书书书　 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 犛 犖／犜４ ７ ７ ７—２ ０ １ ７ 出口茶叶中蒽醌残留量的检测方法气相色谱 质谱／质谱法 犇 犲 狋 犲 狉 犿 犻 狀 犪 狋 犻 狅 狀狅 犳犪 狀 狋 犺 狉 犪 狇狌 犻 狀 狅 狀 犲狉 犲 狊 犻 犱 狌 犲 狊 犻 狀狋 犲 犪犳 狅 狉犲 狓 狆狅 狉 狋—犌 犆  犕 犛／犕 犛犿 犲 狋 犺 狅 犱 ２ ０ １ ７０ ５１ ２发布 ２ ０ １ ７１ ２０ １实施 中 华 人 民 共 和 国 国家质量监督检验检疫总局发 布 rHgCb@g · ykbûR60
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SÑU.书书书前　　言 　　本标准按照 Ｇ Ｂ／Ｔ１． １—２ ０ ０ ９给出的规则起草 。请注意本文件的某些内容可能涉及专利 。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任 。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口 。本标准起草单位 ：浙江省检验检疫科学技术研究院 、中华人民共和国上海出入境检验检疫局 。本标准主要起草人 ：谢文、陆勋元、黄超群、陈丽、申屠炎、楼成杰、于卓然、邓晓军、谢韵第。 Ⅰ犛 犖／犜４ ７ ７ ７—２ ０ １ ７ rHgCb@g · ykbûR60
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SÑU.出口茶叶中蒽醌残留量的检测方法气相色谱 质谱／质谱法 １　范围 本标准规定了出口绿茶 、红茶、普洱茶、乌龙茶中 ９，１ ０ 蒽醌残留量的气相色谱 质谱／质谱法测定方法。本标准适用于绿茶 、红茶、普洱茶、乌龙茶中 ９，１ ０ 蒽醌残留量的定量测定和确证 。 ２　规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的 。凡是注日期的引用文件 ，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件 ，其最新版本 （包括所有的修改单 ）适用于本文件 。 Ｇ Ｂ／Ｔ６ ６ ８ ２　分析实验室用水规格和试验方法 ３　方法提要 试样用正己烷 丙酮混合溶剂均质后提取 ，提取液浓缩后 ，再用弗罗里硅土柱净化 ，采用气相色谱 质谱／质谱仪检测和确证 ，内标法定量 。 ４　试剂和材料 除非另有说明 ，所用试剂均为分析纯 ，所用水为符合 Ｇ Ｂ／Ｔ６ ６ ８ ２规定的一级水 。 ４．１　正己烷：色谱纯。 ４．２　丙酮：色谱纯。 ４．３　乙醚：色谱纯。 ４．４　氯化钠。 ４．５　无水硫酸钠 ：６ ５ ０℃灼烧４ｈ，在干燥器内冷却至室温 ，贮于密封瓶中备用 。 ４．６　弗罗里硅土 ：粒度７ ５μｍ～１ ５ ０μｍ（１ ０ ０目～２ ０ ０目） ，６ ５ ０℃灼烧４ｈ，使用１ ３ ０℃活化４ｈ在干燥器内冷却至室温 ，加２％的水脱活 ，备用。 ４．７　正己烷丙酮（１＋１，体积比） ：取等体积的正己烷和丙酮混合均匀 。 ４．８　正己烷乙醚（８＋２，体积比） ：取正己烷和乙醚 （８＋２，体积比）混合均匀 。 ４．