ICS 67.120 X 04 SB 备案号：14168—2004 中华人民共和国国内贸易行业标准 SB/T10387-2004 畜禽肉和水产品中喃唑酮的测定 Determination of furazolidonein meat of livestock, poultryand aquatic products 2004-08-04发布 2004-09-01实施 中华人民共和国商务部 发布 www.techtrans.cn SB/T10387—2004 前 言 本标准由中华人民共和国商务部提出。 本标准由商务部屠宰技术鉴定中心负责起草，中国疾病预防控制中心营养与食品安全所、河北省疾 病预防控制中心参加起草。 本标准主要起草人：周琛、金社胜、杨祖英、宋书、韩会新、张新玲、刘虎成、王贵际。 本标准委托商务部屠宰技术鉴定中心负责解释。 www.techtrans.cn SB/T10387—2004 畜禽肉和水产品中呋喃唑酮的测定 1范围 本标准规定了畜禽肉和水产品中呋哺唑酮的测定方法。 本标准适用于畜禽肉和水产品中喃唑酮的检验。 2原理 样品中呋腩唑酮用二氯甲烷提取，经无水硫酸钠柱净化，用正已烷去脂肪后，0.45μm微孔滤膜过 滤，滤液进行HPLC分析。 3试剂与试液 以下所用试剂，除特殊说明外，均为分析纯试剂，水为重蒸水。 3.1乙腈：优级纯，作流动相用。 3.2乙睛：色谱纯。 3.3乙腈水溶液：乙腈十水（80+20，V/V)。 3.4正已烷。 3.5甲醇：色谱纯。 3.6无水硫酸钠：经650℃灼烧4h后，贮于密闭容器中备用。 3.7无水硫酸钠柱：6cmX1.8cm，内装5cm高的无水硫酸钠（如果无合适的玻璃柱，可以用10mL 注射器代替）。 3.8二氯甲烷。 3.9磷酸。 3.10呋喃唑酮标准品：纯度99.7%。 3.11呋喃唑酮标准储备液：称取10.0mg呋哺唑酮，用乙腈水溶液（3.3)溶解并稀释定容至50mL棕 色容量瓶中，保存于冰箱中。该液1.0mL相当于200μg呋嘴唑酮。 3.12呋喃唑酮标准工作液系列：精确吸取呋喃唑酮标准储备液2.0mL于50mL棕色容量瓶中，加水 至刻度，播匀，即得8.0μg/mL的溶液，然后精确吸取此液0.05，0.10,0.20，0.50，1.0,2.0mL，分别放 在10.0mL棕色容量瓶内，分别加水至刻度，摇匀，即得每毫升含0.04，0.08,0.16,0.40,0.80,1.60μg 的标准系列溶液。 4仪器和设备 4.1高效液相色谱仪：附紫外检测器。 4.2超声波清洗器。 4.3旋涡混匀器。 4.4离心机。 4.5旋转蒸发仪。 4.6微量进样器：25μL。 5测定步骤 5.1提取与净化 取200g试样绞碎，称取混勾的绞碎的试样10g（精确至0.01g)，于100mL具塞锥形瓶中，加 1 www.techtrans.cn SB/T10387—2004 25mL二氯甲烷，超声提取5min，提取液通过无水硫酸钠柱滤人100mL蒸发瓶中，继用25mL二氯甲 烷重复提取一次，均通过无水硫酸钠柱滤入同一蒸发瓶中，用二氟甲烷15mL淋洗无水硫酸钠柱。淋 洗液合并于同一蒸发瓶，滤液于旋转蒸发仪上蒸发至干（水浴温度为30℃～35℃）。 然后准确加人1.0mL乙腈水溶液和1.0mL正已烷于旋涡混匀器上混勾2min，转人5mL离心 1mL正已烷，混勾2min，离心，用吸管移去上层正已烷层，下层清液通过0.45μm微孔滤膜过滤，滤液 供HPLC分析用。 5.2色谱测定 5.2.1液相色谱参考条件 a) 色谱柱：HypersilODS2Cig，250mmX4.6mm，粒径5μm； b) 流动相：乙晴+十水（40+60），每1000mL加1.0mL磷酸； c) 流速：1.0mL/min d) 检测波长：365nm； e）柱温：室温。 5.2.2喃唑酮标准曲线的制备 依照上述色谱条件，分别进标准工作液各个点。每个标准液进20μL，测定其峰面积，然后以标准 液浓度对峰面积作校准曲线，求出回归方程及相关系数。 5.2.3样品测定 在上述色谱条件下，准确吸取20uL试样溶液，进行HPLC分析。 6结果 6.1计算 将标准曲线各点的浓度与对应的峰面积进行回归分析，然后按式（1)计算供试样品中呋响唑酮的 含量。 X=cXV×1000 (1) mX1000 式中： X样品中含有峡哺唑酮的含量，单位为毫克每千克（mg/kg）; c——被测液中相当于标准曲线的呋嘴唑酮，单位为微克每亳升（μg/mL）； V-被测液的体积，单位为毫升（mL) m—样品质量，单位为克（g）。 6.2检出限 本方法的检测限为0.01μg/mL，当取样量为10g时，最低检测量为1.0μg/kg。 7允许差 同一分析者同时或相继两次测定结果之差不得超过均值的15%。 