ICS 65.020.01 B 04 NY 中华人民共和国农业行业标准 NY/T 3428—2019 大豆品种大豆花叶病毒病抗性鉴定技术 规程 Technical code of practice for evaluation of soybean resistance to soybean mosaic virus disease 2019-01-17发布 2019-09-01实施 中华人民共和国农业农村部发布 NY/T 3428—2019 前言 本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。 本标准由中华人民共和国农业农村部提出并归口。 本标准起草单位：南京农业大学、全国农业技术推广服务中心。 本标准主要起草人：李凯、智海剑、张毅、盖钧、何艳琴、董志敏、刘佳、杨中路。 I NY/T3428—2019 大豆品种大豆花叶病毒病抗性鉴定技术规程 1范围 本标准规定了大豆抗大豆花叶病毒病人工接种鉴定技术和抗病性评价标准。 本标准适用于各类大豆种质资源、品种、品系和材料对大豆花叶病毒病的抗性鉴定和抗性评价。 2规范性引用文件 本文件 GB4404.2粮食 豆类区 GB/T 19557.4 植物新品种特 3术语和定义 下列术语和定义道 适用于本 3. 1 抗病性 植物体所具有的能够 克服或减轻 病原物 3. 2 抗病性鉴定 identification of disease resis 通过适宜技术 方法鉴 3. 3 3 致病性 pathog geniciy 病原物侵染寄 植物引 3. 4 R 人工接种 artificial 在适宜条件下，通过人一操作将接种体接于植物体适当部位： 3. 5 抗性评价 evaluation of resistance 根据采用的技术标准判别植物寄主对特定病虫害反应程度和抵抗水平的描述。 3. 6 株系strain 同种病毒的不同来源的、血清学相关的、对同一寄主的不同品种具有致病力差异的分离物。 3.7 接种体inoculum 用于接种以引起病害的病原体或病原体的一部分。 3.8 接种悬浮液 inoculum suspension 用于接种的含有定量接种体的液体。 3. 9 1 NY/T 3428—2019 病情级别disease rating scale 定量植物个体或群体发病程度的数值化描述。 3. 10 发病株率'percentage of infected plants 一定植株群体中发病植株所占的百分率。 3. 11 病情指数diseaseindex 通过对植株个体发病程度(病情级别)数值的综合计算所获得的群体发病程度的数值化描述形式。 3. 12 大豆花叶病毒病soybean mosaic virus disease 由大豆花叶病毒（soybeanmosaicirus，SMV)参见附录A中的A.1)所引起的以叶部花叶、坏死 或花叶与坏死并存、茎尖坏死、植株矮化及籽粒斑驳症状为主的大豆病害。 4大豆花叶病毒接种体制备和保存 采集田间典型大豆花叶病毒病症状的植株叶片，人工汁液摩擦接种法在感病大豆（菜豆）品种上分 离纯化大豆花叶病毒分离物，分离物经生物学和血清学鉴定，确认其为大豆花叶病毒（soybeanmosaic uirus,SMV)，对阳性大豆花叶病毒分离物进行致病性测定，根据在不同抗性的鉴别寄主品种引发的症 状反应划分SMV株系（参见A.2.2)，所用品种种子的质量要求按GB4404.2的规定执行。病毒毒源 保存在防虫温（网）室感病大豆品种上，或将具有典型症状的病叶保存在液氮中或一20℃以下的冰箱内。 5鉴定条件和试验设计 5.1鉴定所用仪器设备 微波炉、紫外灯、植物组织研磨机、电子秤、烧杯、量筒、pH计、研钵、研棒、接种刷、一次性PE手套 等，防虫网室（防虫网规格为60目）。 5.2鉴定环境 在防虫温室或田间防蚜网室进行人工接种鉴定，适宜温度在(25士3)℃。 5.3试验设计 鉴定材料随机排列，3次重复，每份材料每次重复留苗15株～20株。 5.4试验对照品种 选择1个感病对照和1个抗病对照。感病对照要求高度感病，选择标准为规定接种量及适宜环境 条件下病情指数能达到50左右，且感病性稳定；抗病对照选用抗大豆花叶病毒病品种，规定接种量及适 宜环境条件下病情指数在10以下，且抗病性稳定。为减缓抗病对照、感病对照的抗性变异，可将对照品 种在无病地隔离繁殖，冷库保存，一次繁殖，供5年以上使用。 5.5株系选择 选择我国不同大豆生态区优势株系作为鉴定株系。 5.6鉴定材料 精选待鉴定品种种子，剔除斑驳粒种子。种子质量需符合GB/T19557.4的要求。 6 接种 6.1接种时期 大豆植株幼苗期真叶完全展开时接种。 