ICS 67.120 X 04 SB 备案号：14167—2004 中华人民共和国国内贸易行业标准 SB/T10386—2004 畜禽肉中氯霉素的测定 Determination of chloramphenicol in meat of livestock and poultry 2004-08-04发布 2004-09-01实施 中华人民共和国商务部 发布 www.techtrans.cn SB/T 10386—2004 前 言 本标准由中华人民共和国商务部提出。 本标准由商务部屠宰技术鉴定中心负责起草，中国疾病预防控制中心营养与食品安全所、河北省疾 病预防控制中心参加起草。 本标准主要起草人：刘文娟、杨祖英、宋书锋、韩会新、张新玲、刘虎成、王贵际。 本标准委托商务部屠宰技术鉴定中心负责解释。 www.techtrans.cn SB/T10386—2004 畜禽肉中氯素的测定 1范围 本标准规定了畜、禽肉中氯霉素的测定方法。 本标准适用于畜、禽肉中氯舞素的检验 2原理 试样中残留的氯霉素经乙酸乙酯提取后，经减压浓缩，用0.5mol/L高氰酸溶解残渣，用正己烷去 除脂肪，经微孔滤膜过滤后，滤液供高效液相色谱分析。 3试剂和材料 以下所用的试剂，除特别注明者外均为分析纯试剂，水为重蒸水。 3.1甲醇：色谱纯。 3.2正已烷。 3.3氯霉素每毫克相当994单位，含量≥99%。 3.4乙酸乙酯。 3.5高氯酸。 3.6氯薇素标准储备液：精确称取0.010g氯素标准品，置于100mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀释 至刻度，摇勾。此溶液浓度为0.10mg/mL，置于冰箱中保存，有效期3个月。 3.7氯霉素标准工作液：精确吸取5.0mL储备液于50mL容量瓶中，用甲醇稀释至刻度。此溶液浓 度10μg/mL，置于冰箱保存。有效期半个月。临用前取此液用0.5mol/L高氯酸稀释成适当浓度的标 准工作液。 4仪器和设备 4.1高效液相色谱仪（配紫外检测器）。 4.2旋转蒸发仪。 4.3涡流混匀器。 4.4 超声波发生器。 4.5 旋转蒸发仪。 4.6 微孔滤膜过滤。 5测定步聚 5.1提取 取200g试样绞碎，称取20g（精确至0.01g）绞碎后的试样，置于100mL具塞三角瓶中，加人 40mL乙酸乙酯，振摇，超声提取30min，过滤，滤液放于另一三角瓶中。再加人20mL乙酸乙酯于试 样中，超声提取15min，过滤，滤液合并，滤渣再加20mL乙酸乙酯超声提取15min，过滤，滤液合并，全 部滤液合并转入浓缩瓶中。 5.2净化 将合并的滤液于52℃~55℃水浴旋转蒸发仪上浓缩至干。准确加人1.0mL0.5mol/L高氯酸溶 液洗涤浓缩瓶中残留物，再加人1mL正已烷，振摇1min，将全部溶液转移至5mL试管中，静止分层， www.techtrans.cn SB/T10386—2004 吸弃正已烷层，再加入2mL正已烷提取脂肪，再吸弃正已烷层，高氯酸溶液过0.45μm滤膜，滤液供高 效液相色谱测定。 5.3测定 5.3.1液相色谱参考条件 a) 色谱柱：HypersilODS2250mm×4.6mm，粒径5μm b) 流动相：甲醇十水=45十55； c) 流速：1.0mL/min; d) 检测波长：280nm； (a 柱温：室温； 进样量：20μL。 5.3.2氯霉素标准曲线的制备 依照上述色谱条件，分别注人标准工作液各点。每个标准液进20L测定其峰面积，然后以标准液 浓度对峰面积作校准曲线，求出回归方程及相关系数。 5.3.3样品的测定 在上述色谱条件下，吸取已净化的样品溶液20μL，进行HPLC分析。 6结果 6.1计算 将标准曲线各点的浓度与对应的峰面积进行回归分析，然后按式（1)分别计算供试样中氯霉素的 含量。 X=cXV×1000 (1) #×1000 式中： X--样品中氯霉素的含量，单位为毫克每千克（mg/kg）； 被测液中氯霉素的含量，单位为微克每毫升（μg/mL）； V—被测液体积，单位为毫升(mL)； m- 一样品质量，单位为克（g）。 6.2检出限 本方法的检测限为0.01ug/mL，当取样量为20g时，最低检测量为1.0μg/kg。 7允许差 同一分析者同时或相继两次测定结果之差不得超过均值的15%。 