９　９，１ ０ 蒽醌、９，１ ０ 蒽醌 Ｄ ８标准物质 （Ａ ｎ ｔ ｈ ｒ ａｑｕ ｉ ｎ ｏ ｎ ｅ，ＣＡ Ｓ：８ ４  ６ ５  １，Ｃ１ ４Ｈ８Ｏ２；Ａ ｎ ｔ ｈ ｒ ａｑｕ ｉ ｎ ｏ ｎ ｅ  Ｄ ８ ， ＣＡ Ｓ：１ ０ ４ ３ ９  ３ ９  １ ） ：纯度大于或等于 ９ ９％。 ４．１ ０　标准储备溶液 ：准确称取适量标准物质 （４． ９） ，用丙酮配制成 ０． ４ｍｇ／ｍＬ的标准储备液 ，于０℃～４℃冰箱内避光储存 ，有效期６个月。 ４．１ １　蒽醌 Ｄ ８标准储备溶液 ：准确称取适量标准品 （４． ９） ，用丙酮配制成 ０． ４ｍｇ／ｍＬ的标准储备液 ，于 ０℃～４℃冰箱内避光储存 ，有效期６个月。 ４．１ ２　标准中间液的配制 ：准确移取标准储备液适量 （４． １ ０） ，用丙酮配制成 １ ０μｇ／ｍＬ的标准溶液 ；准确移取标准储备液适量 （４． １ １） ，用丙酮配制成 ０． ２μｇ／ｍＬ的标准溶液于 ０℃～４℃冰箱内避光储存 ，有效 １犛 犖／犜４ ７ ７ ７—２ ０ １ ７ rHgCb@g · ykbûR60
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SÑU.期３个月。 ４．１ ３　标准工作溶液的配制 ：根据需要将标准中间溶液 （４． １ ２）用丙酮稀释成适当浓度的标准工作溶液 。 ４．１ ４　净化柱：２ ０ ０ｍｍ×１ ５ｍｍ （内径）玻璃柱，底部垫约 ５ｍｍ高脱脂棉和约 １ ０ｍｍ 高无水硫酸钠 ， １ ０ｇ弗罗里硅土 （４． ６） ，用正己烷湿法装柱 ，顶端加约 １ ０ｍｍ 高无水硫酸钠 ，弃去淋洗液 （在使用前需先做淋洗曲线 ） 。 ４．１ ５　微孔滤膜 ：０． ２ ２μｍ，有机相型 。 ５　仪器和设备 ５．１　气相色谱 质谱／质谱仪：配有（Ｅ Ｉ）离子源。 ５．２　分析天平 ：感量０． ０ ０ ０１ ｇ和０． ０ １ｇ。 ５．３　涡旋混合器 。 ５．４　均质器。 ５．５　离心机：最大转速 ４０ ０ ０ｒ／ｍ ｉ ｎ。 ５．６　旋转蒸发仪 。 ５．７　粉碎机。 ６　试样制备与保存 取代表性样品约 ２ ５ ０ｇ，经粉碎机粉碎并全部通过 ２ ０目圆孔筛 ，混匀，装入洁净容器内密封 ，并标明标记。在制样的操作过程中 ，应防止样品污染或发生残留物含量的变化 。 ７　测定步骤 ７．１　提取 称取茶叶试样 ２ｇ（精确至０． ０ １ｇ）于５ ０ｍＬ离心管中 ，加入０． ５ｍＬ 蒽醌 Ｄ ８（４． １ ２） ，再加入２ ０ｍＬ正己烷丙酮（４． ７） ，以１ ００ ０ ０ｒ ／ｍ ｉ ｎ均质０． ５ｍ ｉ ｎ ，加入２ｇ氯化钠，涡旋１ｍ ｉ ｎ，以４０ ０ ０ｒ／ｍ ｉ ｎ离心 ３ｍ ｉ ｎ，将上层提取溶液转移入浓缩瓶中 ，用２ ０ｍＬ正己烷丙酮（４． ７）清洗均质器刀头 ，并将此提取液倒入残渣中 ，涡旋１ｍ ｉ ｎ，以４０ ０ ０ｒ／ｍ ｉ ｎ离心３ｍ ｉ ｎ，合并提取液 ，在４ ５℃以下水浴减压浓缩至近干 ，待净化。 ７．２　净化 用３ｍＬ正己烷溶解残渣 ，并转移至净化柱 （４． １ ４） ，再用５ ０ｍＬ正己烷乙醚（４． ８）混合溶剂 ，流速为 ３ｍＬ／ｍ ｉ ｎ，收集全部洗脱液 ，在４ ５℃以下水浴减压浓缩至近干 ，加入２． ０ｍＬ 丙酮溶解残渣 ，混匀，过 ０． ２ ２μｍ滤膜（４． １ ５） ，供气相色谱 质谱／质谱仪测定 。 ７．３　测定 ７．３．