ICS65.140 B47 中华人民共和国国家标准 GB/T32947—2016 蜂蜡中二十八烷醇、三十烷醇的测定 气相色谱法 Determinationofoctacosanolandtriacontanolcontentsinbeeswax— Gaschromatography 2016-08-29发布 2017-03-01实施 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 中国国家标准化管理委员会发布前 言 本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。 本标准由中华全国供销合作总社提出。 本标准由全国蜂产品标准化工作组归口。 本标准起草单位:中国农业科学院蜜蜂研究所、农业部蜂产品质量监督检验测试中心(北京)、中国 养蜂学会。 本标准主要起草人:李熠、薛晓锋、黄京平、吴杰、吴黎明、赵静、张金振、周金慧、陈芳、王鹏、陈兰珍。 ⅠGB/T32947—2016 蜂蜡中二十八烷醇、三十烷醇的测定 气相色谱法 1 范围 本标准规定了蜂蜡中二十八烷醇、三十烷醇含量的测定方法。 本标准适用于蜂蜡中二十八烷醇、三十烷醇含量的测定。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件,仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。 GB/T6682 分析实验室用水规格和试验方法 3 原理 试样经回流水解后,用三氯甲烷提取样品中的二十八烷醇、三十烷醇,提取液经无水硫酸钠干燥净 化,气相色谱火焰离子化检测器检测,外标法定量。 4 试剂与材料 4.1 除非另有说明,均使用分析纯试剂,水为GB/T6682规定的一级水。 4.2 氢氧化钾。 4.3 无水硫酸钠。使用前650℃灼烧4h。 4.4 三氯甲烷。 4.5 95%乙醇。 4.6 0.5mol/L的氢氧化钾乙醇溶液;称取2.8g氢氧化钾,用100mL95%乙醇溶解于塑料瓶中,常温 密封保存。 4.7 二十八烷醇、三十烷醇标准品:纯度≥98%。 4.8 二十八烷醇、三十烷醇标准储备液:分别称取20mg二十八烷醇、三十烷醇标准品,精确至0.1mg, 放入100mL容量瓶中,加三氯甲烷超声波溶解后定容。常温密封保存。 4.9 二十八烷醇、三十烷醇标准工作溶液:准确吸取标准储备液0.50mL、1.00mL、2.50mL、5.00mL、 10.00mL于10mL容量瓶,用三氯甲烷配制成10.0mg/L、20.0mg/L、50.0mg/L、100.0mg/L、 200.0mg/L的标准工作溶液。常温密封保存。 5 仪器设备 5.1 气相色谱仪:配有火焰离子化检测器(FID)。 5.2 超低温冰箱。 5.3 高速粉碎研磨仪。 1GB/T32947—2016 5.4 分析天平:感量0.1mg和0.001g。 5.5 旋转蒸发仪。 5.6 回流装置。 5.7 超声波清洗器。 5.8 滤膜:有机系,0.45μm。 6 试样制备与保存 6.1 试样的制备 取样品200g置于超低温冰箱中(-18℃),1h后取出,用粉碎机研磨成粉状,置于样品瓶中,密封 标记。 6.2 试样的保存 将试样置于密封袋中,-18℃冷冻保存。 7 测定步骤 7.1 提取 称取均匀的试样0.25g,精确至0.001g,置于150mL锥形瓶中,加入20mL氢氧化钾溶液,水浴 90℃回流2h,60℃旋转蒸发去除乙醇后,加入50mL三氯甲烷溶解残渣,并将溶液全部转移至透明 玻璃离心管中,加入30mL水,漩涡振荡1min,静置,除去上层液体,再重复用30mL水清洗两次后, 将有机相转移至100mL容量瓶中,并用三氯甲烷定容。测定前,取10mL溶液用10g无水硫酸钠干 燥,用0.45μm微孔滤膜过滤,待气相色谱测定。 7.2 气相色谱条件 气相色谱条件参考以下参数: a) 色谱柱:(5%-苯基)-甲基聚硅氧烷30m×0.25mm(内径)×0.25μm或相当者; b) 柱温:200℃保持1min,以5℃/min的速率升温到320℃,保持10min; c) 进样口温度:320℃; d) 检测器温度:340℃; e) 载气:氮气(N2),纯度≥99.99%; f) 燃气:氢气(H2),纯度≥99.99%; g) 柱流速:1.0mL/min; h) 氢气流速:30mL/min; i) 空气流速:300mL/min; j) 不分流进样:2μL。 7.3 气相色谱测定 取适量试样溶液和相应的标准工作溶液注入气相色谱仪分析,以其标准溶液峰的保留时间为定性 依据,以其色谱峰面积值定量测定样品中二十八烷醇、三十烷醇的含量。标准工作液及试样液中的响应 值均应在仪器检测的线性范围之内。标准溶液和试样溶液的气相色谱图参见附录A。 2GB/T32947—2016 8 结果计算 试样中二十八烷醇、三十烷醇的含量按式(1)计算: x=c×V×10-3 m×100 ………………………………(1) 式中: x———试样中二十八烷醇、三十烷醇的质量百分比含量,%; c———从标准曲线中得到的被测组分的浓度,单位为毫克每升(mg/L); V———试样溶液定容体积,单位为升(L); m———试样的质量,单位为克(g)。 测定结果取其两次测定的算术平均值,计算结果保留三位有效数字。 9 检测限、回收率范围和精密度 本标准中二十八烷醇的定量检测限为0.20%,三十烷醇的定量检测限为0.32%。 蜂蜡样品中添加浓度及回收率的范围的试验数据(n=6)如下: a) 二十八烷醇在1%~5%三个水平,添加的回收率范围为89.0%~102%,相对标准偏差(RSD) 为1.64%~5.04%; b) 三十烷醇在2%~10%三个水平,添加的回收率范围为86.5%~110.2%,相对标准偏差(RSD) 为1.81%~3.66%。GB/T32947—2016 GB/T32947—2016 附 录 A (资料性附录) 标准溶液色谱图 标准溶液色谱图见图A.1。 图A.1 二十八烷醇、三十烷醇的标准溶液色谱图(标准浓度100mg/L)