ICS 67.050 SB X 04 备案号：25147-2008 中华人民共和国商业行业标准 SB/T10501--2008 畜禽肉中地西泮的测定 高效液相色谱法 Determination of diazepam in muscle of livestock and poultry-- High performance liquid chromatography 2008-09-27发布 2009-03-01实施 中华人民共和国商务部 发布 SB/T 10501--2008 前言 本标准的附录A为资料性附录。 本标准由中华人民共和国商务部提出并归口。 本标准由中华人民共和国商务部屠宰技术鉴定中心负责起草。 本标准主要起草人：侯晓林、宋德华、金社胜、刘文娟。 本标准委托商务部屠宰技术鉴定中心负责解释。 I SB/T10501-2008 蓄禽肉中地西洋的测定 高效液相色谱法 1范围 本标准规定了畜禽肉中地西洋的高效液相色谱(HPLC)测定方法。 本标准适用于鸡肉和猪肉中地西泮残留的检测。 本方法的最低检测限为0.01mg/kg。 2规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有 的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究 是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法（GB/T6682—2008，ISO3639：1987，MOD) 3方法原理 被检样品组织中地西泮经乙腈提取，固相萃取净化，用反相高效液相色谱-紫外检测器进行检测，采 用外标法定量。 4试剂与材料 除有特殊指明外，本方法中涉及试剂均为分析纯，水为符合GB/T6682规定的二级水。 4.1乙腈：色谱纯。 4.2甲醇：色谱纯。 4.3乙酸铵。 4.4异丙醇。 4.5乙酸。 4.6 高氯酸。 4.7 三乙胺。 4.8地西洋标准品。 4.9C1a固相萃取小柱：500mg，3mL，或相当者。 4.101%高氯酸溶液：取1mL高氯酸，用水稀释至100mL。 4.11名 微孔针简式滤膜0.2μm。 4.12标准溶液 4.12.1标准贮备液 分别精密称取50.0mg（根据纯度折算成纯物质）地西泮标准品，用乙睛溶解并于50mL容量瓶定 容，一18℃避光可稳定保存6个月。 4.12.2标准工作液 临用前，取上述标准贮备液，用1%高氯酸水溶液稀释成浓度为0.05μg/mL，0.10μg/mL， 4.13淋洗液：甲醇：水：三乙胺（35：65：0.1，体积比）。 1 SB/T10501—2008 5仪器与设备 5.1 配有紫外-可见光检测器的高效液相色谱仪。 5.2天平：感量0.01g。 5.3天平：感量0.0001g。 5.4冷冻离心机。 5.5 组织匀浆机。 5.6旋转蒸发仪。 6样品制备 肌肉组织样品经高速组织匀浆机匀浆。保存于一20℃冰箱待用。 7分析步骤 7.1样品处理 7.1.1提取 称取5g（准确至0.01g)匀浆试样，加无水硫酸钠5g，用20mL乙睛提取，超声15min，4000/min 10mL异丙醇，50℃减压旋转蒸至近干，用5mL甲醇-水（2：8，体积比）溶解。 7.1.2净化 Cis固相萃取柱依次用5mL甲醇，5mL水，5mL甲醇-水（2：8，体积比）平衡，将上述复溶液上样： 再用5mL淋洗液（4.13）洗涤鸡心瓶，用鸡心瓶洗涤液洗涤小柱；最后用5mL甲醇-乙酸（95：5，体积 比）洗脱样品残留，收集洗脱液。 将收集的洗脱液于50℃水浴氮气吹干，用1%高氯酸水溶液1mL，正已烷2mL复溶，静置分层后 取下层水相过0.2μm滤膜，供HPLC(高效液相色谱)分析。 7.2测定 7.2.1液相色谱参考条件 色谱柱：GraceSmartRP18(250X4.6mm，5μm）或相当者。 流动相：0.02mol乙酸铵水溶液：乙腈（40：60，体积比）。 流速：1.0mL/min。 检测波长：230nm。 进样量：50μL。 7.2.2标准曲线 泮标准工作溶液，然后依据上述色谱条件，每个标准工作液进样量50μL，测定其峰面积，以标准液浓度 对应峰面积做校正曲线，求出线性回归方程和相关系数。标准溶液的色谱图参见图A.1。 7.2.3样品测定 在上述色谱条件下，吸取已净化的样品溶液50uL，进行HPLC分析。 样品中待测组分的浓度按式（1)计算。 X-cxV (1) m 式中： X—一样品中待测组分的浓度，单位为毫克每千克（mg/kg)； C 由标准曲线得出的样液中地西洋的浓度，单位为微克每毫升（μg/mL）； 2 SB/T10501—2008 m一一检测样品取样量，单位为克（g）； V-样品定容体积，单位为毫升（mL）。 对测定结果用平行样测定的算术平均值表示，保留至小数点后1位。 8精密度 在重复性条件下获得的两个平行测定结果的相对偏差不大于10%。 SB/T 10501—2008 SB/T10501—2008 附录A （资料性附录） 地西洋标准品色谱图 DAD1C, Sig-230,4 Ref=off(20071101\DXP00001.D) Lnvu 40 30 20 287 10 0- 0 8 min 图A.1 地西洋标准品色谱图（地西洋标准品保留时间为6.287min） SB/T 10501—2008 SB/T10501—2008 附录A （资料性附录） 地西洋标准品色谱图 DAD1C, Sig-230,4 Ref=off(20071101\DXP00001.D) Lnvu 40 30 20 287 10 0- 0 8 min 图A.1 地西洋标准品色谱图（地西洋标准品保留时间为6.287min）