ICS 67.040 X 04 NY 中华人民共和国农业行业标准 NY/T 2820—2015 植物性食品中抑食、虫酰肼、 甲氧虫酰肼、呋喃虫酰肼和环虫酰肼5种 双酰肼类农药残留量的 同时测定液相色谱一质谱联用法 Determination of yishijing tebufenozide, methoxyfenozide, furan tebufeno zide and chromafenozide residues in plant foods- LC-MS-MS method 2015-10-09发布 2015-12-01实施 中华人民共和国农业部 发布 NY/T 2820-2015 前言 本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。 本标准由农业部农垦局提出。 本标准由农业部热带作物及制品标准化技术委员会归口。 本标准起草单位：农业部热带农产品质量监督检验测试中心 本标准主要起草人：罗金辉、刘春华、阳辛凤、乐渊、张群。 I NY/T 2820—2015 植物性食品中抑食、虫酰肼、甲氧虫酰肼、呋喃虫酰和环虫酰 肼5种双酰肼类农药残留量的同时测定液相色谱一质谱联用法 1 范围 本标准规定了植物性食品中的抑食肼、虫酰肼、甲氧虫酰肼、喃虫酰肼和环虫酰肼共5种双酰肼 类农药的液相色谱一质谱联用测定方法。 本标准适用于植物性食品中的抑食肼、虫酰肼、甲氧虫酰肼、呋喃虫肼和环虫酰肼共5种双酰肼 类农药的检测。 本标准抑食肼、虫酰肼、甲氧虫酰肼、呋喃虫酰肼和环虫酰肼共5种双酰肼类农药残留的方法定量 限均为：0.01mg/kg。 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。 GB2763一2014食品安全国家标准食品中农药最大残留限量 GB/T6379.2测量方法与结果的准确度（正确度与精密度）第2部分：确定标准测量方法重复 性与再现性的基本方法（GB/T6379.2—2004,ISO5725-2：1994,IDT) GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 GBT8855新鲜水果和蔬菜的取样方法（GB/T8855-2008，ISO874:1980,IDT） SN/T3592实验室化学药品和样品处理的标准指南 3原理 试样用乙睛匀浆提取，氨基固相萃取小柱净化，用二氯甲烷十甲醇（95十5)洗脱农药，液相色谱一质 谱联用法测定，外标法定量。 4试剂和材料 除非另有说明，在分析中仅使用确认的色谱纯试剂和GB/T6682中规定的一级水。 4.1甲醇。 4.2乙腈。 4.3二氯甲烷。 4.4甲酸。 4.5氯化钠，140℃烘烤4h。 4.6洗脱液：甲醇+二氯甲烷=5+95(V+V)。 4.7固相萃取柱，氨基柱（Aminopropyl?），容积6mL，填充物500mg。 4.8滤膜,孔径0.22μm,有机相。 4.9农药标准品 4. 9. 1抑食肼标准物质(yishijing):CisHzON2O2,CAS No.112225-87-3,纯度≥94. 0%。 4.9.2甲氧虫酰肼标准物质(methoxyfenozide):C22H2gN2O3,CAS No.112225-87-3,纯度≥98.0%。 1 NY/T 28202015 4.9.3环虫酰肼标准物质（chromafenozide）：C2:H3oN2O3，CASNo.143807-66-3纯度≥99.0%。 4.9.4呋喃虫酰肼标准物质（furantebufenozide)：C2H;ONzO3，CASNo.467427-81~1，纯度≥ 99.5%. 4.9.5虫酰肼标准物质(tebufenozide):C22 H2sN2O23,CAS No.112410-23-8,纯度≥99.0%。 4.10农药标准溶液配制 4.10.1单一农药标准溶液 分别准确称取一定量（精确至0.1mg)抑食肼、虫酰肼、甲氧虫酰肼、呋喃虫酰耕和环虫酰肼农药标 准品，用甲醇溶解，逐一配制成1000mg/L的单一农药标准储备液，贮于一18℃以下冰箱中，有效期6 个月。 4.10.2混合农药标准溶液 逐一吸取一定体积的单个农药储备液分别注人同一容量瓶中，用甲醇稀释至刻度配制成100mg/L 混合农药标准储备溶液，贮于一18℃以下冰箱中，有效期3个月。 4.10.3基质混合标准工作液 mg/L、0.10mg/L、0.20mg/1.、0.50mg/L浓度的5种双酰肼类农药基质混合标准工作液，贮于4℃以 下冰箱中，有效期1周。 5仪器与设备 5.1液相色谱一串联质谱仪：配有电喷雾离子源(ESI)。 5.2旋转蒸发仪。 5.3匀浆机。 5.4涡旋混合器。 