ICS 65.150 B 50 SC 中华人民共和国水产行业标准 SC/T 9436—2020 水产养殖环境（水体、底泥）中磺胺类 药物的测定 液相色谱-串联质谱法 Determination of sulfonamides in water and sediment from aquaculture environments by LC-MS/MS 2020-08-26发布 2021-01-01实施 中华人民共和国农业农村部 发布 SC/T 9436—2020 品标准 典通 本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。 食 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机松不承担识别这些专利的责任。 本标准由农业农村部渔业渔政管理局提出。 本标准由全国水产标准化技术委员会渔业资源分技术委员会（SAC/TC156/SC10)归口。 本标准起草单位：中国水产科学研究院淡水渔业研究中心、中国水产科学研究院。 本标准主要起草人：陈家长、宋超、韩刚、孟顺龙、宋金龙、范立民、郑尧、陈曦、方龙香、裘丽萍。 I SC/T9436—2020 水产养殖环境（水体、底泥）中磺胺类药物 的测定 液相色谱-串联质谱法 1范围 本标准规定了水产养殖环境（水体、底泥）中21种磺胺类药物的液相色谱-串联质谱测定法的方法原 理、试剂和材料、仪器和设备、样品采集及保存、样品处理及测定等 本标准适用于水产养殖环境（水体、底泥）中21种磺胺类药物的测定 2规范性引用文件 RD 下列文件对于本文 件的应用是不可少百 日期的版本适用于本文件。 凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括） 有的修改单了适用 GB/T 6682 个析实 验室用水规格和试验方法 SC/T9102. 渔 业生态环 境监测规池 第 部分 SC/T9102 业态 境监测规范 邵分海水 SC/T9102 鱼业生 不境监测规范 3方法原理 水体样品 点经冷冻牛 燥后研磨均用甲酸甲醇 处理后的水 体或提取液中码 反相吸附剂作为填料的固相萃取 富集和净化。净化 质谱测 工 液供液相色谱 CE 3 4试剂和材料 4.1总体要求：所 为分析纯试剂：所有试剂经液相色 普中联 质谱仪测定不得检 出磺胺类物质。 R 4.2实验用水：GB 680规定 4.3甲醇：色谱纯。 T 4.4甲酸：色谱纯。 4.5乙酸：色谱纯。 4.6固相萃取柱：500mg/6ml 亲水亲脂平衡反相固相本取柱（填料 飞烯苯和/亲水性N-乙烯基吡 咯烷酮共聚物），或其他等同效果的固相萃取 4.7乙酸-水（1+81)溶液：同时作为流动相A。量取405mL水，加人5mL乙酸（4.5），混合均匀，现配 现用。 4.8甲酸-甲醇溶液(0.1%)：同时作为流动相B。准确吸取1mL甲酸（4.4)于1000mL容量瓶中，用甲 醇（4.3)稀释到刻度，混合均匀，现配现用。 4.9初始流动相：流动相A十流动相B混合溶液（95十5，体积分数），取95mL流动相A和5mL流动相 B混合均匀，现配现用。 4.10标准物质：磺胺胀、磺胺醋酰、磺胺嘧啶、磺胺吡啶、磺胺噻唑、磺胺二甲唑、磺胺甲噻二唑、磺胺二甲 嘧啶、磺胺间甲氧嘧啶、磺胺甲氧嗪、磺胺氯哒嗪、甲氧芋啶、磺胺喹噁啉、磺胺多辛、磺胺地索辛、磺胺甲噁 唑、磺胺甲嘧啶、磺胺异噁唑、磺胺索嘧啶、磺胺对甲氧嘧啶、磺胺苯吡唑，纯度95%，详细标准物质信息 参见附录A。 4.1121种磺胺标准物质储备液：1mg/mL。分别准确称取按其纯度折算为100%的每种磺胺标准物质 1 SC/T9436—2020 （4.10)10mg（精确至0.1mg），用甲醇（4.3)溶解并定容至10mL，摇匀，该标准物质储备液一20℃避光保 存，有效期6个月。 4.1221种磺胺混合标准中间溶液：10μg/mL。准确移取各种磺胺类标准储备溶液（4.11)100μL于 10mL棕色容量瓶中，用甲醇（4.3)定容至刻度，摇匀。该混合标准中间溶液在一20℃避光保存，有效期3 个月。 4.13氛代磺胺邻二甲氧嘧啶(Sulfadoxine-D3)内标标准工作液：1μg/mL。准确吸取500μL母液（10μg/mL） 于5mL容量瓶中，用甲醇（4.3)定容至刻度，配成浓度为1μg/mL的同位素内标标准工作液，避光一20℃ 下保存，有效期3个月。 5仪器和设备 5.1高效液相色谱-串联质谱仪：配有电喷雾离子源。 5.2冷冻干燥机。 5.3固相萃取装置。 5.4旋转蒸发器。 5.5离心机：转速不低于8000r/min。 5.6分析天平：感量0.1mg和0.01g分析天平各一台。 5.7棕色鸡心瓶：50mL。 5.8pH计：测量精度土0.2。 