１　气相色谱 质谱／质谱条件 ７．３．１．１　色谱柱：ＨＰ  ５ＭＳ ，３ ０ｍ（长度）×０． ２ ５ｍｍ （内径）×０． ２ ５μｍ（膜厚） ，或相当者 。 ７．３．１．２　程序柱温 ：１ ０ ０℃保持１ｍ ｉ ｎ，以２ ０℃／ｍ ｉ ｎ的速率升温至 ３ ０ ０℃，保持１ ０ｍ ｉ ｎ。 ７．３．１．３　载气：氦气，纯度≥９ ９． ９ ９ ９％ ，流速１． ０ｍＬ／ｍ ｉ ｎ。 ２犛 犖／犜４ ７ ７ ７—２ ０ １ ７ rHgCb@g · ykbûR60
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SÑU.７．３．１．４　进样口温度 ：３ ０ ０℃。 ７．３．１．５　进样方式 ：不分流进样 ，１ｍ ｉ ｎ后开阀。 ７．３．１．６　进样量：１μＬ。 ７．３．１．７　电离方式 ：Ｅ Ｉ。 ７．３．１．８　电离能量 ：７ ０ｅ Ｖ。 ７．３．１．９　离子源温度 ：２ ８ ０℃。 ７．３．１．１ ０　接口温度 ：３ ０ ０℃。 ７．３．１．１ １　测定方式 ：选择反应监测模式 （Ｓ ＲＭ） 。 ７．３．１．１ ２　监测离子对 ：见表１。 表１　定性离子对 、定量离子对 、碰撞气能量 （犆 犈） 、采集时间窗 化合物名称 监测离子 （犿／狕）碰撞气能量 （Ｃ Ｅ） ／Ｖ 蒽醌２ ０ ８． ０／１ ８ ０． ０ ２ ０ ８． ０／１ ５ １． ７１ ０ ３ ０ 蒽醌 Ｄ ８ ２ １ ５． ９／１ ８ ８． ０ １ ０ 　　注：“”为定量离子对 。 ７．３．２　定量测定 根据试样中被测物的含量 ，选取响应值适宜的标准工作溶液进行分析 。标准工作液和待测样液中蒽醌的响应值均应在仪器线性响应范围内 。在上述色谱条件下蒽醌的参考保留时间 ８． ６ｍ ｉ ｎ ，标准溶液的选择反应监测色谱图参见附录 Ａ中图Ａ． １。 ７．３．３　定性测定 在上述实验条件下 ，样品中待测物质的保留时间 ，与标准溶液的保留时间偏差在 ±０． ５％之内；化合物的质谱定性离子至少应包括一个母离子和两个子离子 ，且样品中定性离子的相对丰度与标准品溶液对应的定性离子的相对丰度比进行比较 ，偏差不超过表 ２规定的范围 ，则可判断样品中存在被测物 。 表２　相对离子丰度最大容许误差 相对离子丰度 ／％ ＞５ ０ ＞２ ０～５ ０ ＞１ ０～２ ０ ≤１ ０ 允许的相对偏差 ／％ ±２ ０ ±２ ５ ±３ ０ ±５ ０ ７．４　空白试验 除不加试样外 ，均按上述操作步骤进行 。 ７．５　结果计算和表述 用色谱数据处理机或按式 （１）计算试样中蒽醌的残留量 ，计算结果应扣除空白值 ： 犡＝犮×犞×１０ ０ ０犿×１０ ０ ０…………………………（ １） 　　式中： 犡— — —试样中蒽醌的残留量 ，单位为毫克每千克 （ｍｇ／ｋｇ） ； ３犛 犖／犜４ ７ ７ ７—２ ０ １ ７ rHgCb@g · ykbûR60
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SÑU.犮— — —从标准曲线上得到的蒽醌的溶液浓度 ，单位为微克每毫升 （μｇ／ｍＬ） ； 犞— — —样液最终定容体积 ，单位为毫升 （ｍＬ） ； 犿— — —最终样液所代表的试样质量 ，单位为克 （ｇ） 。 ８　测定低限和回收率 ８．１　测定低限 本方法的测定低限均为 ０． ０ ２ｍｇ／ｋｇ。 ８