5.5电子天平。 5.6食品加工器。 6分析步骤 6.1试样制备 按GB/T8855抽取样品，按SN/T3592和GB2763一2014附录A中规定的方法处理样品。经缩 分后，将其切碎，充分混匀放人食品加工机粉碎，制成试样，标明标记，放人分装容器中于一18℃下保存。 备用。 6.2试样前处理过程 6.2.1提取 6.2.1.1蔬菜、水果、食用菌类 称取试样25g（精确至0.01g）于150mL烧杯中，加入50.0mL乙睛后，在匀浆机中高速匀浆2min （韭菜除外，超声10min）后用带有滤纸的玻璃漏斗过滤，滤液收集到装有5g～7g氯化钠的100mL具 塞量筒中，收集滤液40mL～50mL，盖上塞子，剧烈震荡2min，在室温下静置30min，使乙睛相和水相 分层。从100mL具塞量筒中准确吸取10.00mL乙腈溶液于50mL圆底烧瓶中，40℃水浴真空旋转蒸 发近干，加人4.0mL洗脱液（4.6)溶解残渣，待净化。 6.2.1.2谷物、茶叶、香辛料 称取试样5g（精确至0.01g）于50mL锥形瓶中，加人20.0mL乙睛，超声30min后用带有滤纸的 玻璃漏斗过滤，滤液收集到100mL圆底烧瓶中，再用10.0mL乙腈洗锥形瓶2次，合并提取液过滤于 2 NY/T 2820—2015 100mL圆底烧瓶中，40℃水浴真空旋转蒸发近干，加人4.0mL洗脱液（4.6）溶解残渣，待净化。 6.2.1.3油料 称取试样10g（精确至0.01g）于100mL具塞量筒中，加入20.0mL乙睛，超声30min后，剧烈震 荡2min，在室温下静置分层。从100mL具塞量筒中准确吸取10.00mL乙腈溶液，放入50mL圆底烧 瓶中，40℃水浴真空旋转蒸发近干，加入4.0mL洗脱液（4.6)溶解残渣，待净化。 6.2.2净化 将氨基柱用4.0mL洗脱液（4.6)预洗条件化，当溶剂液面到达柱吸附层表面时，立即加人上述待净 化溶液，用50mL圆底烧瓶收集洗脱液，用4.0mL洗脱液（4.6)洗残渣后淋洗氨基柱，并重复2次。将 洗脱液40℃水浴真空旋转蒸发近干，用甲醇定容至5.00mL，过0.22um滤膜，待测。 6.3液相色谱一质谱联用测定 6.3.1色谱参考条件 a） 色谱柱:Cis柱,100mmX2.1mm，1.7μm; b） 流动相A为含0.1%甲酸水溶液；B为乙睛；梯度洗脱条件见表1； c) 柱温：35℃； d) 进样体积：5uL； e) 离子源类型：ESI； 扫描方式：正离子扫描； g) 检测方式：多反应监测； h) 毛细管电压：3.0kV； 离子源温度：110℃； j）去溶剂气温度：350℃； 去溶剂气流量：900L/h； 锥孔反吹气流量：50L/h； m) 碰撞气（He）流速：0.21mL/min; n) 蓝测离子对、碰撞气能量和去簇电压见表A.1。 表1梯度洗脱条件 时间,min 流速，mL/min 流动相A，% 流动相B,% 0. 0 0. 25 90 10 1. 0 0. 25 40 60 4. 5 0. 25 40 60 5. 0 0. 25 25 75 6. 5 0. 25 25 75 7. 5 0. 25 .90 10 8. 5 0. 25 90 10 6.3.2定性测定 在相同条件下进行样品测定时，如果检出的色谱峰保留时间与标准品相一致，并且在扣除背景后的 样品谱图中，所选择的离子均出现，而且所选择的离子丰度比与标准样品的离子丰度比相一致（相对丰 度>50%，允许士20%偏差；相对丰度>20%，允许土25%偏差；相对丰度>10%，允许士30%偏差；相对 丰度≤10%，允许士50%偏差），即可判断为检出。 6.3.3定量测定 采用外标法一标准曲线法定量测定，为减少基质对定量测定的影响，定量应采用基质混合标准溶液 绘制标准曲线，并且保证所测样品中农药的相应值均在仪器的线性范围内。5种农药总离子流图见图 3 NY/T 2820-2015 B.1.多反应监测(MRM)色谱图见图C.1。 6.3.4平行试验 按以上步骤对同一试样进行平行试验。 6.3.5空白试验 除不称取试样外，均按上述步骤进行。 7结果计算 采用标准曲线法定量，结果按式（1）计算。 Vi XVs X=X (1) VzXm 式中： X: 试样中被测组分含量，单位为毫克每千克（mg/kg）； Ci 标准溶液中各双酰肼类农药的质量浓度，单位为毫克每升（mg/L）； Vi 提取溶液总体积，单位为毫升（mL）； V2 吸取出用于检测用的提取溶液的体积，单位为毫升（mL）； V: 试样溶液定容体积，单位为毫升（mL）； m 试样的质量，单位为克（g）。 计算结果保留两位有效数字，当结果大于1mg/kg时保留三位有效数字。 8精密度 按GB/T6379.2的规定确定精密度，获得重复性和再现性的值以95%的可信度来计算。精