ICS 07.140 C 06 SF 中 华 人 民 共 和 国 司 法 行 政 行 业 标 准 SF/T 0065—2020 毛发中二甲基色胺等 16种色胺类新精神活 性物质及其代谢物的液相色谱 -串联质谱检 验方法 Determination of 16 tryptamine hallucinogens and their metabolites in hair samples by liquid chromatography - tandem mass spectrometry 2020 - 05 - 29发布 2020 - 05 - 29实施 中华人民共和国司法部 发布 SF/T 0065—2020 I 目 次 前言 ................................ ................................ ................ II 1 范围 ................................ ................................ .............. 1 2 规范性引用文件 ................................ ................................ .... 1 3 术语和定义 ................................ ................................ ........ 1 4 原理 ................................ ................................ .............. 1 5 试剂、仪器和材料 ................................ ................................ .. 1 6 操作方法 ................................ ................................ .......... 2 7 分析结果评价 ................................ ................................ ...... 6 附录A（资料性附录） 16种色胺类新精神活性物质及其代谢物的提取离子流图 ............... 8 附录B（资料性附录） 方法学有效性验证数据 ................................ ........... 13 SF/T 0065 —2020 II 前 言 本标准按照 GB/T 1.1 —2009给出的规则起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。 本标准由司法鉴定科学研究院提出。 本标准由司法部信息中心归口。 本标准起草单位：司法鉴定科学研究院。 本标准主要起草人：施妍、向平、刘伟、沈保华、严慧、卓先义、沈敏、吴何坚。SF/T 0065—2020 1 毛发中二甲基色胺等 16种色胺类新 精神活性物质及其代谢物的液 相色谱-串联质谱检验方法 1 范围 本标准规定了毛发中 二甲基色胺等 16种色胺类新精神活性物质及其代谢物 的液相色谱 -串联质谱 （LC-MS/MS）检验的试剂、仪器和材料、操作方法 以及分析结果评价等要求 。 本标准适用于毛发中 二甲基色胺等 16种色胺类新精神活性物质及其代谢物 的定性与定量分析， 其它 检材中二甲基色胺等 16种色胺类新精神活性物质及其代谢物 的定性及定量分析可参照使用 。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。 凡是注日期的引用文件， 仅注日期的版本适用于本文件。 凡是不注日期的 引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 GA/T 122 毒物分析名词术语 3 术语和定义 GA/T 122 中确立的术语和定义适用于本 文件。 4 原理 毛发样品经有机溶剂 提取后，采用液相色谱 -串联质谱法 (LC-MS/MS)进行检测， 经与平行操作的空 白样品和添加样品作对照 ，以两对母离子 /子离子对的 保留时间、相对丰度比 进行定性分析；以 定量离 子对峰面积为依据， 采用内标法进行定量分析。 