书 书 书犐犆犛 ７１ ． １００ ． ７０ 犢 ４２ 　 中华人民共和国国家标准 犌犅 ／ 犜 ２２７２８ — ２００８ 化妆品中丁基羟基茴香醚 （ 犅犎犃 ） 和 二丁基羟基甲苯 （ 犅犎犜 ） 的测定 高效液相色谱法 犇犲狋犲狉犿犻狀犪狋犻狅狀狅犳犫狌狋狔犾犪狋犲犱犺狔犱狉狅狓狔犪狀犻狊狅犾犲 （ 犅犎犃 ） 犪狀犱 犫狌狋狔犾犪狋犲犱犺狔犱狉狅狓狔狋狅犾狌犲狀犲 （ 犅犎犜 ） 犻狀犮狅狊犿犲狋犻犮狊 — 犎犻犵犺狆犲狉犳狅狉犿犪狀犮犲犾犻狇狌犻犱犮犺狉狅犿犪狋狅犵狉犪狆犺狔 ２００８  １２  ３１ 发布 ２００９  ０８  ０１ 实施 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 中国国家标准化管理委员会 发布书 书 书前 　　 言 　　 本标准的附录 Ａ 为资料性附录 。 本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口 。 本标准起草单位 ： 中国检验检疫科学研究院 。 本标准主要起草人 ： 陈会明 、 郝楠 、 于文莲 、 周新 、 白桦 、 刘娟 、 卢加文 。 Ⅰ 犌犅 ／ 犜 ２２７２８ — ２００８ 化妆品中丁基羟基茴香醚 （ 犅犎犃 ） 和 二丁基羟基甲苯 （ 犅犎犜 ） 的测定 高效液相色谱法 １ 　 范围 本标准规定了化妆品中丁基羟基茴香醚 （ ＢＨＡ ） 和二丁基羟基甲苯 （ ＢＨＴ ） 的液相色谱测定方法 。 本标准适用于固体 、 膏状和液体化妆品中丁基羟基茴香醚 （ ＢＨＡ ） 和二丁基羟基甲苯 （ ＢＨＴ ） 的 测定 。 本标准的方法检出限 ： 丁基羟基茴香醚 （ ＢＨＡ ）、 二丁基羟基甲苯 （ ＢＨＴ ） 均为 ０．００５％ 。 ２ 　 原理 用甲醇超声提取化妆品中的 ＢＨＡ 、 ＢＨＴ ， 离心分离 ， 取上清液过滤 ， 滤液经配有紫外检测器的高效 液相色谱仪检测 ， 外标法定量 。 ３ 　 试剂与材料 除另有说明外 ， 所有试剂均为分析纯 ， 水为二次去离子水或重蒸水 。 ３ ． １ 　 甲醇 优级纯或者色谱纯 。 ３ ． ２ 　 标准品 ＢＨＡ ， 纯度不小于 ９８％ （ 其中 ３ＢＨＡ ， 纯度不小于 ９０％ ； ２ＢＨＡ ， 纯度不大于 ８％ ）； ＢＨＴ ， 纯度不小 于 ９９％ 。 ３ ． ３ 　 标准储备液 ＢＨＡ 的标准储备液 ： 准确称取 ＢＨＡ 标准品 ０．１ｇ ， 精确至 １ｍｇ ， 用甲醇溶解后转移至 １００ｍＬ 容 量瓶中 ， 甲醇定容 ， 振荡均匀 ， 即得 ＢＨＡ 质量浓度为 １０００ μ ｇ ／ ｍＬ 的标准储备液 。 ＢＨＴ 的标准储备液 ： 准确称取 ＢＨＴ 标准品 ０．１ｇ ， 精确至 １ｍｇ ， 用甲醇溶解后转移至 １００ｍＬ 容 量瓶中 ， 甲醇定容 ， 振荡均匀 ， 即得 ＢＨＴ 质量浓度为 １０００ μ ｇ ／ ｍＬ 的标准储备液 。 ４ 　 仪器 ４ ． １ 　 高效液相色谱仪 ： 配紫外检测器 。 ４ ． ２ 　 超声波清洗器 。 ４ ． ３ 　 高速离心机 ： 不小于 １５０００ｒ ／ ｍｉｎ 。 ４ ． ４ 　 注射式样品过滤器 ： 配有有机相滤膜 ， 滤膜孔径 ０．４５ μ ｍ 。 ４ ． ５ 　 锥形瓶 ： 具磨口塞 ， ５０ｍＬ 。 ４ ． ６ 　 容量瓶 ： １００ｍＬ 、 ２５ｍＬ 。 ５ 　 测定 ５ ． １ 　 试样处理 ５ ． １ ． １ 　 固体 、 膏状化妆品 ： 称取化妆品 ０．５ｇ （ 精确到 １ｍｇ ） 于 ５０ｍＬ 锥形瓶中 ， 加入甲醇 ２５．