(19)中华 人民共和国 国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202111585813.8 (22)申请日 2021.12.20 (71)申请人 广州爱思 迈生物医药 科技有限公司 地址 510000 广东省广州市黄埔区开源大 道11号B10栋5层511房 (72)发明人 张文军　李峰　刘敏　潘志豪　 覃陆英　曹广灿　 (74)专利代理 机构 北京品源专利代理有限公司 11332 代理人 陈小龙 (51)Int.Cl. C07K 16/46(2006.01) C12N 15/13(2006.01) C12N 15/85(2006.01) C12N 5/10(2006.01)A61K 39/395(2006.01) A61K 47/68(2017.01) A61P 35/00(2006.01) (54)发明名称 双特异性 抗体及其应用 (57)摘要 本发明提供了双特异性抗体及其应用， 所述 双特异性抗体含有抗体或抗体片段， 所述抗体或 抗体片段为具有第一重链和第一轻链以及第二 重链和第二轻链的双特异性抗体或抗体片段； 所 述第一重链和第一轻链形成第一Fab区； 所述第 二重链和第二轻链形 成第二Fab区； 所述第一Fab 区和第二Fab区中引入了多种突变。 本申请通过 对所述抗体或抗体片段的重链CH1和轻链CL界面 氨基酸进行氨基酸大小和电荷突变， 增强了针对 不同抗原的重/轻链正确配对， 保持特定抗原的 结合能力， 减少了错配并提高了结合特异性， 提 高了目的产物的产率。 权利要求书5页 说明书31页 序列表88页 附图13页 CN 114106192 A 2022.03.01 CN 114106192 A 1.抗体或抗体片段， 其特征在于， 所述抗体或抗体片段为具有第一重链和第一轻链以 及第二重链和第二轻链的双特异性 抗体或抗体片段； 所述第一重链和第一轻链形成第一Fab区； 所述第二重链和第二轻链形成第二Fab区； 所述抗体或抗体片段的第一Fab区引入以下突变中的任意 一种或至少两种的组合： a)重链恒 定区CH1中的S186A/S186T/S186E/S186Q/S186M/S186D/S186K/S186V/S186W/ S186Y； 和轻链恒定区CL中的T178M /T178Y/T178L/T178I/T178A/T178V/T178 S/T178R/T178E； b)重链恒定区C H1中的S18 8Y/S188M/S188T/S188F/S188V/S188L/S188I/S188R； 和轻链恒定 区CL中的S176M/S176L/S176Y/S176A/S176I/S176E/S176T/S176W/S176H/ S176V； c)重链恒定区C H1中的V190T/V190I/V190W/V190 M/V190Y/V190F/V190L/V190Q/V190S； 和轻链恒定 区CL中的S174F/S174N/S174M/S174A/S174T/S174W/S174R/S174C/S174K/ S174H/S174Y/S174L； 所述抗体或抗体片段的第二Fab区引入以下突变中的任意 一种或至少两种的组合： a)重链恒 定区CH1中的S186A/S186T/S186E/S186Q/S186M/S186D/S186K/S186V/S186W/ S186Y； 和轻链恒定区CL中的T178M /T178Y/T178L/T178I/T178A/T178V/T178 S/T178R/T178E； b)重链恒定区C H1中的S18 8Y/S188M/S188T/S188F/S188V/S188L/S188I/S188R； 和轻链恒定 区CL中的S176M/S176L/S176Y/S176A/S176I/S176E/S176T/S176W/S176H/ S176V； c)重链恒定区C H1中的V190T/V190I/V190W/V190 M/V190Y/V190F/V190L/V190Q/V190S； 和轻链恒定 区CL中的S174F/S174N/S174M/S174A/S174T/S174W/S174R/S174C/S174K/ S174H/S174Y/S174L。 2.