2 www.techtrans.cn SB/T10387—2004 25mL二氯甲烷，超声提取5min，提取液通过无水硫酸钠柱滤人100mL蒸发瓶中，继用25mL二氯甲 烷重复提取一次，均通过无水硫酸钠柱滤入同一蒸发瓶中，用二氟甲烷15mL淋洗无水硫酸钠柱。淋 洗液合并于同一蒸发瓶，滤液于旋转蒸发仪上蒸发至干（水浴温度为30℃～35℃）。 然后准确加人1.0mL乙腈水溶液和1.0mL正已烷于旋涡混匀器上混勾2min，转人5mL离心 1mL正已烷，混勾2min，离心，用吸管移去上层正已烷层，下层清液通过0.45μm微孔滤膜过滤，滤液 供HPLC分析用。 5.2色谱测定 5.2.1液相色谱参考条件 a) 色谱柱：HypersilODS2Cig，250mmX4.6mm，粒径5μm； b) 流动相：乙晴+十水（40+60），每1000mL加1.0mL磷酸； c) 流速：1.0mL/min d) 检测波长：365nm； e）柱温：室温。 5.2.2喃唑酮标准曲线的制备 依照上述色谱条件，分别进标准工作液各个点。每个标准液进20μL，测定其峰面积，然后以标准 液浓度对峰面积作校准曲线，求出回归方程及相关系数。 5.2.3样品测定 在上述色谱条件下，准确吸取20uL试样溶液，进行HPLC分析。 6结果 6.1计算 将标准曲线各点的浓度与对应的峰面积进行回归分析，然后按式（1)计算供试样品中呋响唑酮的 含量。 X=cXV×1000 (1) mX1000 式中： X样品中含有峡哺唑酮的含量，单位为毫克每千克（mg/kg）; c——被测液中相当于标准曲线的呋嘴唑酮，单位为微克每亳升（μg/mL）； V-被测液的体积，单位为毫升（mL) m—样品质量，单位为克（g）。 6.2检出限 本方法的检测限为0.01μg/mL，当取样量为10g时，最低检测量为1.0μg/kg。 7允许差 同一分析者同时或相继两次测定结果之差不得超过均值的15%。 2 www.techtrans.cn SB/T10387—2004 25mL二氯甲烷，超声提取5min，提取液通过无水硫酸钠柱滤人100mL蒸发瓶中，继用25mL二氯甲 烷重复提取一次，均通过无水硫酸钠柱滤入同一蒸发瓶中，用二氟甲烷15mL淋洗无水硫酸钠柱。淋 洗液合并于同一蒸发瓶，滤液于旋转蒸发仪上蒸发至干（水浴温度为30℃～35℃）。 然后准确加人1.0mL乙腈水溶液和1.0mL正已烷于旋涡混匀器上混勾2min，转人5mL离心 1mL正已烷，混勾2min，离心，用吸管移去上层正已烷层，下层清液通过0.45μm微孔滤膜过滤，滤液 供HPLC分析用。 5.2色谱测定 5.2.1液相色谱参考条件 a) 色谱柱：HypersilODS2Cig，250mmX4.6mm，粒径5μm； b) 流动相：乙晴+十水（40+60），每1000mL加1.0mL磷酸； c) 流速：1.0mL/min d) 检测波长：365nm； e）柱温：室温。 5.2.2喃唑酮标准曲线的制备 依照上述色谱条件，分别进标准工作液各个点。每个标准液进20μL，测定其峰面积，然后以标准 液浓度对峰面积作校准曲线，求出回归方程及相关系数。 5.2.3样品测定 在上述色谱条件下，准确吸取20uL试样溶液，进行HPLC分析。 6结果 6.1计算 将标准曲线各点的浓度与对应的峰面积进行回归分析，然后按式（1)计算供试样品中呋响唑酮的 含量。 X=cXV×1000 (1) mX1000 式中： X样品中含有峡哺唑酮的含量，单位为毫克每千克（mg/kg）; c——被测液中相当于标准曲线的呋嘴唑酮，单位为微克每亳升（μg/mL）； V-被测液的体积，单位为毫升（mL) m—样品质量，单位为克（g）。 6.2检出限 本方法的检测限为0.01μg/mL，当取样量为10g时，最低检测量为1.0μg/kg。 7允许差 同一分析者同时或相继两次测定结果之差不得超过均值的15%。 2 www.techtrans.cn SB/T10387—2004 25mL二氯甲烷，超声提取5min，提取液通过无水硫酸钠柱滤人100mL蒸发瓶中，继用25mL二氯甲 烷重复提取一次，均通过无水硫酸钠柱滤入同一蒸发瓶中，用二氟甲烷15mL淋洗无水硫酸钠柱。淋 洗液合并于同一蒸发瓶，滤液于旋转蒸发仪上蒸发至干（水浴温度为30℃～35℃）。 然后准确加人1.0mL乙腈水溶液和1.0mL正已烷于旋涡混匀器上混勾2min，转人5mL离心 1mL正已烷，混勾2min，离心，用吸管移去上层正已烷层，下层清液通过0.45μm微孔滤膜过滤，滤液 供HPLC分析用。 5.2色谱测定 5.2.1液相色谱参考条件 a) 色谱柱：HypersilODS2Cig，250mmX4.6mm，粒径5μm； b) 流动相