(19)中华 人民共和国 国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202111562762.7 (22)申请日 2021.12.20 (71)申请人 中国医学 科学院生物医学工程研究 所 地址 300110 天津市南 开区白堤路23 6号 (72)发明人 刘兰霞　冷希岗　马兵　 (74)专利代理 机构 北京华进京联知识产权代理 有限公司 1 1606 代理人 王勤思 (51)Int.Cl. A61K 45/00(2006.01) A61K 39/39(2006.01) A61K 31/704(2006.01) A61K 47/64(2017.01) A61P 35/00(2006.01)B82Y 5/00(2011.01) B82Y 40/00(2011.01) (54)发明名称 双佐剂自载体原位纳米疫苗及其制备方法 (57)摘要 本发明涉及一种双佐剂自载体原位纳米疫 苗及其制备方法， 双佐剂自载体原位纳米疫苗具 有通过两 亲性单体 分子自组而成的球状结构， 两 亲性单体分子包含依次连接的疏水性佐剂分子、 亲水性佐剂分子、 微环境响应性连接分子和亲水 性化疗药物分子， 疏水性佐剂分子在球状结构的 内侧， 亲水性化疗药物分子在球状结构的外侧。 本发明的双佐剂自载体原位纳米疫苗， 不需要其 它高分子材料的介入。 而且， 该原位纳米疫苗的 内核是由双佐剂形成的球形核苷 酸纳米颗粒， 可 高效刺激机体免疫反应的产生。 采用该新的连接 策略制备的双佐剂自载体原位纳米疫苗， 粒径控 制在200‑300nm， 更易于在肿瘤部位 蓄积， 有利于 原位纳米疫苗产生更强的抗肿瘤效果。 权利要求书2页 说明书8页 附图5页 CN 114288408 A 2022.04.08 CN 114288408 A 1.一种双佐剂自载体原位纳米疫苗， 其特征在于， 所述双佐剂自载体原位纳米疫苗具 有通过两亲性单体分子自组而成的球状结构， 所述两亲性单体分子包含依次连接的疏水性 佐剂分子、 亲水性佐剂分子、 微环境响应性连接分子和亲水性化疗药物分子， 所述疏水性佐 剂分子在所述球 状结构的内侧， 所述亲 水性化疗药物分子在所述球 状结构的外侧。 2.根据权利要求1所述的双佐剂自载体原位纳米疫苗， 其特征在于， 所述亲水性佐剂分 子包含CpG ODN、 QS21、 I L‑1、 IL‑2和IFN‑γ中的一种或多种； 或/和， 所述亲水性化疗药物分子包含阿霉素、 柔红霉素、 米托蒽醌、 博来霉素和环磷酰 胺中的一种或者多种； 或/和， 所述微环境响应性连接分子包含基质金属蛋白酶响应性多肽、 分子谷胱甘肽 响 应性分子、 酶解α ‑乳白蛋白多肽分子和H2O2响应性分子中的一种或者多种； 或/和， 所述疏 水性佐剂分子包 含单磷脂酰A、 R848和咪喹莫 特中的一种或多种。 3.根据权利要求1或者2所述的双佐剂自载体原位纳米疫苗， 其特征在于， 所述亲水性 佐剂分子和所述 微环境响应性连接分子之间的连接 键为酰胺键或者 二硫键。 4.权利要求1至3任一项所述的双佐剂自载体原位纳米疫苗的制备方法， 其特征在于， 所述制备方法包括制备所述两亲性单体分子以及所述两亲性单体分子 自组装成所述双佐 剂自载体原位纳米疫苗的步骤。 5.根据权利要求4所述的双佐剂自载体原位纳米疫苗的制备方法， 其特征在于， 制备所 述两亲性单体分子的步骤 包括： 将所述亲 水性化疗药物分子连接在所述 微环境响应性连接分子上， 制备 连接产物 Ⅰ； 在所述连接产物 Ⅰ上连接所述亲 水性佐剂分子， 制备 连接产物 Ⅱ； 将所述疏 水性佐剂分子连接在所述连接产物 Ⅱ上， 制备所述两亲性单体分子 。 6.根据权利要求5所述的双佐剂自载体原位纳米疫苗的制备方法， 其特征在于， 将所述 亲水性化疗药物分子连接在所述 微环境响应性连接分子上的步骤 包括： 所述微环境响应性连接分子和活化剂a反应， 制备活化产物a， 所述活化产物a和所述亲 水性化疗药物分子反应， 制备 所述连接产物 Ⅰ。 7.根据权利要求6所述的双佐剂自载体原位纳米疫苗的制备方法， 其特征在于， 制备所 述活化产物a的步骤中， 所述活化剂a包含质量比为(0.9 ‑1.3):(0.2 ‑0.4)的1,2 ‑二氯乙烷 和N‑羟基丁二酰亚胺， 或/和， 反应的条件 包括： 温度为2 2℃‑28℃， 时长为1.5 h‑2.5h。 8.根据权利要求5至7任一项所述的双佐剂自载体原位纳米疫苗的制备方法， 其特征在 于， 将所述疏 水性佐剂分子连接在所述连接产物 Ⅱ上的步骤 包括： 所述疏水性佐剂分子和活化剂b反应， 制备活化产物b； 所述化产物b和所述连接产物 Ⅱ反应， 制备 所述两亲性单体分子 。 9.根据权利要求8所述的双佐剂自载体原位纳米疫苗的制备方法， 其特征在于， 制备所 述活化产物b的步骤中， 所述活化剂b包含N,N' ‑羰基二咪唑； 或/和， 反应的条件包括： 温度 为22℃‑28℃， 时长为1.5 h‑2.5h。 10.根据权利要求5至7以及9任一项所述的双佐剂自载体原位纳米疫苗的制备方法， 其 特征在于， 在所述连接产物 Ⅰ上连接所述亲 水性佐剂分子的步骤 包括： 所述连接产物 Ⅰ和交联剂反应， 制备 连接产物 Ⅱ’； 所述连接产物 Ⅱ’和经巯基修饰的所述亲 水性佐剂分子反应， 制备 连接产物 Ⅱ。权　利　要　求　书 1/2 页 2 CN 114288408 A 211.根据权利要求10所述的双佐剂自载体原位纳米疫苗的制备方法， 其特征在于， 所述 连接产物Ⅱ’的制备步骤中， 所述交联剂包含琥珀酰亚胺3 ‑(2‑吡啶基二硫基) ‑丙酸酯， 或/ 和， 所述连接产物 Ⅰ和所述琥珀酰亚胺3 ‑(2‑吡啶基二硫基) ‑丙酸酯的质量比为1:(1 ‑2)； 或/和， 反应的条件包括： 温度为22℃ ‑28℃， 时长为5h ‑7h； 或/和， 所述连接产物 Ⅱ’和经巯 基修饰的所述亲 水性佐剂分子的质量比＞10 。权　利　要　求　书 2/2 页 3 CN 114288408 A 3