 ，匀浆２ ｍ ｉ ｎ（１ ００ ０ ０ｒ ／ｍ ｉ ｎ） ，超声提取 １ ０ｍ ｉ ｎ，离心３ｍ ｉ ｎ（３０ ０ ０ｒ／ｍ ｉ ｎ） ，将上清液转移到 ２ ５ ０ｍＬ 分液漏斗中 ，残渣用２ ０ｍＬ乙腈重复提取一次 ，合并上清液 。分液漏斗中加入 ３ ０ｍＬ二氯甲烷 ，３ ５ｍＬ水，振摇２ｍ ｉ ｎ，静置分层 ，收集有机相层于梨形瓶中 ，再用２ ０ｍＬ二氯甲烷萃取一次 ，合并有机层 ，４ ５℃旋转蒸发至近干，用６ｍＬ乙腈分三次 （每次２ｍＬ）溶解上述提取物 。 ７．２．２　净化 将中性氧化铝柱串接在阳离子交换柱上方 ，取３ｍＬ提取液至中性氧化铝柱上 ，依次过柱 ，用２ｍＬ甲醇淋洗 ，