书书书　 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 犛 犖／犜０ ８ ５ ９—２ ０ １ ６ 代替Ｓ Ｎ／Ｔ０ ８ ５ ９—２ ０ ０ ０ 出口调味料中脱氢乙酸的测定紫外分光光度法 犇 犲 狋 犲 狉 犿 犻 狀 犪 狋 犻 狅 狀狅 犳犱 犲 犺 狔犱 狉 狅 犪 犮 犲 狋 犻 犮犪 犮 犻 犱犻 狀犮 狅 狀 犱 犻 犿 犲 狀 狋 狊犳 狅 狉犲 狓 狆狅 狉 狋—犝 犾 狋 狉 犪 狏 犻 狅 犾 犲 狋 狊 狆犲 犮 狋 狉 狅狆犺 狅 狋 狅 犿 犲 狋 狉 犻 犮犿 犲 狋 犺 狅 犱 ２ ０ １ ６０ ８２ ３发布 ２ ０ １ ７０ ３０ １实施 中 华 人 民 共 和 国 国家质量监督检验检疫总局发 布 rHgCb@g · ykbûR60
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SÑU.书书书前　　言 　　本标准按照 Ｇ Ｂ／Ｔ１． １—２ ０ ０ ９给出的规则起草 。本标准代替 Ｓ Ｎ／Ｔ０ ８ ５ ９—２ ０ ０ ０《进出口酱油中脱氢乙酸的测定方法 》 。本标准与 Ｓ Ｎ／Ｔ０ ８ ５ ９— ２ ０ ０ ０相比，除编辑性修改外主要技术变化如下 ： — — —适用范围在原标准 （酱油）的基础上 ，增加了醋 、蚝油、烧烤汁、调味酱； — — —增加了定量检出限 （ＬＯＱ）的规定。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口 。本标准起草单位 ：中华人民共和国上海出入境检验检疫局 、中华人民共和国广东出入境检验检疫局。本标准主要起草人 ：陈丹萍、杨富春、褚庆华、原波、谢应新、黎敏华。本标准所代替标准的历次版本发布情况为 ： — — —Ｓ Ｎ／Ｔ０ ８ ５ ９—２ ０ ０ ０。 Ⅰ犛 犖／犜０ ８ ５ ９—２ ０ １ ６ rHgCb@g · ykbûR60
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SÑU.出口调味料中脱氢乙酸的测定紫外分光光度法 １　范围 本标准规定了用紫外分光光度法测定出口调味料中脱氢乙酸含量的方法 。本标准适用于出口酱油 （生抽酱油 、老抽酱油 ） 、醋、蚝油、烧烤汁、调味酱中脱氢乙酸含量的测定 。 ２　规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的 。凡是注日期的引用文件 ，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件 ，其最新版本 （包括所有的修改单 ）适用于本文件 。 Ｇ Ｂ／Ｔ６ ６ ８ ２　分析实验室用水规格和试验方法 ３　测定方法 ３．１　方法原理 样品中脱氢乙酸在酸性条件下经水蒸气蒸馏和有机溶剂萃取后 ，用紫外分光光度计在 ３ ０ ８ｎ ｍ 波长处测定吸光度 ，与标准比较定量 。 ３．２　试剂和材料 除非另有规定 ，本方法所用试剂均为分析纯 。水为Ｇ Ｂ／Ｔ６ ６ ８ ２规定的三级水 。 ３．２．１　１ ５％（质量浓度 ）酒石酸溶液 ：称取酒石酸 １ ５ｇ，加水溶解定容至 １ ０ ０ｍＬ 。 ３．２．２　氯化钠。 ３．２．３　硅氧树脂 ：液态，工业级，作消泡用 。 ３．２．