ICS 65.020.01 B 05 NY 中华人民共和国农业行业标准 NY/T 2545—2014 植物性农产品中黄曲霉毒素 现场筛查技术规程 Technical regulation for on-site screening aflatoxin in plant products 2014-03-24 发布 2014-06-01实施 中华人民共和国农业部 发布 NY/T 2545—2014 前言 本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。 本标准由农业部种植业管理司提出并归口。 本标准起草单位：中国农业科学院油料作物研究所、农业部油料及制品质量监督检验测试中心。 本标准主要起草人：李培武、张奇、姜俊、丁小霞、张文、周海燕、唐晓倩、王督、张兆威。 NY/T 2545—2014 植物性农产品中黄曲霉毒素现场筛查技术规程 1范围 本标准规定了植物性农产品(谷物、豆类、坚果及籽类)中黄曲霉毒素现场筛查的技术规程。 本标准适用于植物性农产品（谷物、豆类、坚果及籽类)生产、收获、储藏、运输过程控制中黄曲霉毒 素的现场筛查。 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 3试剂 除非另有规定，仅使用分析纯试剂。 3.1水：符合GB/T6682要求的二级。 3.2 甲醇(CH;OH)。 3.3二氯甲烷(CH2Cl2）。 3. 4 蔗糖(Ci2H22On)。 3.5牛血清白蛋白(BSA)，纯度大于98%。 3. 6吐温 20(Css H114O26)。 3.770%甲醇溶液：取70mL甲醇（3.2)和30mL水（3.1),混匀。 3.8样品稀释液：取1.0g蔗糖（3.4）、0.5g牛血清白蛋白（3.5)和2.5g吐温20（3.6），溶解于100mL 水（3.1)中。 108L/mol。黄曲霉毒素 B抗体与黄曲霉毒素 B2、黄曲霉毒素 Gi、黄曲霉毒素 G²交叉反应率小于 10%。 3.101000ng/mL黄曲霉毒素B,标准溶液。 3.11100ng/mL黄曲霉毒素B标准储备液：准确吸取黄曲霉毒素B标准溶液（3.10)1.0mL于10 mL容量瓶中，甲醇定容。一20℃保存，备用 4仪器设备与材料 4.1时间分辨荧光检测仪：激发波长（365士5)nm，检测波长（615士5)nm。 4.2黄曲霉毒素荧光免疫层析装置：固定有黄曲霉毒素-BSA偶联物，检测灵敏度不低于0.1μg/ kg，用于样品中黄曲霉毒素与销标记抗体预反应后再与黄曲霉毒素-BSA偶联物反应的载体（图1）。 1 NY/T 2545—2014 正视图 说明： 一底板； 样品垫； 一吸水垫 质控线； 3——硝酸纤维素 示音 4. 2.1 黄曲霉毒 4.2.2样品垫 4.2.3硝酸纤维 4.2.4吸水纸 4.2.5底板。 4. 2. 6 连接胶带。 4.3均质机。 4. 4 分析天平：感量0.01g。 4. 5 恒温装置（37.0±2.0)℃。 4. 6 漩涡混合器。 4. 7 微量移液器：10μL～100μL、100μL～1000μL 4.8 有机相滤膜：0.45μm。 4. 9 中速定性滤纸。 4. 10 烧杯：150mL。 4.11 离心管：5mL。 5 抽样 5. 1 一般要求 2 NY/T 2545—2014 5.1.1人员 抽样人员应熟知抽样程序和方法。 5.1.2抽样工具和包装容器 抽样人员应根据不同的产品准备相应的工具和包装容器。抽样工具和包装容器应清洁、干燥，不会 对样品造成污染。 5.2抽样方法 5.2.1田间种植环节抽样 根据抽样地块内的地形、地势及作物的分布情况合理布设抽样点，可按对角线法、梅花点法、棋盘式 法、蛇形法等多点取样，每个抽样单元内抽样点不少于5个，每个抽样点面积为1m²，随机抽取抽样点内 的农产品。