书 书 书犐犆犛 １１ ． ０８０ 犆犆犛犆 ５９ 中华人民共和国国家标准 犌犅 ／ 犜 １５９８１ — ２０２１ 代替 犌犅 １５９８１ — １９９５ 消毒器械灭菌效果评价方法 犈狏犪犾狌犪狋犻狀犵犿犲狋犺狅犱犳狅狉狋犺犲犲犳犳犻犮犪犮狔狅犳狊狋犲狉犻犾犻狕犪狋犻狅狀犳狅狉犱犻狊犻狀犳犲犮狋犻狅狀犲狇狌犻狆犿犲狀狋 ２０２１  １２  ３１ 发布 ２０２２  ０７  ０１ 实施 国家市场监督管理总局 国家标准化管理委员会 发布书 书 书前 　　 言 　　 本文件按照 ＧＢ ／ Ｔ１．１ — ２０２０ 《 标准化工作导则 　 第 １ 部分 ： 标准化文件的结构和起草规则 》 的规定起草 。 本文件代替 ＧＢ１５９８１ — １９９５ 《 消毒与灭菌效果的评价方法与标准 》， 与 ＧＢ１５９８１ — １９９５ 相比 ， 主要技术变化如下 ： ——— 修改了适用范围 （ 见第 １ 章 ， １９９５ 年版的第 １ 章 ）； ——— 增加了 “ 术语和定义 ” 一章 （ 见第 ３ 章 ）； ——— 删除了试剂 （ 见 １９９５ 年版的第 ２ 章 ）； ——— 删除了指示菌 （ 见 １９９５ 年版的第 ３ 章 ）； ——— 删除了化学指示剂 （ 见 １９９５ 年版的第 ４ 章 ）； ——— 删除了技术要求 （ 见 １９９５ 年版的第 ５ 章 ）； ——— 修改了压力蒸汽灭菌效果检测方法的内容 ， 改为 “ 试验步骤 ”（ 见 ４．１．２ ， １９９５ 年版的第 ６ 章 ）； ——— 删除了第二篇的内容 （ 见 １９９５ 年版的第 ８ 章 ～ 第 １２ 章 ）； ——— 删除了第三篇的内容 （ 见 １９９５ 年版的第 １３ 章 ～ 第 １７ 章 ）； ——— 增加了消毒器械灭菌效果鉴定试验 （ 见第 ４ 章 ）。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利 。 本文件的发布机构不承担识别专利的责任 。 本文件由中华人民共和国国家卫生健康委员会提出并归口 。 本文件起草单位 ： 中国疾病预防控制中心环境与健康相关产品安全所 、 中国人民解放军疾病预防控制中心 、 江苏省疾病预防控制中心 、 山东省疾病预防控制中心 、 河南省疾病预防控制中心 、 江西省卫生健康监测评价中心 。 本文件主要起草人 ： 张流波 、 李涛 、 王妍彦 、 赵斌秀 、 李新武 、 姚楚水 、 徐燕 、 崔树玉 、 沈瑾 、 张剑 、 刘吉起 、 周玉 。 本文件及其所代替文件的历次版本发布情况为 ： ——— １９９５ 年首次发布为 ＧＢ１５９８１ — １９９５ ； ——— 本次为第一次修订 。 Ⅰ 犌犅 ／ 犜 １５９８１ — ２０２１ 消毒器械灭菌效果评价方法 １ 　 范围 本文件规定了压力蒸汽灭菌器 、 干热灭菌器 （ 柜 ）、 环氧乙烷灭菌器 、 低温蒸汽甲醛灭菌器 、 过氧化氢气体等离子体灭菌器灭菌效果鉴定试验的试验器材 、 试验步骤 、 评价规定以及注意事项 。 本文件适用于压力蒸汽灭菌器 、 干热灭菌器 （ 柜 ）、 环氧乙烷灭菌器 、 低温蒸汽甲醛灭菌器 、 过氧化氢气体等离子体灭菌器灭菌效果的评价 。 ２ 　 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款 。 其中 ， 注日期的引用文件 ， 仅该日期对应的版本适用于本文件 ； 不注日期的引用文件 ， 其最新版本 （ 包括所有的修改单 ） 适用于本文件 。 ＧＢＺ２．１ 　 工作场所有害因素职业接触限值 　 第 １ 部分 ： 化学有害因素 ＷＳ ／ Ｔ６４９ 　 医用低温蒸汽甲醛灭菌器卫生要求 ＷＳ ／ Ｔ６８３ 　 消毒试验用微生物要求 ３ 　 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件 。 ３ ． １ 犇 值 　 犇狏犪犾狌犲 在设定的暴露条件下 ， 杀灭特定试验微生物总数的 ９０％ 所需的时间 。 ３ ． ２ 载体 　 犮犪狉狉犻犲狉 试验微生物的支持物 。 ３ ． ３ 满载 　 犳狌犾犾狔犾狅犪犱犲犱 消毒器械使用时 ， 按厂家说明书规定方式摆放的最大允许装载量 。 ３ ． ４ 灭菌过程挑战装置 　 狆狉狅犮犲狊狊犮犺犪犾犾犲狀犵犲犱犲狏犻犮犲 ； 犘犆犇 专门设计的模拟被灭菌物品 ， 对特定灭菌过程有抗力 ， 用于评价该灭菌过程有效性的装置 。 ４ 　 消毒器械灭菌效果鉴定试验 ４ ． １ 　 压力蒸汽灭菌器灭菌效果鉴定试验 ４ ． １ ． １ 　 试验器材 ４ ． １ ． １ ． １ 　 试验菌片 ： 嗜热脂肪杆菌芽孢 （ ＡＴＣＣ７９５３ 或 ＳＳＩＫ３１ 株 ） 菌片 （ 布片或滤纸片 ）， 回收菌 １ 犌犅 ／ 犜 １５９８１ — ２０２１ 量 ≥ １×１０ ５ ＣＦＵ ／ 片 ， 在 １２１℃±０．５℃ 条件下 ， Ｄ 值 ≥ １．５ｍｉｎ ； 也可采用符合上述要求的自含式生物 指示物 。 ４ ． １ ． １ ． ２ 　 标准生物测试包 ： ２３ｃｍ×２３ｃｍ×１５ｃｍ 的普通棉布包 （ 每 １０ｍｍ 经线数 ３０±６ 、 纬线数 ２７±５ ）， 质量 １．５ｋｇ±０．０４５ｋｇ 。 ４ ． １ ． １ ． ３ 　 通气贮物盒 ： 体积为 ２２ｃｍ×１３ｃｍ×６ｃｍ 。 ４ ． １ ． １ ． ４ 　 满载物品 ： 使用说明书中规定的物品 。 ４ ． １ ． １ ． ５ 　 试剂 ： 磷酸盐缓冲液 （ ＰＢＳ ， 见附录 Ａ 的 Ａ．１ ）； 胰蛋白胨大豆琼脂培养基 （ ＴＳＡ ， 见 Ａ．３ ）； 溴甲酚紫蛋白胨培养液 （ 见 Ａ．４ ）。 ４ ． １ ． ２ 　 试验步骤 试验步骤如下 。 ａ ） 　 将两个菌片装入灭菌小纸袋内 （ 也可直接用生物指示物 ）。 ｂ ） 　 将装好菌片的纸袋或两个嗜热脂肪杆菌芽孢 （ ＡＴＣＣ７９５３ 或 ＳＳＩＫ３１ 株 ） 的自含式生物指示物置于标准测试包中心部位 ， 制成标准生物测试包 （ 也可使用符合 ４．１．１．１ 要求的一次性标准生物测试包 ）。 ｃ ） 　 对下排气压力蒸汽灭菌器 ， 于灭菌器每层中间 、 排气口和近灭菌器门处各放置一个生物测试包 ； 对预真空式压力蒸汽灭菌器 ， 在灭菌器内每层各放置一个标准测试包 ； 对器室容积较小 ， 不能放入标准测试包的压力蒸汽灭菌器 ， 用通气贮物盒代替标准测试包 ， 盒内盛满试管 ， 指示菌片或生物指示物放于中心部位的两支灭菌试管内 （ 试管口用灭菌牛皮纸包封 ）， 将贮物盒平放于压力蒸汽灭菌器底部 。 