5 试剂、仪器和材料 5.1 试剂 试验用水 应为符合GB/T 6682 规定的一级水，所用试剂 和要求如下 ： a) 甲醇：HPLC级； b) 乙腈：HPLC级； c) 98%甲酸：优级纯； d) 乙酸铵：色谱纯； e) 丙酮：分析纯； f) 标准物质溶液： SF/T 0065 —2020 2 1) 标准物质储备液：市售 5-甲氧-N，N-二异丙基色胺（ 5-MeO-DiPT），5-甲氧基-N-甲基-N- 异丙基色胺（ 5-MeO-MiPT），5-甲氧-N,N-二烯丙基色胺（ 5-MeO-DALT），5-甲氧基-N,N- 二甲基色胺（ 5-MeO-DMT）， 5-羟基-N,N-二异丙基色胺（ 5-OH-DiPT）， 4-羟基-N,N- 二异丙基色胺（ 4-OH-DiPT）， N,N-二甲基色胺（ DMT），N,N-二丙基色胺（ DPT），5- 甲氧基-N-异丙基色胺（ 5-MeO-NiPT），4-羟基-N-甲基-N-乙基色胺（ 4-OH-MET），赛洛 新（Psilocin ）， 赛洛西宾（ Psilocybin ），4-羟基-N-甲基-N-异丙基色胺 （ 4-OH-MiPT）， 4-乙酰氧基 -N,N-二异丙基色胺（ 4-Acetoxy-DiPT），5-甲氧基-2-甲基色胺（ 5-MeO-AMT） N-异丙基色胺（ NiPT）标准品溶液，质量浓度均为 100μg/mL；置于冰箱中冷冻保存，保 存时间为 12个月； 2) 标准物质工作溶液：试验中所用其 它浓度的标准工作溶液均从 5.1 f）1）所述标准物质 工作溶液用甲醇稀释而得。 密封，置于冰箱中冷藏保存， 保存时间 3个月。 g) 内标溶液： 1) 内标储备液：市售 100μg/mL赛洛西宾 -d4（Psilocybin -d4）和赛洛新-d10（Psilocin -d10） 标准品溶液（或其他性质相近物） ，置于冰箱中冷冻保存， 保存时间 12个月； 2) 内标工作溶液： 试验中所用其 它浓度的内标工作溶液均从上述 内标储备液用 甲醇稀释而 得。密封，置于冰箱中冷藏保存，保存时间 3个月。 h) 提取溶液：取1mL甲酸，加入 1L去离子水，配 置成0.1%的甲酸水溶液。用 0.1%的甲酸水溶液 稀释内标工作溶液，配制成含有 1ng/mL内标的提取溶液。 5.2 仪器和材料 仪器和材料 及要求如下： a) 液相色谱 -串联质谱仪：配有电喷雾离子源 (ESI)； b) 电子分析天平 ：分度值 0.1mg； c) 离心机：转速14000×g； d) 超声波清洗仪； e) 研磨管； f) 滤膜：0.22μm； g) 冷冻研磨仪； h) 微量移液器。 6 操作方法 6.1 定性分析 6.1.1 样品前处理 6.1.1.1 案件样品 依次用适量的水和丙酮振荡 将毛发样品 洗涤两次，晾干后剪成约 1mm段，称取毛发样品 20mg于2mL 研磨管中，加研磨珠适量，再加含 1ng/mL内标的提取 溶液1mL，液氮冷冻研磨， 14000×g离心5min，取 上清液，过 0.22μm滤膜，滤液直接 供仪器分析。 6.1.1.2 质控样品 SF/T 0065—2020 3 称取空白毛发样品 20mg两份，一份作为空白样品，一份添加 10μL 100ng/mL的16种色胺类新精神活 性物质的混标工作液， 制得0.05ng/mg添加样品， 然后按照 6.1.1.1方法，与案件样品平行 操作。 6.1.2 仪器检测 6.1.2.1 仪器条件 6.1.2.1.1 液相色谱条件 液相色谱 条件包括： a) 色谱柱： Acquity TM UPLC HSS T 3（100mm×2.1mm ，1.8μm）（或其他等效柱） ； 注：Acquity TM UPLC HSS T 3柱为美国 waters公司产品的商品名称，给出这一信息是为了方便本标准的使用者，并 不是表示对该产品的认可。如果其他等效产品具有相同的效果，则可使用这些等效产品。 b) 流动相：流动相 A为20mmol/L乙酸铵缓冲溶液（含 0.1%甲酸和5%乙腈），流动相 B为乙腈； 采用梯度洗脱， 梯度洗脱程序见表 1； c) 流速：300L/min（或适宜流速） ； d) 柱温：室温； e) 进样量： 5µL。 注：可根据不同仪器的实际情况进行液相 色谱条件 调整。 表1 梯度洗脱程序 时间 min 流动相A (%) 流动相B (%) 0 90 10 2 90 10 4 75 25 6 75 25 8 10 90 9 10 90 9.01 90 10 11 90 10 6.1.2.1.2 质谱条件 质谱条件 包括： a) 离子源：电喷雾电离 -正离子模式 (ES