SN-T 0697-2014 出口肉及肉制品中杀线威残留量的测定

书书书　中华人民共和国出入境检验检疫行业标准犛犖／犜０６９７—２０１４代替ＳＮ０６９７ —１９９７出口肉及肉制品中杀线威残留量的测定犇犲狋犲狉犿犻狀犪狋犻狅狀狅犳狅狓犪犿狔犾狉犲狊犻犱狌犲犻狀犿犲犪狋犪狀犱犿犲犪狋狆狉狅犱狌犮狋犳狅狉犲狓狆狅狉狋２０１４１１１９发布２０１５０５０１实施中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局发布 rHgCb@g · ykbûR60u5[PO 0SÑU.书书书前　　言　　本标准按照ＧＢ／Ｔ１．１—２００９给出的规则起草。本标准代替ＳＮ０６９７ —１９９７《出口肉及肉制品中杀线威残留量检验方法》。本标准与ＳＮ０６９７ —１９９７相比，主要技术变化如下： — — —修改了标准的名称； — — —增加了液相色谱 质谱／质谱法； — — —增加了方法的适用范围。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位：中国检验检疫科学研究院、北京检验检疫技术中心。本标准主要起草人：凌云、林远辉、储晓刚、杨敏莉、方舒正、孙利、郭浩楠、郝静。本标准所代替标准的历次版本发布情况为： — — —ＳＮ０６９７ —１９９７。 Ⅰ犛犖／犜０６９７—２０１４ rHgCb@g · ykbûR60u5[PO 0SÑU.出口肉及肉制品中杀线威残留量的测定１　范围本标准规定了出口肉及肉制品中杀线威残留量测定的液相色谱 质谱／质谱和高效液相色谱检测方法。本标准适用于出口猪肉、牛肉、羊肉、鸡肉、香肠中杀线威残留量的测定。２　规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。ＧＢ／Ｔ６６８２　分析实验室用水规格和试验方法３　试样的制备与保存３．１　试样制备取代表性样品约１ｋｇ，取可食部分，经捣碎机充分捣碎均匀，装入洁净容器，密封、标明标记。３．２　试样保存试样于－１８℃冷藏保存。在抽样及制样的操作过程中，应防止样品受到污染或发生残留物含量的变化。第一法　液相色谱 质谱／质谱法４　方法提要试样用乙腈提取，犖丙基乙二胺（ＰＳＡ）固相萃取柱净化，液相色谱 质谱／质谱法测定，外标法定量。５　试剂和材料除另有规定外，试剂均为分析纯，水为按照ＧＢ／Ｔ６６８２规定的一级水。５．１　乙腈。５．２　甲醇：色谱纯。５．３　二氯甲烷。５．４　乙酸铵：纯度大于或等于９８％。５．５　无水硫酸钠：６５０℃灼烧４ｈ，自然冷却后贮于密封瓶中备用。５．６　甲醇二氯甲烷（５＋９５，体积比）：将５ｍＬ甲醇（５．２）和９５ｍＬ二氯甲烷（５．３）混合，充分振摇。１犛犖／犜０６９７—２０１４ rHgCb@g · ykbûR60u5[PO 0SÑU.５．７　甲醇水（２０＋８０，体积比）：将２０ｍＬ甲醇（５．２）和８０ｍＬ水混合，充分振摇。５．８　流动相Ａ：２０ｍｍｏｌ／Ｌ乙酸铵，称取０．３８５ｇ乙酸铵（５．４），溶于２５０ｍＬ水中，经０．２２μｍ滤膜过滤。５．９　标准物质：杀线威，英文名称：Ｏｘａｍｙｌ，ＣＡＳ号：２３１３５  ２２  ０，分子式：Ｃ７Ｈ１３Ｎ３Ｏ３Ｓ，纯度≥９９％。５．１０　杀线威标准储备液：称取适量杀线威标准物质（５．９），用甲醇（５．２）配制成１．０ｍｇ／ｍＬ的标准储备液；０℃～４℃保存。５．１１　杀线威标准工作液：根据需要用甲醇（５．２）将储备液（５．１０）稀释配制成１μｇ／Ｌ、２μｇ／Ｌ、５μｇ／Ｌ、１０μｇ／Ｌ、２０μｇ／Ｌ、５０μｇ／Ｌ、１００μｇ／Ｌ的标准工作液。０℃～４℃保存。５．１２　犖丙基乙二胺（ＰＳＡ）固相萃取柱：５００ｍｇ，６ｍＬ。５．１３　滤膜：有机相，０．２２μｍ。６　仪器和设备６．１　液相色谱 质谱／质谱联用仪：配备电喷雾离子源（ＥＳＩ）。６．２　振荡器。６．３　漩涡混合器。６．４　旋转蒸发仪。６．５　食品捣碎机。