5.9超纯水仪：25℃电导率<1μS/cm，电阻率>10M2·cm。 6样品采集及保存 按照SC/T9102.1、SC/T9102.2和SC/T9102.3规定的方法采集样品，玻璃瓶储存水样，通过抽滤 装置过0.45μm水相滤膜去除大颗粒杂质，用乙酸调节至pH=4.0（土0.2），然后将采样瓶完全注满，避 光，0℃～5℃冷藏保存，一周内完成分析；底泥先一20℃预冷冻24h经冷冻干燥机（一50℃，真空度< 月内完成分析。 7样品处理 7.1提取 7.1.1水体 准确量取200mL（精确至0.1mL)水样于250mL广口玻璃瓶中，准确加人125μL氛代磺胺邻二甲 氧啶内标标准工作液（4.13），混合均勾。无需提取，待浓缩净化。 7.1.2底泥 准确称取2g（精确至0.01g)底泥样品于50mL离心管中，准确加入125μL氛代磺胺邻二甲氧嘧啶 内标标准工作液（4.13），涡旋混匀30s，加入甲酸-甲醇溶液（4.8)10mL，涡旋混匀15min，8000r/min离 心5min，取上清液于50mL鸡心瓶中。残渣加10mL甲酸-甲醇溶液（4.8），重复提取一次，合并2次 提取液，于40℃水浴旋转蒸发至近1mL，待净化。 7.2浓缩净化 （7.1.2)以2mL/min流速过柱，1mL实验用水（4.2）淋洗，用甲酸-甲醇溶液（4.8）分2次洗脱（3mL、 2mL)至10mL离心管中，洗脱液最终定容至5mL。取200μL洗脱液，加800μL初始流动相（4.9)稀释 5倍，混匀后过0.22μm微孔滤膜，供液相色谱-串联质谱测定。 2 SC/T 9436—2020 8测定 8.1 标准工作曲线制备 准确量取适量磺胺混合标准工作溶液（4.12和4.13），用初始流动相（4.9)配制混合标准浓度系列分 别为：5ng/mL、10ng/mL、20ng/mL、40ng/mL、50ng/mL，其中内标浓度均为10ng/mL，按8.2和8.3 的方法测定并制备标准曲线， 8.2液相色谱条件 液相色谱参数设置应满足以下条件： a) 色谱柱：Cis柱，1.7um，100 mm×2.1mm（内径）或相当者 b) 流动相及洗脱条件见表 PUBLI c) 流速：0.4mL/min d) 柱温：30℃； e) 进样量：5μL D 后运行：5m 夜相洗脱条件 人 时间 S B % 8.3质谱条件 参见附录B 8.4液相色谱-串联 8.4.1定性测定 按照上述条件 线如果样品中化合物质量色 峰的保 寸间与标准溶液 相比在土2.5%的可 花曲之 内待测化 答物的定性离宇对的相对手与依皮相 标准溶液相比，相 对丰度偏差不超过表 相应的日标化合物。 合标准工作溶液的 相对保留时间（参见附录 中的表（ 广和液相色谱串联质谱多反应蓝测色谱图 见图C.1)。 定性时相对离子丰度的最大允许偏差 单位为百分号 相对离子丰度 20~50（含） 10~20(含） 01> 允许的相对偏差 ±20 ±30 ±50 8.4.2定量测定 按照内标法进行定量计算。 8.5空白试验 除不加样品外，均按测定条件和步骤进行。 结果计算 按式(1)计算校正因子。 A,Xmr F, : (1) A.Xm 式中： 3 SC/T 9436—2020 磺胺类药物对内标物的相对校正因子； As 内标物的峰面积； A, 标准品的峰面积； ms 内标物的质量，单位为纳克（ng)； mr 标准品的质量，单位为纳克（ng）。 水体中磺胺类药物残留量按式（2)计算，底泥中磺胺类药物残留量按式（3)计算，测试结果需扣除空 白值。 AXV 式中： X, 水体中磺胺类药物的残留量（ng/mL)； A, 标液中内标峰面积； A; 样品中每种磺胺的峰面积； ms 标液中内标质量，单位为纳克（ng）； V 水体的体积，单位为毫升（mL）。 F,XA,Xms X, (3) AsXm 式中： X, 底泥中被测物的残留量，单位为纳克每克（ng/g）； m 底泥样品的质量，单位为克（g）。 10定量限(LO0Q) 以待测化合物的定量离子对色谱峰的信噪比大于或等于10（S/N≥10)所对应的溶液浓度为该药物 的定量限。本方法在水产养殖环境水体中21种磺胺类药物残留的定量限均为0.65ng/mL；在水产养殖 环境底泥中21种磺胺类药物残留的定量限均为12.50ng/g。 11检验方法的准确度和精密度 11.1准确度 本方法在养殖水体在1ng/mL～5ng/mL添加浓度水平上的回收率为72.4%～106%（参见附录D中的 表D.1)；本方法在养殖环境底泥样品中在12.50ng/g～50ng/g添加浓度水平上的回收率为70.9%～110% （参见表D.2）。 11.2精密度 本方法的批内相对标准偏差≤15%，批间相对标准偏差<20%。 4 SC/T 9436—2020 附 录 A (资料性附录） 标准物质详细信息 表A.1列出了21种磺胺标准物质的中文名、英文名、缩写和CAS