４　盐酸（ρ＝１． １ ９ｇ／ｍＬ） 。 ３．２．５　盐酸溶液 （１＋９，体积比） ：取１ ０ｍＬ盐酸慢慢加入 ９ ０ｍＬ水中。 ３．２．６　乙醚。 ３．２．７　碳酸氢钠 。 ３．２．８　１％（质量浓度 ）碳酸氢钠溶液 ：称取１ｇ碳酸氢钠 ，以水溶解定容至 １ ０ ０ｍＬ 。 ３．２．９　２ｍ ｏ ｌ／Ｌ氯化钠溶液 ：称取１ １． ７ｇ氯化钠，以水溶解定容至 １ ０ ０ｍＬ 。 ３．２．１ ０　２ｍ ｏ ｌ／Ｌ盐酸溶液 ：量取１ ６． ７ｍＬ 盐酸加水定容至 １ ０ ０ｍＬ 。 ３．２．１ １　盐酸氯化钠溶液 ：吸取２ｍ ｏ ｌ／Ｌ氯化钠溶液 （３． ２． ９）５ ０ｍＬ 和２ｍ ｏ ｌ／Ｌ盐酸溶液 （３． ２． １ ０） １ｍＬ，混合后用水稀释至 ２ ０ ０ｍＬ 。 ３．２．１ ２　无水硫酸钠 。 ３．２．１ ３　氢氧化钠 。 ３．２．１ ４　０． １ｍ ｏ ｌ／Ｌ氢氧化钠溶液 ：称取４ｇ氢氧化钠 ，以水溶解定容至 １Ｌ。 ３．２．１ ５　脱氢乙酸标准溶液 ：精确称取 ０． １ ０ ００ ｇ脱氢乙酸标准品于 ６ｍＬ（０． １ｍ ｏ ｌ／Ｌ）氢氧化钠溶液 （３． ２． １ ４）中，加水稀释至 １ ０ ０ｍＬ ，即浓度为 １ｍｇ／ｍＬ的标准储备液 。使用时用水稀释为 ２ ０μｇ／ｍＬ脱氢乙酸标准工作液 。 １犛 犖／犜０ ８ ５ ９—２ ０ １ ６ rHgCb@g · ykbûR60
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SÑU.３．３　仪器设备 ３．３．１　紫外分光光度计 ，配１ｃ ｍ石英比色杯 ，波长范围 １ １ ０ｎ ｍ～９ ０ ０ｎ ｍ。 ３．３．２　水蒸气蒸馏装置 。 ３．３．３　旋涡混合器 。 ３．３．４　恒温水浴锅 。 ３．３．５　感量０． ０ １ｇ的电子天平 。 ３．３．６　感量０． ０ ０ ０１ ｇ的电子天平 。 ３．４　分析步骤 ３．４．１　试样的蒸馏 称取１ ０ｇ（精确至０． ０ １ｇ）样品于１ ０ ０ｍＬ 烧杯中，用１ ０ ０ｍＬ 水分数次将样品全部转入 ５ ０ ０ｍＬ 圆底烧瓶中 ，并用１ ５％（质量浓度 ）酒石酸溶液 （３． ２． １）调节样液至 ｐＨ２～３，加入５ ０ｇ氯化钠（３． ２． ２） 、２滴硅氧树脂 （３． ２． ３） （样品蒸馏时若泡沫不多可不加 ） 、数粒玻璃珠 ，加水至总体积 ２ ５ ０ｍＬ ～３ ０ ０ｍＬ ，连接水蒸气蒸馏装置进行蒸馏 。以每分钟收集 １ ０ｍＬ馏出液的速度收集蒸馏液近 ２ ０ ０ｍＬ ，转移入２ ０ ０ｍＬ容量瓶，用水定容 ，即为蒸馏液的总体积 犞１。 ３．４．２　脱氢乙酸的提取及测定 ３．４．２．１　标准曲线的制作 吸取２ ０μｇ／ｍＬ的脱氢乙酸标准溶液 （３． ２． １ ５）０ｍ Ｌ、１． ０ ０ｍＬ 、２． ０ ０ｍＬ 、３． ０ ０ｍＬ 、４． ０ ０ｍＬ 和５． ０ ０ｍＬ（相当于０μｇ、２ ０． ０μｇ、４ ０． ０μｇ、６ ０． ０μｇ、８ ０． ０μｇ和１ ０ ０． ０μｇ脱氢乙酸 ） ，分别置于 ５ ０ｍＬ带塞刻度玻璃试管中，分别加水至总体积 １ ０ｍＬ，然后分别加入 ０． ８ｍＬ 盐酸溶液 （３，２． ５） 、２ｇ氯化钠（３． ２． ２） 。用乙醚 （３． ２． ６）分３次（１ ０ｍＬ、５ｍＬ、５ｍＬ）涡旋振摇提取 ，合并上层乙醚提取液于另一 ５ ０ｍＬ带塞刻度玻璃试管中。