６．６　离心机：≥１００００ｒ／ｍｉｎ。６．７　离心管：５０ｍＬ。６．８　电子天平：感量０．０００１ｇ，０．０１ｇ。７　测定步骤７．１　提取称取５ｇ试样（精确至０．０１ｇ）与１０ｇ无水硫酸钠（５．５）研磨，用２×１０ｍＬ乙腈（５．１）转移至５０ｍＬ离心管中，漩涡混合均匀后于振荡器上振荡提取１５ｍｉｎ，以１００００ｒ／ｍｉｎ的速度离心５ｍｉｎ，收集上清液于１００ｍＬ梨型瓶中，残留物再用１５ｍＬ乙腈（５．１）重复提取一次。合并提取液于梨型瓶中，于４０℃旋转蒸发浓缩至近干，残留物用２．５ｍＬ甲醇二氯甲烷（５．６）溶解，待净化。７．２　净化用５ｍＬ甲醇二氯甲烷（５．６）淋洗ＰＳＡ（５．１２）小柱，弃去流出液。用２．５ｍＬ甲醇二氯甲烷（５．６）溶液润洗样品瓶并上样，接收滤液。将滤液在常温下用氮气吹干，残留物用１．０ｍＬ甲醇水（５．７）溶液充分溶解，过０．２２μｍ滤膜，供液相色谱 质谱／质谱测定。７．３　测定７．３．１　液相色谱 质谱／质谱条件液相色谱 质谱／质谱条件如下：ａ）　色谱柱：ＷａｔｅｒｓＡＣＱＵＩＴＹＵＰＬＣＢＥＨＣ１８１．７μｍ２．１ｍｍ×１００ｍｍ；ｂ）　流动相：见表１，其中Ａ：２０ｍｍｏｌ／Ｌ乙酸铵水（５．８）；Ｂ：甲醇；２犛犖／犜０６９７—２０１４ rHgCb@g · ykbûR60u5[PO 0SÑU.表１　流动相梯度洗脱表时间／ｍｉｎ流速／（ｍＬ／ｍｉｎ）Ａ／％Ｂ／％０．０００．２５９０１０５．０００．２５６５３５６．０００．２５０１００８．０００．２５０１００８．５００．２５９０１０１０．０００．２５９０１０　　ｃ）　柱温：３０℃；ｄ）　进样量：１０μＬ；ｅ）　质谱条件：参见表Ａ．１和表Ａ．２。７．３．２　液相色谱 质谱／质谱测定７．３．２．１　定性测定按照液相色谱 质谱／质谱条件测定样品和标准工作溶液，如果检测的质量色谱峰保留时间与标准品保留时间相差不超过 ±５％，定性离子对的相对丰度（是用相对于最强离子丰度的强度百分比表示）与浓度相当标准工作溶液的相对丰度一致，相对丰度允许偏差不超过表２规定的范围，则可判断样品中存在杀线威。表２　使用定性液相色谱 质谱时相对离子丰度最大允许偏差相对离子丰度／％＞５０＞２０～５０＞１０～２０ ≤１０允许的相对偏差／％ ±２０ ±２５ ±３０ ±５０７．３．２．２　定量测定根据试样中被测物的含量情况，选取响应值相近的标准工作液一起进行色谱分析。标准工作液和待测液中杀线威的响应值应在仪器线性响应范围内。杀线威标准物的液相色谱 质谱图参见图Ｂ．１。７．４　空白试验除不加样品外，均按上述步骤进行。８　结果计算与表述用液相色谱 质谱／质谱数据处理软件或者按式（１）计算试样中杀线威的含量：犡＝犮×犞犿…………………………（１）　　式中：犡— — —试样中杀线威残留量，单位为微克每千克（μｇ／ｋｇ）；犮— — —由标准曲线得出的样液中杀线威的深度，单位为微克每毫升（μｇ／ｍＬ）；３犛犖／犜０６９７—２０１４ rHgCb@g · ykbûR60u5[PO 0SÑU.犞— — —样液最终定容体积，单位为毫升（ｍＬ）；犿— — —最终样液代表的试样质量，单位为千克（ｋｇ）。９　测定低限、回收率９．１　测定低限本方法杀线威的测定低限为１．０μｇ／ｋｇ。９．２　回收率９．２．１　猪肉中杀线威的添加浓度在１μｇ／ｋｇ、１０．０μｇ／ｋｇ、２０μｇ／ｋｇ时，平均回收率分别为６７．８％，６９．６％，７３．５％。９．２．２　牛肉中杀线威的添加浓度在１μｇ／ｋｇ、１０．０μｇ／ｋｇ、２０μｇ／ｋｇ时，平均回收率分别为７７．８％，８１．１％，８２．６％。９．２．３　羊肉中杀线威的添加浓度在１μｇ／ｋｇ、１０．０μｇ／ｋｇ、２０μｇ／ｋｇ时，平均回收率分别为６８．１％，７５．７％，７５．０％。９．２．４　鸡肉中杀线威的添加浓度在１μｇ／ｋｇ、１０．０μｇ／ｋｇ、２０μｇ／ｋｇ时，平均回收率分别为７８．１％，８０．４％，８３．６％。９．２