００ｍＬ ， 超 声提取 ２０ｍｉｎ ， 以 １２０００ｒ ／ ｍｉｎ 高速离心 １５ｍｉｎ ， 上清液过 ０．４５ μ ｍ 滤膜 ， 滤液供测试 。 １ 犌犅 ／ 犜 ２２７２８ — ２００８ ５ ． １ ． ２ 　 液体化妆品 ： 称取液体化妆品 （ 香水 、 爽肤水等 ） ０．５ｇ （ 精确到 １ｍｇ ） 于 ２５ｍＬ 容量瓶中 ， 用甲醇 定容至刻度 ， 充分摇匀 ， 上清液过 ０．４５ μ ｍ 滤膜 ， 滤液供测试 。 ５ ． ２ 　 标准工作曲线的绘制 分别吸取 １０．００ｍＬ 的 ＢＨＡ 和 ＢＨＴ 标准储备液 （ ３．３ ） 于 ５０ｍＬ 容量瓶中 ， 用甲醇定容后摇匀 ， 即 得质量浓度为 ２００ μ ｇ ／ ｍＬ 的混合标准工作溶液 ， 逐级稀释该溶液得到质量浓度为 １００ μ ｇ ／ ｍＬ 、 ５０ μ ｇ ／ ｍＬ 、 ２５ μ ｇ ／ ｍＬ 、 １０ μ ｇ ／ ｍＬ 、 ５ μ ｇ ／ ｍＬ 、 １ μ ｇ ／ ｍＬ 的混合标准工作溶液 ， 供高效液相色谱测定 ， 得出 标准工作曲线 。 ５ ． ３ 　 测定步骤 ５ ． ３ ． １ 　 色谱条件 ａ ） 　 色谱柱 ： Ｃ １８ ， ５ μ ｍ ， ２５０ｍｍ×４．６ｍｍ （ 内径 ） 或相当者 ； ｂ ） 　 流动相 ： 甲醇 ∶ 水 （ １０∶１ ）； ｃ ） 　 流速 ： １．０ｍＬ ／ ｍｉｎ ； ｄ ） 　 检测波长 ： ２７８ｎｍ ； ｅ ） 　 柱温 ： 室温 ； ｆ ） 　 进样量 ： １０ μ Ｌ 。 ５ ． ３ ． ２ 　 高效液相色谱测定 分别准确吸取样品待测液 （ ５．１ ） 及标准工作溶液 （ ５．２ ） 注入高效液相色谱仪 ， 应用 ５．３．１ 规定的色 谱条件进行测定 。 在选定色谱条件下 ， 标准溶液 （ ５．２ ） 按质量浓度由稀至浓顺序依次进样 ， 得到峰面积 与质量浓度的标准工作曲线 。 试样溶液中的 ＢＨＡ 、 ＢＨＴ 的响应值应在标准工作曲线的线性范围内 。 在 ５．３．１ 规定的色谱条件下 ， ＢＨＡ 、 ＢＨＴ 标准物质的保留时间分别为 ３．９２４ｍｉｎ 、 ８．９５５ｍｉｎ 。 ＢＨＡ 和 ＢＨＴ 标准物质的色谱图参见附录 Ａ 中图 Ａ．１ 。 ５ ． ４ 　 空白试验 除不加试样外 ， 均按上述步骤 （ ５．１ ～ ５．３ ） 同时完成空白试验 。 ６ 　 结果计算 结果按式 （ １ ） 计算 ， 计算结果保留到小数点后两位 ， 计算结果需扣除空白值 。 犡 ｉ ＝ 犮 ｉ × 犞 犿 × １０ ６ × １００ ……………………………………（ １ ） 　　 式中 ： 犡 ｉ ——— ＢＨＡ 或 ＢＨＴ 的含量 ， ％ ； 犮 ｉ ——— 标准曲线查得的 ＢＨＡ 或 ＢＨＴ 的质量浓度 ， 单位为微克每毫升 （ μ ｇ ／ ｍＬ ）； 犞 ——— 样品稀释后总体积 ， 单位为毫升 （ ｍＬ ）； 犿 ——— 样品质量 ， 单位为克 （ ｇ ）。 ７ 　 回收率和精密度 添加质量浓度为 ０．０１％ ～ １．００％ 时 ， ＢＨＡ 的回收率为 ９３．６％ ～ １０３．９％ ， 相对标准偏差为 ０．２４％ ～ ２．７０％ ； 添加质量浓度为 ０．０１％ ～ １．００％ 时 ， ＢＨＴ 的回收率为 ９７．５％ ～ １０８．５％ ， 相对标准偏差为 ０．２７％ ～ ２．２９％ 。 ２ 犌犅 ／ 犜 ２２７２８ — ２００８ 附 　 录 　 犃 （ 资料性附录 ） 标准物质色谱图 １ ——— 丁基羟基茴香醚 （ ＢＨＡ ）； ２ ——— 二丁基羟基甲苯 （ ＢＨＴ ）。 图 犃 ． １ 　 犅犎犃 、 犅犎犜 标准物质高效液相色谱图 犌犅 ／ 犜 ２２７２８ — ２００８