ICS 65.020.30 B 43 NY 中华人民共和国农业行业标准 NY/T3444—2019 耗牛冷冻精液生产技术规程 Technical code of pratice for yak frozen semen producing 2019-08-01发布 2019-11-01实施 中华人民共和国农业农村部 发布 NY/T3444—2019 前 服务 本标准由农业农村部畜牧兽医局提出。 本标准起草单位：中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所、青海省家畜改良中心、青海省大通种牛场 本标准主要起草人：阎萍、郭宪、王宏博、冯宇诚、梁春年、马进寿、丁学智、包鹏甲、裴杰、褚敏、吴晓云 薛晓蓉、刘更寿、张国模、王伟、骆正杰、赵寿保、殷满财、李吉叶。 1 NY/T 3444—2019 耗牛冷冻精液生产技术规程 1范围 本标准确定了耗牛冷冻精液生产流程，规定了耗牛冷冻精液生产的器具清洗和消毒、精液采集、精液 处理、精液冷冻。 本标准适用于耗牛冷冻精液生产。 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。 凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。 GB4143牛冷冻精液 GB/T5458液氮生物容器 GB/T30396牛冷冻精液包装、标签、储存和运输 NY/T1234牛冷冻精液生产技术规程 3冷冻精液生产流程 冷冻精液生产过程包括器具清洗和消毒、精液采集、精液处理、精液冷冻，生产流程见图1。 器具消洗和消毒精液采集精液处理精液冷冻 图1冷冻精液生产流程 4器具清洗和消毒 4.1采精器先在加有洗涤剂的温热溶液中刷洗，然后用水冲净，再用蒸馏水或纯净水冲洗，晾干备用。 4.2玻璃器Ⅲ应在热水中加洗涤剂刷洗，再用自来水冲洗，也可用超声波清洗仪清洗，然后放入恒温鼓风 干燥箱中160℃恒温90min120min灭菌。 4.3常用金属器械应使用75%酒精棉球擦拭消毒。冻精细管及纱布袋应使用紫外线消毒。 5精液采集 5.1场地 采精场地应宽散、平坦、安静、清洁，铺有防滑设施，设有采精架。 5.2种公牛 经过调教且年龄4岁以上，等级评价为特级或一级，无遗传疾病，体质健康。 5.3季节 采精季节一般为7月～10月。 5.4采精器安装 采精器内胎及三角漏斗用75%的酒精棉球消毒，然后将三角漏斗安装于采精器上，接上集精管，套上 保护套。采精器内可提前注人38℃左右温水，并用消毒纱布包裹好采精器口，放置于预先调整好温度为 44℃～46℃的恒温箱内待用。采精前，在采精器内胎的前2/3处用涂抹棒均匀涂擦适量消毒过的润滑剂 （凡士林与液体石蜡1：1混合均匀），并从活塞孔打气，使采精器有适度（采精器口呈三角形状为宜)的压 力。采精时温度控制在38℃42℃。 1 NY/T3444—2019 5.5公牛的性准备 通过观察其他采精公牛，嗅闻发情母牛或在台牛部涂抹发情母牛的黏液，让公牛进行空爬，利用视 觉和嗅觉，诱导公牛性兴奋，待公牛性欲旺盛时采精。 5.6采精方法 采精员右手持采精器，站在公耗牛右后侧。当公牛跳起、前肢爬上台牛后背上时，迅速向前用左手托 着公牛包皮，右手持采精器与台牛呈40°角，采精器口斜向下方，左右手配合将公牛阴茎自然地引人采精 器口内，公牛往前一冲即完成射精动作。公牛随即而下，采精员右手紧握采精器，随公牛阴茎而下。待公 牛前肢落地时，顺势把采精器脱出，并立即将采精器口斜向上方。