ICS65.020.01 B 04 NY 中华人民共和国农业行业标准 NY/T 3427—2019 棉花品种枯萎病抗性鉴定技术规程 Technical code of practice for identification of cotton variety resistance to Fusariumwilt 2019-01-17发布 2019-09-01实施 中华人民共和国农业农村部 发布 NY/T 3427—2019 前言 本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。 本标准由农业农村部种业管理司提出并归口。 本标准起草单位：全国农业技术推广服务中心、中国农业科学院棉花研究所。 本标准主要起草人：张毅、朱荷琴、冯自力、张芳、冯鸿杰、魏锋、赵丽红、师勇强。 NY/T3427—2019 棉花品种枯萎病抗性鉴定技术规程 1范围 本标准规定了棉花品种对枯萎病［病原菌：尖孢镰刀菌萎专化型FusariumoxysporumSchlect- end：Fr.F.sp.asinfectum(Atk.）W.C.Snyd.&H.N.Hans.抗性的人工接菌鉴定技术方法和 程序。 本标准适用于棉花品种区域试验枯菱病抗性室 2规范性引用文件 RD 下列文件对于本文 长 适 本区件 GB 4407.1 经济作 羊物种子 分：纤维类 GB/T22101 棉花抗病 强性评价技术规范 第 部分 3术语和定义 S 下列术语和 定 义适用于 3.1病株率 衡量发病直株 多少的 发病植株数古全部调查植株数的百分率表 标准中病 株率仅作为辅 3.2病情指数 diseaseinde 衡量发病株率和严重度的 用发 病植株白 部调查 的理论 全最高总病级数 EN 的比较相对数表示 已作D 3.3病情指数校正 系数 correction coefficientof diseaseino 修正病情指数使其标准化自 准病情指类 对照品 种病情指数的比 值表示，记作K。 3.4相对病情指数 relative disease index 为消除地区间、年度 北次间鉴定 对病情指数进行标准 化的指标，用供试棉花品种的病情指数与病情指数校正系数的乘积表示，记 RDI. 4鉴定条件要求 4.1 病原菌培养所需仪器设备 恒温摇床、恒温培养箱、超净工作台、高压灭菌锅、冰箱、培养皿、试管、剪刀、镊子、广口瓶、酒精 灯等。 4.2鉴定温室所需条件 鉴定温室应具备控制温度在20℃28℃，能够随时通风，不同部位光照一致。 5鉴定前准备 5.1病原菌选择与培养 5.1.1病原菌选择 1 NY/T 3427—2019 选用棉花枯萎病菌7号小种；如当地的枯萎病菌小种相对于7号小种为优势小种，则选择当地优势 小种作为鉴定用病原菌。 5.1.2病原菌培养 在超净工作台上，将保存的棉花枯萎病菌试管斜面菌种，转接到马铃薯琼脂培养基（PDA)平板上， 置25℃下培养6d。挑取菌落边缘2mm²的新鲜菌块，接种到查比克（Czapek)液体培养基中，置25℃ 下，150r/min，黑暗培养6d备用。吸取15mL上述菌液转接至装有玉米沙粒培养基的聚丙烯菌种袋 中，混匀后置25℃培养箱中静置培养7d,待枯萎病菌的菌丝布满后，取出培养物，自然风干备用。 培养基配制见附录A。 5.2带菌土准备及纸钵制作 将沙壤土过筛（孔径5mm)后，和泥炭土、沙子分别经0.1MPa、121℃、湿热灭菌30min，按3：1：1 混匀称重，加人总干重0.8%的枯萎病菌玉米沙粒培养物，混合均匀。 用干净的纸做直径6cm、高10cm的纸钵，均匀排列在塑料盘（30cm×20cm×9cm）中，每盘3排4 列，将已混均匀的带菌土装人纸钵中，至3/4高度，待用。 5.3对照品种选择 选用感病对照和抗病对照各1个。感病对照要求高度感枯萎病的常规棉花品种或材料，选择标准 为规定接种量及适宜环境条件下病情指数能达到50.0左右，且感病性稳定；抗病对照选用抗枯萎病常 规品种，规定接种量及适宜环境条件下病情指数在10.0以下，且抗病性稳定。