ICS 67.080.10 B 31 NY 中华人民共和国农业行业标准 NY/T 2796—2015 水果中有机酸的测定 离子色谱法 Determination of organic acid in fruits-Ion chromatography 2015-05-21发布 2015-08-01实施 中华人民共和国农业部 发布 NY/T 2796--2015 前言 本标准按照GB/T1.1--2009给出的规则起草。 本标准由农业部加工局提出。 本标准由农业部农产品加工标准化技术委员会归口。 本标准起草单位：农业部果品及苗木质量监督检验测试中心（郑州）、中国农业科学院郑州果树研 究所。 本标准主要起草人：方金豹、庞荣丽、谢汉忠、郭琳琳、李君、罗静、黄玉南。 I NY/T 2796—2015 水果中有机酸的测定离子色谱法 1范围 本标准适用于新鲜水果中有机酸（柠檬酸、苹果酸、酒石酸和琥珀酸）含量的测定。 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 GB/T8855新鲜水果和蔬菜取样方法 3原理 试样经乙醇溶液超声提取过滤后，用离子色谱柱进行分离，用离子色谱仪一电导检测器测定，以保 留时间定性，标准曲线法定量。 4试剂和材料 除非另有说明，在分析中仅使用优级纯或以上试剂，实验用水符合GB/T6682的一级水指标。 4.1试剂的配制 4.1.1无水乙醇(C2H.O)。 4.1.2硫酸(H2SO4）。 4.1.3乙醇溶液(1+9)：量取100mL无水乙醇与900mL水混匀。 4.1.4硫酸溶液I（0.5mol/L）：准确吸取13.6mL硫酸，缓缓注人事先加有200mL水的烧杯中，混 匀并冷却后转移到500mL容量瓶中，用水定容。 4.1.5硫酸溶液IⅡ（0.005mol/L)：准确吸取0.5mol/L硫酸溶液I（4.1.4)10mL于1000mL容量 瓶中，用水稀释，用水定容。 4.1.6氯化锂溶液（0.1mol/L）：称取2.12g氯化锂于50mL烧杯中，用水溶解，转移到500mL容量 瓶中，用水定容。 4.2标准品 4.2.1柠檬酸标准品（纯度≥99.0%）。 4.2.2苹果酸标准品（纯度≥99.0%）。 4.2.3酒石酸标准品（纯度≥99.0%）。 4.2.4琥珀酸标准品（纯度≥99.0%）。 4.3标准储备液 4.3.1柠檬酸标准储备液（4.00g/L）：准确称取0.4000g柠檬酸（干燥器中干燥24h）于100mL烧杯 中，用水溶解，转移到100mL容量瓶中，用水定容。在0℃～5℃下保存，有效期3个月。 中，用水溶解，转移到100mL容量瓶中，用水定容。在0℃～5℃下保存，有效期3个月。 1 NY/T 2796-—2015 4.3.3酒石酸标准储备液（2.00g/L）：准确称取0.2000g酒石酸（干燥器中干燥24h）于100mL烧杯 中，用水溶解，转移到100ml容量瓶中，用水定容。在0℃～5℃下保存，有效期3个月。 4.3.4琥珀酸标准储备液（1.00g/L）：准确称取琥珀酸0.1000g（干燥器中干燥24h）于100mL烧杯 中，用水溶解，转移到100ml容量瓶中，用水定容。在0℃～5℃下保存，有效期3个月。 4.4标准工作溶液：分别准确吸取0.00mL、1.00mL、2.00mL、3.00mL、4.00mL、5.00mL有机酸标 准储备液（4.3），于50mL容量瓶中，用乙醇溶液（4.1.3)稀释定容，即得有机酸混合系列标准工作溶液。 0. 00 g/ L、0. 02 g/ L、0. 04 g/ L、0. 06 g/ L.0. 08 g/ L,0. 10 g/ L. 5仪器和设备 5.1离子色谱仪：配电导检测器。 5.2分析天平：感量±0.01g、±0.001g和士0.0001g。 5.3组织捣碎机。 5.4超声波提取器。 