书书书　 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 犛 犖／犜４ ８ ９ ０—２ ０ １ ７ 出口食品中姜黄素的测定高效液相色谱法和液相色谱 质谱／质谱法 犇 犲 狋 犲 狉 犿 犻 狀 犪 狋 犻 狅 狀狅 犳犮 狌 狉 犮 狌 犿 犻 狀 狅 犻 犱 狊 犻 狀犳 狅 狅 犱 狊 狋 狌 犳 犳 狊犳 狅 狉犲 狓 狆狅 狉 狋—犎 犘 犔 犆犿 犲 狋 犺 狅 犱犪 狀 犱犎 犘 犔 犆  犕 犛 ／犕 犛犿 犲 狋 犺 狅 犱 ２ ０ １ ７０ ８２ ９发布 ２ ０ １ ８０ ４０ １实施 中 华 人 民 共 和 国 国家质量监督检验检疫总局发 布 rHgCb@g · ykbûR60
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SÑU.书书书前　　言 　　本标准按照 Ｇ Ｂ／Ｔ１． １—２ ０ ０ ９给出的规则起草 。请注意本文件的某些内容可能涉及专利 。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任 。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口 。本标准起草单位 ：中华人民共和国厦门出入境检验检疫局 、中华人民共和国陕西出入境检验检疫局。本标准主要起草人 ：陈鹭平、方恩华、徐敦明、林立毅、林建忠、洪煜琛、王鹭骁、孙婷、黎翠玉。 Ⅰ犛 犖／犜４ ８ ９ ０—２ ０ １ ７ rHgCb@g · ykbûR60
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SÑU.出口食品中姜黄素的测定高效液相色谱法和液相色谱 质谱／质谱法 １　范围 本标准规定了出口食品中姜黄素的高效液相色谱法和液相色谱 质谱／质谱测定方法 。本标准适用于果冻 、巧克力制品 、碳酸饮料 、麦片、冰淇淋、调制乳粉 、调味糖浆 、粉圆、复合调味料 、酥炸粉、腌渍的蔬菜 、方便面饼 、膨化食品等食品中姜黄素总量的测定和确证 。 ２　规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的 。凡是注日期的引用文件 ，仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件 ，其最新版本 （包括所有的修改单 ）适用于本文件 。 Ｇ Ｂ／Ｔ６ ６ ８ ２　分析实验室用水规格和试验方法 ３　术语和定义 下列术语和定义适用于本文件 。 ３．１姜黄素类化合物 　犮 狌 狉 犮 狌 犿 犻 狀 狅 犻 犱 狊姜黄素类化合物 ，亦称“姜黄色素 ”或“总姜黄素 ” ，化学结构上因携带甲氧基 “ＣＨ３Ｏ ”个数不同而 分为三种化合物 。包括姜黄素 （Ｃ ｕ ｒ ｃ ｕ ｍ ｉ ｎ ） 、脱甲氧基姜黄素 （Ｄ ｅ ｍ ｅ ｔ ｈ ｏ ｘ ｙｃ ｕ ｒ ｃ ｕ ｍ ｉ ｎ ） 、双脱甲氧基姜黄素（Ｂ ｉ ｓ ｄ ｅ ｍ ｅ ｔ ｈ ｏ ｘ ｙｃ ｕ ｒ ｃ ｕ ｍ ｉ ｎ ） ，其含量之和称为姜黄素总含量 （ｍｇ／ｋｇ） 。 ３．２食品添加剂 　姜黄　狋 狌 狉 犿 犲 狉 犻 犮姜科姜黄属植物原料或其粗提取产物 ，为粉状或油膏状 ，其中的姜黄素总含量较低 ，三种姜黄素的 含量水平近似 。 ３．３食品添加剂 　姜黄素　犮 狌 狉 犮 狌 犿 犻 狀 狊姜科姜黄属植物粗提取产物 ，再经物理方法精制而得 ，为结晶状 ，姜黄素总含量较高 ，其中Ｃ ｕ ｒⅠ的含量相对偏高 。 第一法　高效液相色谱法 ４　方法提要 采用甲醇 水溶液提取试样中的姜黄素 ，提取液直接过滤后测定 ，对于杂质干扰严重或含量较低的 食品样品需要用聚酰胺固相萃取柱富集和净化 ，洗脱液氮气吹干定容 。用高效液相色谱仪 ，ＤＡＤ或 ＵＶ  ｖ ｉ ｓ检测器测定 ，外标法峰面积定量 。 １犛 犖／犜４ ８ ９ ０—２ ０ １ ７ rHgCb@g · ykbûR60
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SÑU.５　试剂和材料 除另有说明外 ，所用试剂均为分析纯 ，水为Ｇ Ｂ／Ｔ６ ６ ８ ２规定的一级水 。 ５．１　甲醇：液相色谱级 。 ５．２　乙腈：液相色谱级 。 ５．３　甲酸：液相色谱级 。 ５．４　氨水：３ ６％，分析纯。 ５．５　２％氨化甲醇溶液 ：量取２ｍＬ氨水（５． ４） ，用甲醇（５． １）溶解并定容至 １ ０ ０ｍＬ ，混匀。 ５．６　０． １％甲酸水溶液 ：量取１ｍＬ甲酸（５． ３） ，加水溶解并定容至 １０ ０ ０ｍＬ ，混匀。 ５．７　０． １％甲酸乙腈溶液 ：量取１ｍＬ甲酸（５． ３） ，加乙腈溶解并定容至 １０ ０ ０ｍＬ ，混匀。 ５．８　提取溶剂 ：甲醇水（７＋３，体积比） ，量取７ ０ ０ｍＬ 甲醇（５． １）和３ ０ ０ｍＬ 水，混匀。 ５．９　淋洗溶剂 ：５％甲醇水（体积比） ，量取５ｍＬ甲醇（５． １）和９ ５ｍＬ水，混匀。 ５．１ ０　姜黄素（以下简称 Ｃ ｕ ｒⅠ）标准物质 ：Ｃ ｕ ｒ ｃ ｕ ｍ ｉ ｎ ，Ｃ２ １Ｈ２ ０Ｏ６，ＣＡ Ｓ号：４ ５ ８  ３ ７  ７ ，纯度≥９ ８％。标准 物质详细信息见附录 Ａ中表Ａ． １。 ５．１ １　脱甲氧基姜黄素 （以下简称 Ｃ ｕ ｒⅡ）标准物质 ：Ｄ ｅ ｍ ｅ ｔ ｈ ｏ ｘ ｙｃ ｕ ｒ ｃ ｕ ｍ ｉ ｎ ，Ｃ２ ０Ｈ１ ８Ｏ５，ＣＡ Ｓ号：２ ２ ６ ０ ８  １ １  ３，纯度≥９ ８％。 ５．１ ２　双脱甲氧基姜黄素 （以下简称 Ｃ ｕ ｒⅢ）标准物质 ：Ｂ ｉ ｄ ｅ ｍ ｅ ｔ ｈ ｏ ｘ ｙｃ ｕ ｒ ｃ ｕ ｍ ｉ ｎ ，Ｃ１ ９Ｈ１ ６Ｏ４，ＣＡ Ｓ号： ２ ４ ９ ３ ９  １ ６  ０ ，纯度≥９ ８％。 ５．１ ３　标准储备液 ：准确称取适量的 （精确至０． １ｍｇ）三种姜黄色素标准物质 ，混合后用甲醇溶解定容至 ５ ０ｍＬ，以Ｃ ｕ ｒⅠ、Ｃ ｕ ｒⅡ和Ｃ ｕ ｒⅢ分别计，溶液浓度各自相当于 ２ ０ ０ｍｇ／Ｌ。０℃～４℃避光保存 ，６个月内含量稳定 。 ５．１ ４　标准工作溶液 ：吸取适量标准储备液 （５． １ ３） ，用提取溶剂 （５． ８） ，配成０． ５ ０ ０ｍ ｇ／Ｌ，１． ０ ０ｍｇ／Ｌ， １ ０． ０ｍｇ／Ｌ，２ ０． ０ｍｇ／Ｌ，１ ０ ０ｍｇ／Ｌ的标准工作溶液 ，临用前配制 ，０℃～４℃避光保存 。 ５．１ ５　Ａ ｎｐｅ ｌ ｃ ｌ ｅ ａ ｎＰ Ａ 聚酰胺固相萃取柱或相当者 ：规格６ ０ｍｇ，３ｍＬ。 ５．１ ６　亲水性聚四氟乙烯 （Ｐ Ｔ Ｆ Ｅ）针式微孔滤膜或相当者 ：规格１ ３ｍｍ，０． ４ ５μｍ。 ６　仪器与设备 ６．１　高效液相色谱仪 ，配有二极管阵列检测器或配有 ＵＶ  ｖ ｉ ｓ检测器。 ６．２　分析天平 ：感量０． ０ １ｇ和０． １ｍｇ。 ６．３　均质器，转速不小于 １ ５０ ０ ０ｒ ／ｍ ｉ ｎ。 ６．４　离心机：转速不低于 ４５ ０ ０ｒ／ｍ ｉ ｎ。 ６．５　离心管：５ ０ｍＬ塑料离心管 。 ６．６　氮吹仪。 ７　测定步骤 ７．１　试样制备与保存 在制样的操作过程中 ，应防止样品污染或发生残留物含量的变化 。 取代表性样品约 ５ ０ ０ｇ，用粉碎机充分粉碎 ，混匀，均匀性较好的液体样品不用均质直接取用 。试样均分为两份 ，装入洁净玻璃容器 ，密封，并标明标记 。于４℃以下存放 。 ２犛 犖／犜４ ８ ９ ０—２ ０ １ ７ rHgCb@g · ykbûR60
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SÑU.７．２　含干扰物质较少的食品 （如面条等 ）直接提取 称取试样约 ２． ５ｇ（精确至０． ０ １ｇ）于５ ０ｍＬ离心管中 ，加入２ ０ｍＬ甲醇水（５． ８） ，在均质器上均质提取１ｍ ｉ ｎ后，将试样提取液全部转入 ２ ５ｍＬ容量瓶中 ，用甲醇水（５． ８）定容到２ ５ｍＬ，混匀后转移到另外干净离心管中 ，以４０ ０ ０ｒ／ｍ ｉ ｎ离心２ｍ ｉ ｎ后，直接取上清液过 ０． ４ ５μｍ亲水聚四氟乙烯 （Ｐ Ｔ Ｆ Ｅ）针式滤膜，供仪器测定 。 ７．３　含干扰物质较多的食品 （如乳粉，冰淇淋、焙烤坚果等 ）需净化 称取试样约 ２． ５ｇ（精确至０． ０ １ｇ）于５ ０ｍＬ离心管中 ，加入２ ０ｍＬ甲醇水（５． ８） ，在均质器上均质提取１ｍ ｉ ｎ后，将试样提取液全部转入 ２ ５ｍＬ容量瓶中 ，用甲醇水（５． ８）定容到２ ５ｍＬ，混匀后转移到另外干净离心管中 ，以４０ ０ ０ｒ／ｍ ｉ ｎ离心２ｍ ｉ ｎ，取上清提取液 ２． ５ｍＬ 待净化。聚酰胺固相萃取柱使用前 ，依次用３ｍＬ甲醇、３ｍＬ水活化。将上清提取液 ２． ５ｍＬ 全部过柱 ，过滤速度不宜过快 。上样完毕后 ，以２ｍＬ５％ 甲醇水（５． ９）淋洗固相萃取柱 ，淋洗后抽干固相萃取柱 。用 １． ０ｍＬ的２％氨化甲醇 （５． ５）洗脱并收集 ，洗脱液需尽快转移到氮吹仪 ，在４ ０ ℃用氮气吹干后 ，用 １． ０ ０ｍＬ 甲醇（５． １）溶解定容 ，过０． ４ ５μｍ亲水聚四氟乙烯 （Ｐ Ｔ Ｆ Ｅ）针式滤膜 ，供仪器测定 。 ７．４　测定 ７．４．１　液相色谱参考条件 ７．４．１．１　色谱柱：ＣＮＷ  Ａ ｔ ｈ ｅ ｎ ａＣ １ ８  ＷＰ ，１ ２ ０?，４． ６ｍｍ×２ ５ ０ｍｍ ，５μｍ，或相当者 。 ７．４．１．２　流动相：Ａ：０． １％甲酸水溶液 （５． ６） ，Ｂ：０． １％甲酸乙腈溶液 （５． ７） ，４ ５＋５ ５（体积比） 。 ７．４．１．３　洗脱方式 ：等度，１ ８ｍ ｉ ｎ。 ７．４．１．４　柱温：２ ５℃。 ７．４．１．５　进样量：１ ５μＬ。 ７．４．１．６　流速：１． ０ ０ｍＬ ／ｍ ｉ ｎ。 ７．４．１．７　检测器检测波长 ：４ ２ ０ｎ ｍ。 ７．４．２　色谱测定 定量测定 ：在仪器最佳工作条件下 ，对混合标准工作溶液进样测定 ，以待测物的浓度为横坐标 ，以待测物的峰面积为纵坐标绘制标准