样品应充分混匀 5.2.2收获晾晒环节抽木 、梅花点法、棋盘式法、蛇形 法等多点取样,每个 抽样单 元 元内抽样 不应少于 产品 5.2.3储藏环节抽样 设点.按农产品堆场 度分层取样。 分区 不超过50m²，各 区设中心、四角 取样点， 区数在两个和两个以 五个 上的，两区界限上的两个 粮 良堆边缘的点设 在距边缘约50 分层 层堆高在2m以下的，分上下两层：堆高在2m cm 上、 中、下三层，上 层在堆面下10cm 20cm处，中层在堆中间下层在距底部20cm处；堆高在 ARCH 应分四层；堆 高在5m以上 5.2.4运输环节 参照5.2. 羊品具有代 况·确保抽取日 5.3分样与制木 抽样量应 样： 取食 先脱 部分，粉碎，备用。 EN 6黄曲霉毒素现场 筛查 6.1准确称取 9 mm 190 甲醇溶液（3.7）， 用均质机（4.3)提） 速 mL烧杯中。 6.2 取1.0mL滤液( (4.8)过滤，滤液收集 于5mL离心管中。 6.3取150μL铕标记黄曲霉毒素B,抗体溶液（3.9） 于1.5mL样品瓶中 用。 6.4取滤液（6.2)200μL,垂直滴加 于样品瓶（6.3)内，处置于漩涡混 器(4.6)混匀。取出黄曲霉毒素 荧光免疫层析装置（4.2），按箭头方向插人样品 将样品瓶置于恒温装置（4.5)内反应8min,取出黄 曲霉毒素免疫层析装置，上机（4.1）检测。 6.5标准曲线 6.5.1空白基质溶液：取阴性样品，按6.1、6.2制备空白基质溶液。 6.5.2取黄曲霉毒素B标准储备液（3.11)用空白基质溶液（6.5.1)配制标准工作溶液（0.00ng/mL、 0.05ng/mL、0.10ng/mL、0.20ng/mL、0.50ng/mL、1.00ng/mL、2.50ng/mL),按6.4检测,根据检 测线T信号值与质控线C信号值的比值(T/C)和标准溶液浓度的自然对数值(lnc)建立标准曲线。 7 结果计算 7.1结果计算与表示 3 NY/T 2545—2014 试样中黄曲霉毒素B含量按式(1)计算。计算结果保留至小数点后1位 pXVXn X= (1) m 式中: X 黄曲霉毒素B含量,单位为微克每千克（μg/kg）； 从标准曲线上查得的测定液中黄曲霉毒素Bi含量的数值,单位为纳克每毫升（ng/mL)； V 样品测定液体积的数值，单位为毫升（mL）； n 试样稀释倍数的数值； m 试样质量的数值，单位为克（g）。 7. 2 2重复性 在重复性条件下,黄曲霉毒素 Bi含量不大于5.0 μg/kg时，两次独立测定结果的绝对差值不得超 算术平均值的15%。 8现场筛查结果确认 玉米、花生黄曲霉毒素B筛查结果大于18ug/kg,或稻谷、糙米、大米中黄曲霉毒素Bi筛查结果大 于8μg/kg,或小麦、大麦、其他谷物、豆类及制品、其他熟制坚果及籽类中黄曲霉毒素B,筛查结果大于 4μg/kg时，建议采用免疫亲和液相色谱法或免疫亲和液质联用法进行结果确认。 中华人民共和国 农业行业标准 植物性农产品中黄曲霉毒素 现场筛查技术规程 NY/T2545—2014 * * * 中国农业出版社出版 (北京市朝阳区麦子店街18号楼） （邮政编码：100125 网址：www.ccap.com.cn) 北京昌平环球印刷厂印刷 新华书店北京发行所发行各地新华书店经销 * * * 开本880mmX1230mm1/16 印张0.75 字数15千字 2014年6月第1版 2014年6月北京第1次印刷 书号：1 16109·3235 定价：18.00元 版权专有 侵权必究 举报电话：（010）65005894 NY/T 2545-2014