为减缓抗、感对照的抗性 变异，可将对照品种在无病地隔离繁殖，冷库保存，一次繁殖，供5年以上使用。 6鉴定程序 6.1试验材料处理 鉴定的棉花材料应为硫酸脱绒未包衣的种子，符合GB4407.1的要求。 6.2试验材料种植 粒10粒。每品种3次重复，每重复1盘12钵；然后用灭菌沙子覆盖至与钵体平齐。 6.3温室管理 播种后，温度控制在23℃～28℃；出苗后，及时疏苗，每钵留苗3棵～5棵；土壤湿度控制在60%～ 80%。 6.4病情调查记载 棉花播种出苗后，实时监测感病对照的发病情况，当感病对照的病情指数达到35.0以上时，进行全 标推见表1。 表1枯萎病苗期分级标准 级别 1片真叶期 2片真叶期 0 棉株健康，无病状 棉株健康，无病状 1 1片子叶表现病状，真叶不显病状 1片～2片子叶表现病状，真叶不显病状 2 2片子叶表现病状 子叶和1片真叶表现病状 3 1片真叶表现病状 2片真叶表现病状 4 全部叶片表现病状，严重时叶片脱落，顶心枯死 全部叶片表现病状，严重时叶片脱落，顶心枯死 7结果计算 7. 1 病株率 病株率(Di)按式(1)计算。 2 NY/T3427—2019 ni×100 Di = (1) nt 式中： Di 病株率，单位为百分率（%）； n; 发病株数，单位为株； n, 总株数，单位为株。 计算结果保留1位小数。 7.2病株率均值 病株率均值(ADi)按式(2)计算 B (2) 式中： ADi 病株率均值 Di; 第i重复的病株单 n 每品种重 复的欢数 单位为 计算结果保留 7.3病情指数 病情指数( 安式3 URA .......(3) 式中： DI d. 相 应疗 级： ne 各病级 丙株 数 n, 总株 计算结果保留 7.4病情指数均值 病情指数均值（ADI) (4) 式中： ADI 病情指数均值； DI: 第i重复的病情指数。 计算结果保留1位小数。 7.5相对病情指数 校正系数按式(5)计算。 50.0 K= ADIck (5) 式中： K 校正系数； 50.0 感病对照标准病情指数； 3 NY/T 3427—2019 ADIck——本次鉴定感病对照病情指数均值。 相对病情指数(RDI)按式(6)计算。 RDI = ADI × K (6) 式中： RDI- -相对病情指数。 计算结果保留1位小数。 8抗性评价 8.1相对病情指数均值 依据2次或2次以上的调查结果计算相对病情指数平均值，作为最终相对病情指数。相对病情指 数均值(ARDI)按式(7)计算： ≥ (RDI:) ARDI (7) m 式中: RDI;第i次相对病情指数; m 整个生育期计算相对病情指数的次数，单位为次。 计算结果保留1位小数。 8.2抗性鉴定结论 鉴定结果报告表见附录D。根据被鉴定品种的相对病情指数均值(ARDI)评定品种的抗性级别,抗 性级别的划分标准见表2。 表2棉花品种抗性级别的划分标准 抗性类型 英文缩写 相对病情指数均值(ARDI) 免疫 1 ARDI-0 高抗 HR 0<ARDI≤5.0 抗病 R 5. 0<ARDI≤10. 0 耐病 T 10. 0<ARDI≤20. 0 感病 s ARDI>20.0 4 NY/T 3427—2019 附录A (规范性附录） 培养基配制 A.1马铃薯琼脂培养基(PDA)：葡萄糖20g、琼脂12g，去皮马铃薯200g，用蒸馏水定容至1L,0.1 MPa、121℃高压灭菌30min,使用前每100mL培养基加人100μL硫酸链霉素(100μg/mL)。 A.2查比克液体培养基(Czapek):NaNO32.00g、K2HPO41. 00g、KCl 0.50g、MgSO4·7H2O0.50 g、 FeSO4 0. 01 g、蔗糖 30. 00 g,用水定容至 1 000 mL,0. 1 MPa、121℃灭菌 30 min。 A.3玉米沙粒培养基：将沙子和玉米粉按质量比1：1混匀，加人适量的水，制作玉米沙粒培养基，装 人1L的克氏瓶中，0.1MPa、121℃湿热灭菌30min，冷却到室温备用。 5