将１％（质量浓度 ）碳酸氢钠溶液 （３． ２． ８）分３次（１ ０ｍＬ、５ｍＬ、５ｍＬ）加入已合并的乙醚提取液刻度玻璃试管中再次提取 ，合并下层碳酸氢钠提取液于烧杯中 ，置水浴上小心地加温 ，待乙醚挥发后 ，继续在水浴上滴加盐酸溶液 （３． ２． ５）至ｐＨ３～５，分别移入 ２ ５ｍＬ容量瓶中 ，加入２ｍＬ盐酸氯化钠溶液（３． ２． １ １） ，加水稀释至刻度 ，混匀。用１ｃ ｍ石英比色杯 ，以零管调节零点 ，于波长３ ０ ８ｎ ｍ 处测吸光度，以脱氢乙酸的质量为横坐标 ，吸光度为纵坐标 ，绘制标准曲线 。 ３．４．２．２　样品溶液的测定 移取３． ４ ． １的蒸馏液 １ ０ｍ Ｌ（犞２）于５ ０ｍ Ｌ带塞刻度玻璃试管中 ，然后按照 ３． ４ ． ２． １的步骤执行 。同时做试 剂空白。根据样品溶液的吸光度 ，由标准曲线计算得到样液中脱氢乙酸的质量 犿Ａ，单位为微克 （μｇ） 。 ４　脱氢乙酸含量的计算 按式（１）计算试样中脱氢乙酸的含量 ： 犡＝犿Ａ×１０ ０ ０犿×（犞２／犞１）×１０ ０ ０………………（ １） 　　式中： 犡— — —试样中脱氢乙酸的含量 ，单位为毫克每千克 （ｍｇ／ｋｇ） ； 犿Ａ— — —测定用样液中脱氢乙酸质量 ，单位为微克 （μｇ） ； 犿— — —试样质量 ，单位为克 （ｇ） ； 犞１— — —试样蒸馏液总体积 ，单位为毫升 （ｍＬ） ； ２犛 犖／犜０ ８ ５ ９—２ ０ １ ６ rHgCb@g · ykbûR60
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SÑU.犞２— — —测定用蒸馏液体积 ，单位为毫升 （ｍＬ） 。以重复性条件下获得的两次独立测定结果的算术平均值表示 ，结果保留三位有效数字 。测定结果须扣除空白值 。 ５　精密度 在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的 １ ０％。 ６　测定低限 、回收率 ６．１　测定低限 紫外分光光度法测定酱油 （生抽酱油 、老抽酱油 ） 、醋（米醋、添丁甜醋 、陈醋） 、蚝油、烧烤汁、调味酱中脱氢乙酸含量的测定低限均为 ：３ ０ｍｇ／ｋｇ。 ６．２　回收率 回收率数据见表 １。 表１　酱油、醋、蚝油、烧烧汁和调味酱中脱氢乙酸添加浓度及其回收率实验数据 样品名称 添加水平 ／（ｍｇ／ｋｇ） 平均回收率 ／％ 酱油（鲜味生抽 ）３ ０６ ０３ ０ ０９ ３． ８～１ ０ ０． ０９ ２． ７～１ ０ １． ８９ ５． ５～９ ６． ９ 酱油（草菇老抽 ）３ ０６ ０３ ０ ０９ ５． ５～１ ０ ６． ３９ ３． １～９ ８． ２９ ７． ７～９ ８． ８ 醋（米醋）３ ０６ ０３ ０ ０９ ０． ０～９ ７． ９９ ３． ４～１ ０ ５． ６１ ０ ０． １～１ ０ ２． ５ 醋（添丁甜醋 ）３ ０６ ０３ ０ ０９ ０． ０～９ ７． ９９ ２． ６～１ ０ ３． ４９ ９． ０～１ ０ ０． ３ 醋（陈醋）３ ０６ ０３ ０ ０９ ６． ８～１ ０ ３． ５９ ４． １～１ ０ ０． ０１ ０ １． ８～１ ０ ４． ７ 蚝油３ ０６ ０３ ０ ０９ ７． ７～１ ０ ４． ６９ ７． ９～１ ０ ７． ９９ ７． ８～１ ０ １． ８ 烧烤汁３ ０６ ０３ ０ ０９ １． ２～１