5.5溶剂过滤器：0.45um水性滤膜。 5.6针头过滤器：0.22um水性滤膜。 6分析步骤 6.1试样制备 按照GB/T8855的规定抽取水果样品，取可食部分，经缩分后，将其切碎，充分混匀后放入组织捣 碎机中制成匀浆。将匀浆后的试样取500g装人样品瓶中冷冻保存。 6.2提取和净化 称取试样2.0g～5.0g（精确至0.001g）于150ml.三角瓶中，加人约80mL乙醇溶液（4.1.3），摇 0.22um水性滤膜针头过滤器，供离子色谱分析用。 6.3仪器参考条件 6.3.1离子色谱柱：ICSepCOREGEL-64H,7.8mm×300mm，或其他性能相当的色谱柱。 6.3.2柱温：65℃。 6.3.3流速：0.60mL/min。 6.3.4进样体积：20uL。 6.3.5淋洗液：硫酸溶液Ⅱ（4.1.5），临用前过溶剂过滤器。 6.3.6抑制器再生液：浓度为0.1mol/L的氯化锂溶液（4.1.6），临用前过溶剂过滤器。 6.4标准工作曲线 将有机酸混合系列标准工作溶液（4.4)经0.22um水性滤膜针头过滤器过滤后按6.3进行测定。 以质量浓度为横坐标，以峰高或峰面积为纵坐标，绘制标准曲线。有机酸标准溶液色谱图参见附录A。 6.5测定 在相同工作条件下，以保留时间定性，以峰高或峰面积比较定量。试样溶液中柠檬酸、酒石酸、苹果 酸和琥珀酸峰高或峰面积超过有机酸混合标准工作溶液最高点时，则将待测液稀释后重新测定。 6.6空白试验 除不加试样外，其他步骤同试样操作步骤进行。 2 NY/T2796—2015 7结果计算 试样中柠檬酸、酒石酸、苹果酸和琥珀酸的含量以质量分数计，数值以克每千克（g/kg）表示，按 式(1)计算。 mX1000 (1) 式中： 一待测液中柠檬酸、酒石酸、苹果酸和琥珀酸的质量浓度，单位为克每升（g/L）； d 试剂空白液中柠檬酸、酒石酸、苹果酸和琥珀酸的质量浓度，单位为克每升（g/L）； V一一待测液定容体积，单位为毫升（mL）； m一一试样质量，单位为克（g）。 若待测液经过稀释，则计算时加人稀释倍数，计算结果保留三位有效数字。 8精密度 8.1重复性 在重复性条件下获得的两次独立测试结果的绝对差值不大于这两次测定值的算术平均值的10%。 8.2再现性 在再现性条件下获得的两次独立测试结果的绝对差值不大于这两次测定值的算术平均值的10%。 9其他 本标准方法线性范围：柠檬酸0.0003g/L～0.40g/L、苹果酸0.0002g/L～0.20g/L、酒石酸 0.0002g/L~0.20g/L、琥珀酸0.0003g/L~0.10g/L。 本标准方法检出限：柠檬酸、苹果酸、酒石酸和琥珀酸检出限均为0.006g/kg。 3 NY/T 27962015 附录 A （资料性附录） 柠檬酸、酒石酸、苹果酸和琥珀酸混合标准溶液色谱图 柠檬酸、酒石酸、苹果酸和琥珀酸混合标准溶液色谱图见图A.1。 μS/cm 60 40 30 20 101 Cond 0 1 2 3 5 8 9 10 11 12 13 14 15 min 说明： -柠檬酸； 3- 苹果酸； 酒石酸； 琥珀酸。 2- 4- 图A.10.16g/L柠檬酸、0.08g/L酒石酸、0.08g/L苹果酸、0.04g/L琥珀酸混合标准溶液色谱图 4 NY/T 27962015 附录 A （资料性附录） 柠檬酸、酒石酸、苹果酸和琥珀酸混合标准溶液色谱图 柠檬酸、酒石酸、苹果酸和琥珀酸混合标准溶液色谱图见图A.1。 μS/cm 60 40 30 20 101 Cond 0 1 2 3 5 8 9 10 11 12 13 14 15 min 说明： -柠檬酸； 3- 苹果酸； 酒石酸； 琥珀酸。 2- 4- 图A.10.16g/L柠檬酸、0.08g/L酒石酸、0.08g/L苹果酸、0.04g/L琥珀酸混合标准溶液色谱图 4