ICS 67.120 X 04 SB 备案号：14169—2004 中华人民共和国国内贸易行业标准 SB/T10388--2004 畜禽肉中磺胺二甲嘧啶、 磺胺甲唑的测定 Determination of sulfamethazine and sulfamethoxazole in meat of livestock and poultry 2004-08-04发布 2004-09-01实施 中华人民共和国商务部 发布 www.techtrans.cn SB/T 10388—2004 前 言 本标准由中华人民共和国商务部提出。 本标准由商务部屠宰技术鉴定中心负责起草，中国疾病预防控制中心营养与食品安全所、河北省疾 病预防控制中心参加起草。 本标准主要起草人：杨祖英、金社胜、刘震、宋书锋、韩会新、张新玲、刘文娟、王贵际。 本标准委托商务部屠宰技术鉴定中心负责解释。 www.techtrans.cn SB/T10388—2004 畜禽肉中磺胺二甲嘧啶、 磺胺甲嗯唑的测定 1范围 本标准规定了用高效液相色谱法测定畜禽肉中磺胺二甲嘧啶、磺胺甲嗯唑的残留量。 本标准适用于畜禽肉中磺胺二甲嘧啶、磺胺甲嗯唑的测定。 2原理 样品中磺胺二甲密啶、磺胺甲嗯唑经乙腈十三氯甲烷（10V十1V)提取后，又经过液-液分配转入水 层进行净化后，用紫外检测器的高效液相色谱仪检测，外标法定量。 3试剂和材料 以下所用试剂，除特殊说明外，均为分析纯试剂，水为重蒸水。 3.1乙睛（优级纯，作流动相用）。 3.2甲醇（优级纯）。 3.3正已烷。 3.4三氮甲烷。 3.5乙腈+三氯甲烷（(10V+1V)。 3.6乙腈+兰氯甲烷（2V+1V)。 3.7硫酸钠。 3.8硫酸钠溶液：2%水溶液（质量浓度）。 摇匀后，通过0.45μm微孔滤膜过滤。 3.10冰乙酸。 3.11标准品：纯度≥99%。 3.11.1磺胺二甲嘧啶。 3.11.2磺胺甲噻唑。 3.12标准溶液 3.12.1标准储备液：准确称取磺胺二甲嘧啶、磺胺甲嗯唑各10.0mg，分别用乙睛溶解，各移入 100mL容量瓶中，并用乙睛稀释定容，摇匀。此溶液浓度各为100μg/mL。贮于冰箱中，有效期3 个月。 3.12.2混合标准中间液：分别吸取标准储备液各5.0mL于50mL容量瓶中，用流动相稀释至刻度， 摇匀。即得含磺胺二甲嘧啶、磺胺甲嗯唑分别为10.0μg/mL的标准中间液。贮于冰箱中，有效期1 个月。 3.12.3混合标准工作液：分别吸取混合标准中间液0,0.05,0.10，0.25，0.50和1.0mL，分别放人各 自的10mL容量瓶中，各用流动相稀释至刻度，摇匀，即得混合标准工作液，含磺胺二甲嘧啶、磺胺甲嗯 唑分别为0,0.05,0.10,0.25,0.50,1.00μg/mL的标准系列溶液。 1 www.techtrans.cn SB/T10388-2004 4仪器和设备 4.1高效液相色谱仪：附紫外检测器。 4.2旋转蒸发仪。 4.3涡流混匀器。 4.4超声波发生器。 4.5旋转蒸发仪。 4.6微孔滤膜过滤器。 5测定步骤 5.1试样处理 取200g试样绞碎，称取5.0g（精确至0.00g)绞碎后的试样，置于塑料试管中，加人约1g硫酸钠， 乙睛+三氯甲烷（10V+1V)20mL，超声提取15min，2500r/min离心3min，过滤取滤液于蒸发瓶 中，残渣再加乙睛十三氯申烧（10V十1V)20ml，超声提取15min，2500r/min离心3min，过滤合并 滤液于蒸发瓶中，于<40℃水浴旋转蒸发仪上蒸发至干（如果量大，可分两次蒸）。残灌加人2.0mL 2%硫酸钠水溶液和3.0mL正已烷，在涡流混勾器上剧烈混合。转入离心管中，4000r/min离心 3min。用吸管吸去上层正已烷，并弃去。再用3.0mL正已烷洗水相-一次，同法弃去正已烷。向水相 中加入30mI.乙腊十三氯甲烷混合溶剂（2V十1V），于涡流混匀器上剧烈混匀，用吸管吸去上层液并弃 去。下层有机相转人蒸发瓶中，于40℃水浴中旋转蒸发至干。准确加入1.0mL流动相溶解残渣，于涡 流混匀器上混匀3min。通过0.45μm的微孔滤膜过滤。滤液作HPI.C分析。 5.2测定 5.2.1液相色谱参考条件 a) 色谱柱：HypersilODS2250mmX4.6mm(内径），粒径5μm； b) 流动相：甲醇十0.01ml/1磷酸盐缓冲液+冰乙酸=25十75+1.1； c) 检测波长：270nm； d) 流速：1.0mL/min。 5.2.2标准曲线 依照上述色谱条件，分别进标准工作液各个点。每个标准液进20产L，测定其峰面积，然后以标准 液浓度对峰面积作校准曲线，求出回归方程及相关系数。 5.2.3样品的测定 在上述色谱条件下，吸取已净化的样品溶液20μL，进行HPLC分析。 6结果 6.1计算 将标准曲线各点的浓度与对应的峰面积进行回归分析，然后按式（1)分别计算供试样品中磺胺二甲 嘧啶、磺胺甲呕唑的含量。 X=XVX1000 mX1000 .(1) 式中： X——样品中磺胺二甲嘧啶（或磺胺甲嘎唑）的含量，单位为毫克每千克(mg/kg)； 一-被测液中磺胺二甲嘧啶（或磺胺甲嗯唑）的含量，单位为微克每毫升（μg/mlL.)； 2 www.techtrans.cn SB/T10388—2004 V-—被测液体积，单位为毫升（mL)； m---样品质量，单位为克（g）。 6.2 2检出限 本方法检出限为0.01μg/mL，当取样量为5g时，方法的最低检出量为2g/kg。 允许差 同一分析者同时或相继两次测定结果之差不得超过均值的15%。 www.techtrans.cn SB/T10388—2004 V-—被测液体积，单位为毫升（mL)； m---样品质量，单位为克（g）。 6.2 2检出限 本方法检出限为0.01μg/mL，当取样量为5g时，方法的最低检出量为2g/kg。 允许差 同一分析者同时或相继两次测定结果之差不得超过均值的15%。 www.techtrans.cn SB/T10388—2004 V-—被测液体积，单位为毫升（mL)； m---样品质量，单位为克（g）。 6.2 2检出限 本方法检出限为0.01μg/mL，当取样量为5g时，方法的最低检出量为2g/kg。 允许差 同一分析者同时或相继两次测定结果之差不得超过均值的15%。 www.techtrans.cn