ｄ ） 　 装入满载物品 ， 满载运行 １ 个灭菌周期 。 灭菌周期结束后 ， 取出指示菌片 ， 投入含 ５．０ｍＬ 溴甲酚紫蛋白胨培养液的试管中 ， 或取出生物指示物 ， 经 ５６℃±２℃ 培养 ７ｄ （ 生物指示物的培养方法按说明书执行 ）， 观察培养基颜色变化 。 检测时以培养基作为阴性对照 ， 以加入指示菌片的培养基作为阳性对照 。 另取两片试验菌片进行回收菌量测定 。 生物指示物的阴性对照和阳性对照的设置方法按说明书操作 。 ｅ ） 　 试验重复 ５ 次 。 ４ ． １ ． ３ 　 评价规定 ４ ． １ ． ３ ． １ 　 判定灭菌器灭菌效果合格需同时满足 ： 每次试验阳性对照培养基颜色变黄 ； 阴性对照培养基颜 色不变 ； 对照菌片的回收菌量 ≥ １×１０ ５ ＣＦＵ ／ 片 ； 试验组颜色不变 。 ４ ． １ ． ３ ． ２ 　 用自含式生物指示物进行评价时 ， 结果判定按说明书进行 。 ４ ． １ ． ４ 　 注意事项 ４ ． １ ． ４ ． １ 　 所用菌片和灭菌生物指示物应在有效期内 。 ４ ． １ ． ４ ． ２ 　 严格遵守无菌操作技术规定 。 ４ ． １ ． ４ ． ３ 　 试验应在满载条件下进行 。 ４ ． １ ． ４ ． ４ 　 严格遵守压力容器操作规程 。 ４ ． １ ． ４ ． ５ 　 若压力蒸汽灭菌器有多种灭菌程序 ， 则每一种灭菌程序均应分别验证 。 ４ ． ２ 　 干热灭菌器 （ 柜 ） 灭菌效果鉴定试验 ４ ． ２ ． １ 　 试验器材 ４ ． ２ ． １ ． １ 　 试验菌片 ： 实验室自用的枯草杆菌黑色变种芽孢悬液和芽孢菌片按 ＷＳ ／ Ｔ６８３ 方法制备 ， 菌片 ２ 犌犅 ／ 犜 １５９８１ — ２０２１ 回收菌量为 ≥ １×１０ ６ ＣＦＵ ／ 片 ， 在温度为 １６０℃±２℃ 的条件下 ， Ｄ 值 ≥ ２．５ｍｉｎ 。 也可采用符合上述要求的自含式生物指示物 。 染菌载体为直径 １２ｍｍ 不锈钢片 ， 或面积为 １０ｍｍ×１０ｍｍ 玻片 ， 必要时增用或改用其他载体 。 ４ ． ２ ． １ ． ２ 　 试剂 ： 磷酸盐缓冲液 （ ＰＢＳ ， 见 Ａ．１ ）； 胰蛋白胨大豆肉汤培养基 （ ＴＳＢ ， 见 Ａ．２ ）； 胰蛋白胨大豆琼脂培养基 （ ＴＳＡ ， 见 Ａ．３ ）。 ４ ． ２ ． １ ． ３ 　 满载物品 ： 使用说明书中规定的物品 。 ４ ． ２ ． ２ 　 试验步骤 试验步骤如下 。 ａ ） 　 每次试验取 ２ 个菌片为一组 ， 平放于无菌平皿内 ， 勿重叠 。 加盖 ， 分别放于灭菌器 （ 柜 ） 内各层 ， 对角线的内 、 中 、 外 ３ 点 ， 相邻层对角线交叉摆放 。 在柜内摆放物品至满载 。 ｂ ） 　 关闭器 （ 柜 ） 门 ， 开启电源 ， 按灭菌器 （ 柜 ） 设计程序时间运行 １ 个周期进行灭菌 。 灭菌完毕 ， 待灭菌器温度自然下降至 ５０℃ 以下 ， 方可打开柜门 。 取出平皿 ， 将菌片取出接种于含 ５．０ｍＬＴＳＢ 试管中 ， 置 ３６℃±１℃ 恒温培养箱内培养 ７ｄ ， 自第 ３ 日起每日观察