书书书犐 犆 犛６ ７．０ ５ ０犆５ ３ 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 犛 犖／犜１ ０ １ ７．６—２ ０ １ ９ 代替Ｓ Ｎ／Ｔ１ ０ １ ７． ６ —２ ０ ０ ２ 出口粮谷中叶枯酞残留量检测方法 犕 犲 狋 犺 狅 犱犳 狅 狉狋 犺 犲犱 犲 狋 犲 狉 犿 犻 狀 犪 狋 犻 狅 狀狅 犳 狋 犲 犮 犾 狅 犳 狋 犪 犾 犪 犿狉 犲 狊 犻 犱 狌 犲 犻 狀犮 犲 狉 犲 犪 犾 狊犳 狅 狉犲 狓 狆狅 狉 狋 ２ ０ １ ９１ ０２ ５发布 ２ ０ ２ ００ ５０ １实施 中华人民共和国海关总署 发 布书书书前　　言 　　Ｓ Ｎ／Ｔ１ ０ １ ７分为以下 ９个部分： — — —第１部分：出口粮谷中环庚草醚残留量检验方法 ； — — —第２部分：出口粮谷中丁胺磷残留量检验方法 ； — — —第３部分：出口粮谷和蔬菜中戊菌隆残留量检验方法 ； — — —第４部分：出口粮谷油籽中哒菌清残留量检验方法 ； — — —第５部分：出口粮谷油籽中快杀稗残留量检验方法 ； — — —第６部分：出口粮谷中叶枯酞残留量检验方法 ； — — —第７部分：出口粮谷中涕灭威 、甲萘威、杀线威、恶虫威、抗蚜威残留量的测定 ； — — —第８部分：进出口粮谷中吡虫啉残留量检验方法液相色谱法 ； — — —第９部分：进出口粮谷中吡氟乙草灵残留量检验方法 。本部分是 Ｓ Ｎ／Ｔ１ ０ １ ７的第６部分。本部分按照 Ｇ Ｂ／Ｔ１． １—２ ０ ０ ９给出的规则编写 。本部分代替 Ｓ Ｎ／Ｔ１ ０ １ ７． ６ —２ ０ ０ ２《出口粮谷中叶枯酞残留量检验方法 》 。本部分与 Ｓ Ｎ／Ｔ１ ０ １ ７． ６ —２ ０ ０ ２相比，主要技术变化如下 ： — — —增加了液相色谱 串联质谱法作为第一法 ； — — —原方法变更为第二法 ，并对部分表述进行修改 ； — — —删去了抽样步骤 。本部分由中华人民共和国海关总署提出并归口 。本部分起草单位 ：中华人民共和国天津海关 。本部分主要起草人 ：章骅、娄婷婷、崔颖、林安清、张靓文。本部分所代替标准的历次版本发布情况为 ： — — —Ｓ Ｎ／Ｔ１ ０ １ ７． ６ —２ ０ ０ ２。 Ⅰ犛 犖／犜１ ０ １ ７．６—２ ０ １ ９出口粮谷中叶枯酞残留量检测方法 １　范围 本部分规定了粮谷中叶枯酞残留量的气相色谱和液相色谱 串联质谱测定方法 。 本部分第一法适用于出口糙米 、小麦、玉米、扁豆中叶枯酞残留量的定量测定和确证 ； 本部分第二法适用于出口糙米中叶枯酞残留量的定量测定 。 ２　规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的 。凡是注日期的引用文件 ，仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件 ，其最新版本 （包括所有的修改单 ）适用于本文件 。 Ｇ Ｂ／Ｔ６ ６ ８ ２　分析实验室用水规格和试验方法 第一法　液相色谱 质谱／质谱法 ３　方法摘要 试样经水浸泡 ，用甲醇提取叶枯酞 ，固相萃取净化 。用液相色谱 质谱／质谱仪检测 ，外标法定量 。 ４　试剂和材料 除另有规定外 ，所用试剂均为分析纯 ，水为Ｇ Ｂ／Ｔ６ ６ ８ ２规定的一级水 。 ４．１　甲醇：色谱纯。 ４．２　甲酸：色谱纯。 ４．３　甲酸水溶液 （０． １％） ：吸取１ｍＬ甲酸，用水定容至 １Ｌ，混合均匀 。 ４．４　硅藻土。 ４．５　叶枯酞标准物质 （Ｔ ｅ ｃ ｌ ｏ ｆ ｔ ａ ｌ ａ ｍ ，ＣＡ Ｓ号７ ６ ２ ８ ０  ９ １  ６ ，Ｃ１ ４Ｈ５Ｃｌ ６ＮＯ３） ：纯度大于或等于 ９ ９％。 ４．６　叶枯酞标准储备溶液 ：准确称取适量的叶枯酞标准物质 ，用甲醇配制成浓度为 １ｍｇ／ｍＬ的标准储 备溶液，－１ ８℃冰箱中保存 。 ４．７　叶枯酞标准中间溶液 ：准确吸取适量的叶枯酞标准储备溶液 （４． ６） ，用甲醇配制成浓度为 １ ０ ０μｇ／ｍ Ｌ的标准中间溶液 ，０℃～４℃冰箱中保存 。 ４．８　空白样品基质溶液 ：选取不含待测物的样品 ，按照步骤 ７． １和７． ２操作，得到空白样品基质溶液 。 ４．９　叶枯酞标准基质溶液 ：根据需要使用前吸取适量的叶枯酞标准中间溶液 （４． ７） ，用空白样品基质溶 液（４． ８）配制成适当浓度的标准基质溶液 ，０℃～４℃冰箱中保存 ，使用前配制 。 ５　仪器与设备 ５．１　液相色谱 串联质谱仪 ：配备电喷雾离子源 。 １犛 犖／犜１ ０ １ ７．６—２ ０ １ ９５．２　天平：感量０． １ｍｇ和０． ０ １ｇ。 ５．３　振荡器。 ５．４　食品粉碎机 。 ５．５　固相萃取柱 ：Ｓ ｅｐ Ｐ ａ ｋＣ １ ８ （６ ０ｍｇ，３ｍＬ） ，或相当者 。使用前顺次用 １ ０ｍＬ甲醇，１ ０ｍＬ水活化。 ５．６　玻璃抽滤瓶 。 ５．７　锥形瓶：２ ５ ０ｍＬ 。 ６　试样制备与保存 ６．１　试样制备 取有代表性样品约 ５ ０ ０ｇ（不可用水洗涤 ） ，将其可食部分切碎后 ，充分混匀后放入食品粉碎机中粉 碎，装入洁净容器 ，密封并标明标记 。 ６．２　试样保存 在制样的操作过程中 ，应防止样品污染或发生残留物含量的变化 。试样于４℃以下避光保存 。 ７　测定步骤 ７．１　提取 称取１ ０ｇ试样（精确到０． ０ １ｇ）于５ ０ ０ｍＬ 锥形瓶中 ，加入２ ０ｍＬ水，静置２ｈ。加入１ ０ ０ｍＬ 甲醇， 震荡３ ０ｍ ｉ ｎ。用上敷１ｃ ｍ硅藻土的滤纸抽滤 。再向锥形瓶中分别加入 ５ ０ｍＬ和３ ０ｍＬ甲醇，用上述 上敷１ｃ ｍ硅藻土的滤纸抽滤 ，合并滤液于 ２ ５ ０ｍＬ 锥形瓶中 。 ７．２　净化 经上述溶液移入净化柱 （５． ５）中，弃去前１ ０ｍＬ流出液，收集后５ｍＬ流出液，供液相色谱 串联质 谱仪测定和确证 。 ７．３　测定 ７．３．１　液相色谱条件 液相色谱条件如下 ： ａ）　色谱柱：Ｅ ｃ ｌ ｉｐｓ ｅ Ｐ ｌ ｕ ｓＣ １ ８ 柱，５ ０ｍｍ×２． １ｍｍ ，１． ８μｍ，或相当者 ； ｂ）　柱温：３ ０℃； ｃ）　进样量：１ ０μＬ； ｄ）　流速：０． ３ｍＬ／ｍ ｉ ｎ； 流动相及梯度洗脱条件见表 １。 ２犛 犖／犜１ ０ １ ７．６—２ ０ １ ９表１　流动相及梯度洗脱条件 时间 （ｍ ｉ ｎ）甲醇（％）０． １％甲酸水溶液 （％） ０． ０ ４ ０ ６ ０ ０． ５ ４ ０ ６ ０ ２． ５ ９ ５ ５ ４． ５ ９ ５ ５ ４． ６ ４ ０ ６ ０ ６． ０ ４ ０ ６ ０ ７．