6.2接种方法 2 NY/T 3428—2019 采用人工汁液摩擦接种法，从感病品种上采集已鉴定病毒株系的病叶，于灭过菌的研钵中加入病叶 量10倍的0.01mol/L、pH为7.4的磷酸缓冲液进行充分研磨，制备接种体悬浮液。利用紫外灯消毒 的接种刷蘸取少量悬浮液，在展开的2片真叶上摩擦创造微伤口接种病毒。 6.3接种前后管理 接种前后杂草及时拔除，温（网)室光照充足，正常防虫、浇水，保证植株正常生长。 7病情调查 7.1病情分级 苗期病情分级及相对应的描述见表1。 表 1大豆苗期抗大豆花叶病毒病鉴定病情级别划分 病情级别 症状描述 0 免疫、无症状或仅在接种叶上出现局部枯斑 1 轻花叶或部分非接种叶片上出现肉眼可见微小坏死斑 黄斑花叶、叶片轻度皱缩或多数坏死，斑直径在5mm以下或有部分叶脉坏死，其长度小于 2 10mm 3 重花叶、叶片皱缩卷曲或坏死斑连片或主叶脉坏死长度大于20mm 叶片严重皱缩且植株矮化或叶片因坏死脱落，或坏死面积超过叶片面积50%，或出现顶枯， 4 植株停止生长 7.2调查时间 接种后30d左右，感病对照发病率95%以上，病情指数（DI)>50，调查被鉴定品种发病情况。 7.3调查方法 调查记录被鉴定品种每一植株的病情级别及相应级别的植株数，按式(1)计算病情指数。 (s×n) DI = X 100 (1) NXS 式中： DI 病情指数； 各病情级别代表数值； 该病情级别相应植株数，单位为株； N- -调查总株数，单位为株； S 最高病情级别代表数值。 8抗性评价 8.1# 抗性评价标准 根据所鉴定品种3次重复病情指数的平均值确定品种抗性水平，划分标准见表2。 表 2大豆品种对大豆花叶病毒病抗性的评价标准 抗性水平 病情指数(DI) 高抗（HR) DI=0 抗(R) 0<D≤20 中抗(MR) 20<DI≤35 中感(MS) 35<DI≤50 感(S) 50<DI≤70 高感(HS) DI>70 3 NY/T3428—2019 附录A （资料性附录） 大豆花叶病毒病病原和株系 A. 1 学名和理化特性 A.1.1学名 大豆花叶病毒，学 Pu缩B为SV,属于马铃薯 gsoybeanmosaic Y病毒科、马铃薯Y病毒属。 A.1.2理化特性 RD 大豆花叶病毒粒体 为线存快！ 13nm 感染的寄主细胞中有风轮状、 长薄片状聚集体和圆柱状内含 粒子由外 为单成 大豆花叶 病毒 单链正义RNA组成 子量分别为2.60× 10*u~2.65 u和 2. 白质 占94.7%。 提纯病 毒对紫外光 nm最低值头 40nm 大豆花叶 病毒稀释限点为10 致死温度5 体外存 常温 活期1d~4d0℃下可 达120d。 温 度越低， 存活期越长 在2 d~9d 适温度为26℃， 当温度超过 0℃时 A.2 大豆花 叶病毒株 A.2. 1 鉴别 大豆花叶 使用的 南 诱变30、8101、铁 N 丰25、Davis 洋江号 A.2.2病毒 株 根据大豆花 病毒共划分为22个株 系(SC1～SC22) 中国22 SMV株系 在10个鉴别寄主上的症状反应 南农 株系 诱变30 Davi Buffalo 18 Kwanggyo 齐黄1号 科丰1号 1138-2 SC1 / M / / SC2 / M / M SC3 / M / M / M / SC4 / M / M / M / M / SC5 / M / M / M / M /M SC6 /M / M /M / M /M / M / SC7 / M / M / M /M /M / M / M SC8 / M /M / M / M /M / M / M N/M / / SC9 / M /M / M / M /M /M /M N/M / M /— SC10 / M /M,N /M / M /M /M,N /M / / M SC11 / M / M / M /一 SC12 /M /M / M / M 4 NY/T 3428—2019 表 A. 1 (续) 南农 株系 诱变30 8101 铁丰25 Davis Buffalo 早熟18 Kwanggyo 齐黄1号 科丰1号 1138-2 SC13 -/M N/M -/ M -/M,N /M -/M 二/- N/N 二/- -/- SC14 -/M 二/二 -/M 二/M -/- 二/二 -/一 -/二 -/- -/M SC15 一/M -/M -/ M N/M -/M -/ M N/M N/M -/M -/ M SC16 -/M =/M -/M N/- N/ -/- N/= 一 -/- SC17 -/ M N/M -/M /M -/ M N/M -/M N/N 一/- -/ M SC18 -/M -/- -/ M -/- -/- -/- -/- -/一 一/一 -/- SC19 -/ M N/N /M -/- -/N N