ICS 07.140 C 06 SF 中 华 人 民 共 和 国 司 法 行 政 行 业 标 准 SF/T 0066—2020 生物检材中芬太尼等 31种芬太尼类新精神 活性物质及其代谢物的液相色谱 -串联质谱 检验方法 Determination of 31 fentanyl -analogue and their metabolites in biological samples by liquid chromatography - tandem mass spectrometry 2020 - 05 - 29发布 2020 - 05 - 29实施 中华人民共和国司法部 发布 SF/T 0066—2020 I 目 次 前言 ................................ ................................ ................ II 1 范围 ................................ ................................ .............. 1 2 规范性引用文件 ................................ ................................ .... 1 3 术语和定义 ................................ ................................ ........ 1 4 原理 ................................ ................................ .............. 1 5 试剂、仪器和材料 ................................ ................................ .. 1 6 操作方法 ................................ ................................ .......... 3 7 分析结果评价 ................................ ................................ ...... 8 附录A（资料性附录） 31种芬太尼类新精神活性物质及其代谢物的提取离子色谱图 ........... 10 附录B（资料性附录） 方法学有效性验证数据 ................................ ........... 17 SF/T 0066 —2020 II 前 言 本标准按照 GB/T 1.1 —2009给出的规则起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。 本标准由司法鉴定科学研究院提出。 本标准由司法部信息中心归口。 本标准起草单位：司法鉴定科学研究院。 本标准主要起草人：施妍、向平、刘伟、沈保华、严慧、卓先义、沈敏、吴何坚。 SF/T 0066—2020 1 生物检材中芬太尼等 31种芬太尼类新精神活性物质及其代谢物的 液相色谱 -串联质谱检验方法 1 范围 本标准规定了 血液、尿液、毛发中芬太尼等 31种芬太尼类新精神活性物质及其代谢物 的液相色谱 - 串联质谱（ LC-MS/MS）检验的试剂、仪器和材料、操作方法以及 分析结果评价等要求 。 本标准适用于 血液、 尿液 及毛发中 芬太尼等 31种芬太尼类新精神活性物质及其代谢物 的定性与定量 分析，其它 检材中芬太尼等 31种芬太尼类新精神活性物质及其代谢物 的定性及定量分析可参照使用 。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。 凡是注日期的引用文件， 仅注日期的版本 适用于本文件。 凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 GA/T 122 毒物分析名词术语 3 术语和定义 GA/T 122 中确立的术语和定义适用于本 文件。 4 原理 血液、尿液、毛发 样品经有机溶剂 提取后，采用液相色谱 -串联质谱法 (LC-MS/MS)进行检测， 经与 平行操作的空白样品和添加样品作对照 ，以两对母离子 /子离子对的 保留时间、相对丰度比 进行定性分 析；以定量离子对 峰面积为依据， 采用内标法进行定量分析。 5 试剂、仪器和材料 5.1 试剂 试验用水应为符合GB/T 6682 规定的一级水，所用试剂 和要求如下 ： a) 甲醇：HPLC级； b) 乙腈：HPLC级； c) 98%甲酸：优级纯； d) 乙酸铵：色谱纯； e) 丙酮：分析纯 ； f) 标准物质溶液： SF/T 0066 —2020 2 1) 标准物质储备液：市售 芬太尼（ Fentanyl ）、去甲基芬太尼（ Norfentanyl ）、阿芬太尼 （alfentanil ）、乙酰去甲基芬太尼（ Acetyl norfentanyl ）、3-甲基硫代芬太尼 （3-methylthiofentanyl ）、反-3-甲基芬太尼（ trans-3-methylfentanyl ）、α-甲基芬 太尼（α-methylfentanyl ）、β-羟基芬太尼（ β-hydroxyfentanyl ）、β-羟基-3-甲基 芬太尼（ β-hydroxy-3-methylfentanyl ）、硫代芬太尼（ thiofentanyl ）、THF-F标准 品溶液，质量浓度均为 1mg/mL；去丙烯酰芬太尼 [N-phenyl-1-（2-phenylethyl ） -4-piperidinamine ，4-ANNP]、 去甲基卡芬太尼 （ Norcarfentanil ）、丙烯酰芬太尼 （ Acryl fentanyl ）、丁酰芬太尼（ Butyryl fentan yl）、异丁酰芬太尼（ Isobutyryl fentanyl ）、 对-氟芬太尼（ para -fluorofentanyl ）、邻-氟芬太尼（ para/ortho -fluorofentanyl ）、 cis-3-甲 基 芬 太 尼 （cis-3-methylfentanyl ）、β-羟 基 硫 代 芬 太 尼 （β-hydroxythiofentanyl ）、戊酰芬太尼（ Valeryl fentanyl ）、对-氟丁酰芬太尼 [para-flurorbutyryl fentanyl （PFBF）]、 4-氟异丁酰芬太尼（ 4-Fluoro-isobutyryl fentanyl ）、奥芬太尼（ Ocfentanil ）、呋喃芬太尼（ Furanyl fentanyl ）、瑞芬太尼 （Remifentanil ）、舒芬太尼（ Sufentanil ）、卡芬太尼（ Carfentanil ）、甲氧乙酰芬 太尼（Methyoxyacetyl fentanyl ）、环丙基芬太尼（ Cyclopropyl fentanyl ）、乙酰芬 太尼（Acetyl fentanyl ）标准品溶液，质量浓度均为 100μg/mL；置于冰箱中冷冻保存， 保存时间为 12个月； 2) 标准物质工作溶液：试验中所用其 它浓度的标 准工作溶液均从 5.1 f）1）所述标准物质 溶液用甲醇稀释而得。 密封，置于冰箱中冷藏保存， 保存时间 3个月。 g) 内标溶液： 1) 内标储备液： 市售 1.0mg/mL芬太尼-D5（Fentanyl -D5）和去甲基芬太尼 -D5（Norfentanyl -D5） 标准品溶液（或其他性质相近物） ，置于冰箱中冷冻保存， 保存时间 12个月； 2) 内标工作溶液： 试验中所用其 它浓度的内标工作溶液均从上述 内标储备液用 甲醇稀释而 得。密封，置于冰箱中冷藏保存， 保存时间 3个月。 h) 提取溶液： 1) 2mmol/L甲酸铵溶液（含 8%乙腈，pH 5.3）：称取甲酸铵 适量，加乙腈 20mL，用去离子 水定容至 250mL，用0.1%甲酸调节 pH至5.3，即得2mmol/L甲酸铵溶液 ； 2) 提取溶液：取甲醇、乙腈和 2mmol/L甲酸铵溶液（含 8%乙腈，pH 5.3）适量配制体积比 为1:1:5的溶液。 5.2 仪器和材料 仪器和材料 及要求如下： a) 液相色谱 -串联质谱仪：配有电喷雾离子源 (ESI)； b) 电子分析天平： 分度值0.1mg； c) 离心机：最大相对离心力 14100×g； d) 超声波清洗仪； e) 离心管及研磨管； f) 滤膜：0.22μm； g) 冷冻研磨仪； h) 微量移液器。 SF/T 0066—2020 3 6 操作方法 6.1 定性分析 6.1.1 样品前处理 6.1.1.1 案件样品 6.1.1.1.1 体液样品 取全血或尿液100μL，准确加入 100ng/mL的内标工作溶液 10μL， 混合10s， 加入硼砂缓冲溶液 （ pH9.2） 100μL，乙酸乙酯 0.7mL，涡旋30s，9700×g离心5min。取上层有机相置于 5mL离心管中， 40℃下吹干。 加入流动相 A 200μL复溶，9700×