2 www.techtrans.cn SB/T10386—2004 吸弃正已烷层，再加入2mL正已烷提取脂肪，再吸弃正已烷层，高氯酸溶液过0.45μm滤膜，滤液供高 效液相色谱测定。 5.3测定 5.3.1液相色谱参考条件 a) 色谱柱：HypersilODS2250mm×4.6mm，粒径5μm b) 流动相：甲醇十水=45十55； c) 流速：1.0mL/min; d) 检测波长：280nm； (a 柱温：室温； 进样量：20μL。 5.3.2氯霉素标准曲线的制备 依照上述色谱条件，分别注人标准工作液各点。每个标准液进20L测定其峰面积，然后以标准液 浓度对峰面积作校准曲线，求出回归方程及相关系数。 5.3.3样品的测定 在上述色谱条件下，吸取已净化的样品溶液20μL，进行HPLC分析。 6结果 6.1计算 将标准曲线各点的浓度与对应的峰面积进行回归分析，然后按式（1)分别计算供试样中氯霉素的 含量。 X=cXV×1000 (1) #×1000 式中： X--样品中氯霉素的含量，单位为毫克每千克（mg/kg）； 被测液中氯霉素的含量，单位为微克每毫升（μg/mL）； V—被测液体积，单位为毫升(mL)； m- 一样品质量，单位为克（g）。 6.2检出限 本方法的检测限为0.01ug/mL，当取样量为20g时，最低检测量为1.0μg/kg。 7允许差 同一分析者同时或相继两次测定结果之差不得超过均值的15%。 2 www.techtrans.cn SB/T10386—2004 吸弃正已烷层，再加入2mL正已烷提取脂肪，再吸弃正已烷层，高氯酸溶液过0.45μm滤膜，滤液供高 效液相色谱测定。 5.3测定 5.3.1液相色谱参考条件 a) 色谱柱：HypersilODS2250mm×4.6mm，粒径5μm b) 流动相：甲醇十水=45十55； c) 流速：1.0mL/min; d) 检测波长：280nm； (a 柱温：室温； 进样量：20μL。 5.3.2氯霉素标准曲线的制备 依照上述色谱条件，分别注人标准工作液各点。每个标准液进20L测定其峰面积，然后以标准液 浓度对峰面积作校准曲线，求出回归方程及相关系数。 5.3.3样品的测定 在上述色谱条件下，吸取已净化的样品溶液20μL，进行HPLC分析。 6结果 6.1计算 将标准曲线各点的浓度与对应的峰面积进行回归分析，然后按式（1)分别计算供试样中氯霉素的 含量。 X=cXV×1000 (1) #×1000 式中： X--样品中氯霉素的含量，单位为毫克每千克（mg/kg）； 被测液中氯霉素的含量，单位为微克每毫升（μg/mL）； V—被测液体积，单位为毫升(mL)； m- 一样品质量，单位为克（g）。 6.2检出限 本方法的检测限为0.01ug/mL，当取样量为20g时，最低检测量为1.0μg/kg。 7允许差 同一分析者同时或相继两次测定结果之差不得超过均值的15%。 2 www.techtrans.cn SB/T10386—2004 吸弃正已烷层，再加入2mL正已烷提取脂肪，再吸弃正已烷层，高氯酸溶液过0.45μm滤膜，滤液供高 效液相色谱测定。 5.3测定 5.3.1液相色谱参考条件 a) 色谱柱：HypersilODS2250mm×4.6mm，粒径5μm b) 流动相：甲醇十水=45十55； c) 流速：1.0mL/min; d) 检测波长：280nm； (a 柱温：室温； 进样量：20μL。 5.3.2氯霉素标准曲线的制备 依照上述色谱条件，分别注人标准工作液各点。每个标准液进20L测定其峰面积，然后以标准液 浓度对峰面积作校准曲线，求出回归方程及相关系数。 5.3.3样品的测定 在上述色谱条件下，吸取已净化的样品溶液20μL，进行HPLC分析。 6结果 6.1计算 将标准曲线各点的浓度与对应的峰面积进行回归分析，然后按式（1)分别计算供试样中氯霉素的 含量。 X=cXV×1000 (1) #×1000 式中： X--样品中氯霉素的含量，单位为毫克每千克（mg/kg）； 被测液中氯霉素的含量，单位为微克每毫升（μg/mL）； V—被测液体积，单位为毫升(mL)； m- 一样品质量，单位为克（g）。 6.2检出限 本方法的检测限为0.01ug/mL，当取样量为20g时，最低检测量为1.0μg/kg。 7允许差 同一分析者同时或相继两次测定结果之差不得超过均值的15%。 2 www.techtrans.cn