打开活塞放气，使精液尽快地流入集精 杯内，然后取下集精杯，迅速送至精液处理室 5.7采精频率 每周可采精2次～3次，间隔不少于1d PUBLI 6精液处理 6.1鲜精检测 34的规定执车 6.2鲜精质量要求 外观色泽乳白色或淡货色 精子活力天于 密度大 等于 S 6.3精液稀释 6.3.1稀释液配制 稀释液配方和配制方汽 参见附录A市以便用符合技术要求的商品稀释液 6.3.2稀释方法 R 一次稀释法： 先按等量顶稀释，10.min后按精子密度仪测算的稀释量加入 两次稀释 等B2℃ 夜，所加第二液 的量=（所加稀释液 总量 所加第一液的量 6.3.3降温和平衡 将稀释后的精液 平衡3h 6.4分装和标识 细管冷冻精液剂 为微型 11234的规定执行。 标识应在细管壁上清楚标记生产单位品种 百期或批次种公牛的品种代号具体见附录B。 7精液冷冻 7.1上架 平衡、封装后的细管精液，上架码放和冷冻时应把棉塞封口端朝内，超声波封口端朝外。 7.2冷冻 精液在低温容器中，按预先设定好的程序自动完成冷冻过程。冷冻完成后，打开冷冻容器盖子，细管 冻精按照牛号收集放人不同的盛满液氮的专用容器里，放入时将细管棉塞端朝下，超声波封口端朝上，并 迅速浸泡在液氮中。 7.3冷冻精液质量评定 7.3.1精液解冻 将细管冻精直接置于（38士1)℃水浴解冻，解冻时间10s~15s。 7.3.2质量评定 检测方法按照GB4143的规定执行。冷冻精液细管无裂痕，两端封口严密。每剂量解冻后精子活力 2 NY/T3444—2019 大于等于35%，前进运动精子数大于等于800万个，精子畸形率小于等于18%，细菌菌落数小于等于 800个。 7.4包装和储存 先用专用塑料管分装，再用灭菌纱布袋包装，每一包装量不得超过100剂。标签应按照GB/T30396 的规定执行。细管冷冻精液应浸没于液氮生物容器的液氮中。液氮生物容器应符合GB/T5458的规定。 NY/T 3444—2019 附录A （资料性附录） 稀释液配制 A.1稀释液配方 一次稀释法配方：12%蔗糖溶液75mL、卵黄20mL、甘油5mL。 两次稀释法配方： 第一液：蒸馏水100mL、柠檬酸钠2.97g、卵黄10mL。 第二液：第液45mL、果糖2.5g、甘油5mL。 上述稀释液，每100mL加青霉素、链霉素各5万10万单位。 注：试剂要求分析纯以上。 A.2配制方法 一次稀释法配方配制方法：准确称取蔗糖12g，放入100mL容量瓶内，加人蒸馏水50mL，溶解后定 容至100mL。然后取12%蔗糖溶液80mL加卵黄20mL、甘油5mL，用磁力搅拌器充分搅拌均匀后备 用。 两次稀释法配方配制方法： 第一液：准确称取柠檬酸钠2.97g，放人容量瓶内，加入蒸馏水50mL，搅拌溶解后，继续加蒸馏水混 匀定容至100mL。然后加入卵黄10mL，搅拌均匀后备用。 第二液：取第一液45mL，加人果糖2.5g、甘油5mL，搅拌均匀后备用。 上述稀释液，每100mL加青霉素、链霉素各5万～10万单位。 NY/T3444—2019 附录B （规范性附录） 种公牛的品种代号 B.1原则和方法 以耗牛品种汉语名称第一和第二个字的汉语拼音的第一字母组合；涉及品种为多字的，以汉语名称第 一、第二和第三个字的汉语拼音的第一 字母组合：涉及含有省份为多字的，以该省份第一字和品种第一字、 第二字的汉语拼音的第一字母组合 示例1：甘南耗牛的品种代号以“廿"和"南“两宅汉遇拼音第一字组合为CN。 示例3：青海高原牛以省份第一 艺和品第 三字汉字拼音组合为QGY。 B. 2 种公牛品种代号 RESE 见表B.1。 表种公牛品种代号 URAL 公牛品种 品种代号 公牛品种 品种代号 大通特 DT 天祝门牛 九龙特 甘南耗牛 麦洼特 MW 环湖牛 木里特 ME 雪多特牛 昌台特 青海高原托牛 娘亚特 NY 西藏高山托 帕里耗 PL 中甸托牛 斯布耗4 SB 巴州托生 类乌齐耗 LWQ 金川耗牛 5