根据权利要求1所述的抗体或抗体片段， 其特征在于， 所述抗体或抗体片段的第一 Fab区引入以下突变中的任意 一种： a)重链恒定区C H1中的S186T和轻链恒定区CL中的T178A； b)重链恒定区C H1中的S18 8Y和轻链恒定区CL中的S176 E； c)重链恒定区C H1中的V190F和轻链恒定区CL中的S174A； 或 a)重链恒定区C H1中的S186V和轻链恒定区CL中的T178L； b)重链恒定区C H1中的S18 8L和轻链恒定区CL中的S176W； c)重链恒定区C H1中的V190 M和轻链恒定区CL中的S174R； 或 a)重链恒定区C H1中的S186W和轻链恒定区CL中的T178M； b)重链恒定区C H1中的S18 8F和轻链恒定区CL中的S176V； c)重链恒定区C H1中的V190T和轻链恒定区CL中的S174K； 或 a)重链恒定区C H1中的S186 Y；权　利　要　求　书 1/5 页 2 CN 114106192 A 2b)重链恒定区C H1中的S18 8M和轻链恒定区CL中的S176V； c)重链恒定区C H1中的V190F； 优选地， 所述 抗体或抗体片段的第二Fab区引入以下突变中的任意 一种： a)重链恒定区C H1中的S186 M和轻链恒定区CL中的T178V； b)重链恒定区C H1中的S18 8I和轻链恒定区CL中的S176 H； c)重链恒定区C H1中的V190W和轻链恒定区CL中的S174R； 或 a)重链恒定区C H1中的S186T和轻链恒定区CL中的T178V； b)重链恒定区C H1中的S18 8R； c)重链恒定区C H1中的V190F； 或 a)重链恒定区C H1中的S186K和轻链恒定区CL中的T178E； b)重链恒定区C H1中的S18 8L和轻链恒定区CL中的S176 M； c)轻链恒定区CL中的S174Y； 或 a)重链恒定区C H1中的S186 M和轻链恒定区CL中的T178V； b)重链恒定区C H1中的S18 8I和轻链恒定区CL中的S176 H； c)重链恒定区C H1中的V190W和轻链恒定区CL中的S174R。 3.根据权利要求1或2所述的抗体或抗体片段， 其特征在于， 所述第一Fab区的轻链恒定 区CL还引入突变A178 D， 第二Fab区的重链恒定区C H1还引入突变I18 8D； 优选地， 所述第一Fab区的轻链恒定区CL还引入突变L178K， 第二Fab区的重链恒定区 CH1还引入突变T19 2K； 优选地， 所述 抗体或抗体片段的第一Fab区和第二Fab区引入的突变相同或不同。 4.双特异性抗体， 其特征在于， 所述双特异性抗体含有权利要求1～3任一项所述的抗 体或抗体片段； 优选地， 所述双特异性抗体轻链恒定区CL各自独立地选自以下序列中的任意一种： SEQ   ID NO:3、 SEQ  ID NO:7、 SEQ  ID NO:11、 SEQ  ID NO:15、 SEQ  ID NO:19、 SEQ  ID NO:23、 SEQ   ID NO:27、 SEQ  ID NO:31、 SEQ  ID NO:35、 SEQ  ID NO:39、 SEQ  ID NO:43、 SEQ  ID NO:47、 SEQ   ID NO:51、 SEQ  ID NO:55、 SEQ  ID NO:59、 SEQ  ID NO:63、 SEQ  ID NO:67、 SEQ  ID NO:71、 SEQ   ID NO:75、 SEQ  ID NO:79、 SEQ  ID NO:83、 SEQ  ID NO:87、 SEQ  ID NO:91、 SEQ  ID NO:95、 SEQ   ID NO:99、 SEQ ID NO:103、 SEQ ID NO:107、 SEQ  ID NO:111或SEQ ID NO:115； 优选地， 所述双特异性抗体的重链恒定区CH1各自独立地选自以下序列中的任意一种： SEQ ID NO:1、 SEQ  ID NO:5、 SEQ  ID NO:9、 SEQ  ID NO:13、 SEQ  ID NO:17、 SEQ  ID NO:21、 SEQ ID NO:25、 SEQ  ID NO:29、 SEQ  ID NO:33、 SEQ  ID NO:37、 SEQ  ID NO:41、 SEQ  ID NO: 45、 SEQ ID NO:49、 SEQ  ID NO:53、 SEQ  ID NO:57、 SEQ  ID NO:61、 SEQ  ID NO:65、 SEQ  ID  NO:69、 SEQ  ID NO:73、 SEQ  ID NO:77、 SEQ  ID NO:81、 SEQ  ID NO:85、 SEQ  ID NO:89、 SEQ  ID  NO:93、 SEQ  ID NO:97、 SEQ  ID NO:101、 SEQ  ID NO:105、 SEQ ID NO:109或SEQ  ID NO:113； 优选地， 所述双特异性抗体的第一Fab区和第二Fab区各自独立地选自以下序列中的任 意一种：权　利　要　求　书 2/5 页 3 CN 114106