ICS65.020 B 16 NY 中华人民共和国农业行业标准 NY/T 3344—2019 苹果腐烂病抗性鉴定技术规程 Technical code of practice for evaluation of apple cultivars for resistance to Valsacankerdisease 2019-09-01实施 2019-01-17 发布 中华人民共和国农业农村部 发布 NY/T3344—2019 前言 本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。 本标准由农业农村部种植业管理司提出并归口。 本标准起草单位：中国农业科学院果树研究所。 本标准主要起草人：徐成楠、周宗山、冀志蕊、迟福梅、张俊祥、王娜、乔壮。 NY/T3344—2019 苹果腐烂病抗性鉴定技术规程 1范围 本标准规定了苹果树抗腐烂病鉴定的术语和定义、接种体制备、室内鉴定技术和病情调查。 本标准适用于苹果不同栽培品种资源及野生资源、杂交群体的室内人工接种鉴定和评价。 2术语和定义 下列术语和定义适用于本 文件 2. 1 RD 苹果树腐烂病 烂的侵染性真菌病害（病 原菌生物学性状参见附 2. 2 人工接种 在适宜条件 通过人 操作将接种体罩于植物件 引起发 2. 3 A 病情级别 ating scale 人为定量植物 2. 4 eValua 抗病性鉴定 通过适宜技 2. 5 C 抗性评价 evaluation 根据采用的技术标 示准判别 接种体制备 3.1 病原物分离 以常规组织分离法，从发病苹果枝干的典型病斑 分离腐烂病病原菌 离物经形态学观察和分 子鉴定确认为苹果树腐烂病菌后 4℃下保存备用。 3.2接种体繁殖 病菌分生孢子的获取：采集田间二年生苹果枝条枝条直径约为8mm，截成8cm长短的枝段，取3 枝～4枝装人250mL三角瓶中并加人3mL～4mL蒸馏水，湿热灭菌备用。将分离获得的腐烂病菌菌 株在马铃薯琼脂培养基(PDA)上25℃培养7d备用。用4mm打孔器取菌饼3个～4个，置于三角瓶内 的灭菌无伤苹果枝条上，25℃光暗交替保湿培养15d～30d。待离体苹果枝条上形成子实体并涌出黄 色分生孢子角时，用灭菌移植针挑取分生孢子，并用无菌水制成浓度约为1×106个孢子/mL的接种悬 浮液。 4室内鉴定 4.1鉴定室 1 NY/T3344—2019 室内离体枝条抗病性鉴定的鉴定室能够人工调节室内温度和光照，使其可提供良好的发病环境条 件，即室温为25℃、12h光暗交替进行培养。 4.2鉴定接种 待鉴定材料采用3次重复，每重复10个枝条，以红富士健康树枝条接种腐烂病菌为对照。 鉴定接种：田间采集用于进行抗病性鉴定苹果品种的健康、长势一致、无侧枝二年生枝条，截取长度 为30cm并两端蜡封，每枝段用4mm打孔器打4个孔，均在枝条正面，每孔间距为6cm，除去孔内外表 皮，留少量韧皮部，每孔滴加5μL纯氨水。待氨水风干后，每孔接种10μL孢子悬浮液，将枝段放人垫 有湿纱布的糖瓷盘中，用保鲜膜覆盖保湿，放人环境温度为25℃的培养室中12h光暗交替培养。 5病情调查 5.1调查时间与方法 接种3d～4d后进行发病情况调查，用刀片刮除枝条接种点周围树皮，全部露出病菌在木质部表面 扩展病斑，用直尺对病斑扩展长度进行纵向测量。 5.2抗病性级别划分 苹果离体枝条腐烂病扩展长度及其相对应的抗性标准见表1。 表1苹果树腐烂病在离体苹果枝条发病分级标准 病情级别 严重度划分标准，mm 0 病斑扩展长度5 1 5<病斑扩展长度<10 3 10<病斑扩展长度≤15 5 15<病斑扩展长度≤20 7 20<病斑扩展长度<25 9 病斑扩展长度>25 5.3病情分级调查 病情指数(DI)按式(1)计算。 Z(sXn) DI X100 NXS (1) 式中： DI 苹果腐烂病病情指数； 各病情级别数值与相对应的各病情级别植株数乘积的总和； 各病情级别数值； n 各病情级别的病斑数； N 调查的总病斑数； S 病情级别的最高数值。 5.4抗病性评价标准 依据试验材料3次重复的病情指数(DI)平均值确定不同苹果资源品种对腐烂病的抗性水平，划分 标准见表2。 表2苹果树腐烂病抗性评价标准 病情指数(DI) 抗性评价 DI=0 免疫(I) 0<D11 高抗(HR) 2 NY/T3344—2019 表2 (续) 病情指数(DI) 抗性评价 11<D33 抗病(R) 33<DI<55 中抗(MR) 55<DI≤77 感病(S) DI>77 高感(HS) 注：对照感病品种富士的病情指数DI>77作为有效性评价的依据。 5.5 鉴定结果报告 相关鉴定结果报告单格式见附录B。 NY/T 3344—2019 附录A （资料性附录） 苹果树腐烂病病原菌 A. 1 学名 苹果树腐烂病菌（ValsamaliMiyabe etYamada） A.2形态描述 RD 病部表面的小 黑点为苹果树腐烂病菌无性态形成的分生 座分为内子座和外子座。外子 高 400μm~960μm。腔室 内壁密生分生孢子 梗，顶牛分 分生孢子梗无色透明 长10 5μm~20.5μm。分 生孢子单胞 香蕉 8~1.7）μm。分生 孢子萌发适温 28℃但在低温主也能萌发菌丝发育最适 2℃，最低为5℃~ 10℃，最高为3 NY/T 3344—2019 附录B (规范性附录 鉴定结果原始记录表 B. 1 鉴定结果记录 苹果品种抗腐烂病鉴定结果原始记录表见表B.1。 表B.1苹果品种抗腐烂病鉴定结果原始记录表 鉴定地点： 接种时间： 调查时间： 不同病级病斑数 编号 品种名称 病情指数 0 1 3 5 7 9 检测人： 校核人： 审核人： 年月 日 年 月 日 年 月 日 B. 2 鉴定结果报告单 苹果品种抗腐烂病鉴定结果报告单见表B.2。 表 B. 2 苹果品种抗腐烂病鉴定结果报告单 报告编号： 第页 共页 编号 品种名称 病情指数（DI) 抗性评价 5