３．２　质谱参考条件 质谱条件如下 ： ａ）　电离方式 ：电喷雾电离 （Ｅ Ｓ Ｉ） ； ｂ）　扫描方式 ：负离子扫描 ； ｃ）　检测方式 ：多反应监测 （ＭＲＭ） ； ｄ）　电喷雾电压 ：２４ ０ ０Ｖ ； ｅ）　鞘气、辅助气均为高纯氮气 ，碰撞气为高纯氩气 。使用前应调节各气体流量以使质谱灵敏度达到检测要求 ，参考条件参见附录 Ａ。 ｆ）　监测离子对 （ｍ／ｚ） ：３ ９ ９． ９／２ １ ２． ８（定量离子 ） 、３ ９ ９． ９／１ ８ ５． ９。 ７．３．３　液相色谱 串联质谱检测及确证 根据试样中被测样液的含量情况 ，选取待测物的响应值在仪器线性响应范围内的浓度进行测定 ，如果超出仪器线性响应范围应进行稀释 。在上述色谱条件下叶枯酞的参考保留时间约为 ３． ９ｍ ｉ ｎ ，标准溶液的选择性离子流图参见附录 Ｂ。按照液相色谱 串联质谱条件测定样品和标准工作溶液 ，样品中待测物质的保留时间与标准溶液中待测物质的保留时间偏差在 ±２． ５％之内。定量测定时采用标准曲线法 。定性时应当与浓度相当标准工作溶液的相对丰度一致 。相对丰度允许偏差不超过表 ２规定的范围 ，则可以判断样品中存在对应的被测物 。 表２　定性确证时相对离子丰度的最大允许偏差 相对离子丰度 ＞５ ０ ＞２ ０～５ ０ ＞１ ０～２ ０ ≤１ ０ 允许的相对偏差 ±２ ０ ±２ ５ ±３ ０ ±５ ０ ７．４　空白实验 除不称取试样外 ，均按上述步骤进行 。 ８　结果计算和表述 用色谱数据处理软件或按式 （１）计算试样中叶枯酞残留量 ，计算结果需扣除空白值 ： 犡＝犮×犞×１０ ０ ０犿×１０ ０ ０…………………………（ １） ３犛 犖／犜１ ０ １ ７．６—２ ０ １ ９　　式中： 犡— — —试样中叶枯酞的残留量 ，单位为毫克每千克 （ｍｇ／ｋｇ） ； 犮— — —从标准曲线上得到的叶枯酞溶液浓度 ，单位为微克每毫升 （μｇ／ｍＬ） ； 犞— — —最终样液的体积 ，单位为毫升 （ｍＬ） ； 犿— — —最终样液所相当的试样质量 ，单位为克 （ｇ） 。 注：计算结果扣除空白值 。 ９　定量限和回收率 ９．１　定量限 本方法的定量限为 ０． ０ ０ １ｍ ｇ／ｋｇ。 ９．２　测定浓度范围及回收率 本方法添加浓度及回收率的实验数据参见表 ４。 表３　糙米中对叶枯酞不同添加水平回收率范围 基质名称 添加水平 回收率范围 ／％ 糙米０． ０ ０ １ｍ ｇ／ｋｇ ８ ８． ３～１ ０ ５． １ ０． ２ ０ｍｇ／ｋｇ ８ ９． ９～１ ０ ７． ３ ０． ４ ０ｍｇ／ｋｇ ８ １． ６～１ ０ １． ４ 小麦０． ０ ０ １ｍ ｇ／ｋｇ ９ ４． ２～１ ０ ２． ５ ０． ２ ０ｍｇ／ｋｇ ８ ９． １～１ ０ ５． １ ０． ４ ０ｍｇ／ｋｇ ９ ２． ５～１ ０ ４． ２ 玉米０． ０ ０ １ｍ ｇ／ｋｇ ９ ３． ６～１ ０ ６． １ ０． ２ ０ｍｇ／ｋｇ ９ ３． ６～１ ０ ５． ３ ０． ４ ０ｍｇ／ｋｇ ８ ９． ５～１ ０ ３． ２ 扁豆０． ０ ０ １ｍ ｇ／ｋｇ ９