(19)中华 人民共和国 国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202111559139.6 (22)申请日 2021.12.20 (71)申请人 安徽安科生物工程 （集团） 股份有限 公司 地址 230088 安徽省合肥市高新区海关 路 K-1 (72)发明人 鲍文英　叶洪涛　周伟　刘浩　 许文娟　崔智强　徐婷　范清林　 宋礼华　 (74)专利代理 机构 合肥诚兴知识产权代理有限 公司 34109 代理人 汤茂盛 (51)Int.Cl. C07K 16/28(2006.01) C12N 15/13(2006.01)A61K 39/395(2006.01) A61P 35/00(2006.01) A61P 37/02(2006.01) A61P 29/00(2006.01) (54)发明名称 全人源抗人CD40单 克隆抗体及其应用 (57)摘要 本发明涉及基因工程， 具体涉及一种全人源 抗人CD40单克隆抗体， 所述单克隆抗体的轻链可 变区和重链可变区分别为： B52： SEQ  ID NO:2和 SEQ ID NO:3， 或B56： SE Q ID NO:4和SE Q ID NO: 5， 或D20： SEQ  ID NO:6和SEQ  ID NO:7， 或D24： SEQ ID NO:8和SEQ  ID NO:9， 或D45： SE Q ID NO: 10和SEQ ID NO:11所示氨基酸或与其具有至少 80％序列同一性的同源序列， 所述全人源抗人 CD40单抗能特异性地与人CD40 结合。 本发明的全 人源抗人CD40单克隆抗体具有高生物学激动剂 活性的全人源抗CD40 特异性单克隆抗体。 所述抗 体针对CD40阳性肿瘤细胞直接发挥作用， 还能够 通过调节适应性和 固有免疫系统增强机体对肿 瘤细胞应答。 权利要求书1页 说明书10页 序列表9页 附图8页 CN 114409781 A 2022.04.29 CN 114409781 A 1.一种全人源抗人CD40单克隆抗体， 其特征在于： 所述单克隆抗体的轻链可变区和重 链可变区分别为： B52： SEQ  ID NO:2和SEQ  ID NO:3， 或B56： SEQ  ID NO:4和SEQ  ID NO:5， 或 D20： SEQ ID NO:6和SEQ  ID NO:7， 或D24： SEQ  ID NO:8和SEQ  ID NO:9， 或D45： SEQ  ID NO: 10和SEQ ID NO:11所示氨基酸 或与其具有至少80％序列同一性的同源序列， 所述全人源抗 人CD40单抗能特异性 地与人CD40结合。 2.根据权利要求1所述的全人源抗人CD40单克隆抗体， 其特征在于： 是从全合成人源噬 菌体抗体库中筛 选得到。 3.根据权利要求1所述的全人源抗人CD40单克隆抗体， 其特征在于： 所述以D45的轻重 链可变区为母序列， 亲和力成熟后得到全人源抗人CD40单 克隆抗体T6 0。 4.根据权利要求3所述的全人源抗人CD40单克隆抗体， 其特征在于： 所述T60包括轻链 与重链， 所述轻链可变区包含如SEQ  ID NO:12所示氨基酸 或与其具有至少80％序列同一性 的同源序列； 其中X1是R、 E、 P、 K或Q； X2是S、 E、 G或K； X3是T、 R或K， 优选K； X4是M、 Q、 A、 N、 D、 S 或E； X5是E、 S、 D或N； X6是F、 K、 R或S； X7是L、 Y或I； 所述重链可变区包含如SEQ  ID NO:13所示氨基酸或与其具有至少80％序列同一性的 同源序列； 其中X1是D、 L、 G、 V、 K、 T或S； X2是S、 N或M； X3是V、 R、 P或M； X4是A、 S、 T、 N、 R或D， 优选R； X5是 S、 P或N； X6是F、 R、 S、 N、 T或V； X7是N或H； X8是T、 S、 P或A； X9是G、 T、 S或D； X10是S、 M、 N、 Y、 T、 E或F； X11＝A、 R、 Q、 E、 T或V， 优选Q； X12＝D、 N、 R、 S、 H、 Q、 E、 N或K。 5.根据权利要求1 ‑4任一所述的全人源抗人CD40单克隆抗体， 其特征在于： 所识别的 CD40胞外域的氨基酸序列为SEQ  ID NO:1。 6.根据权利 要求1‑4中任一所述的全人源抗人CD40单克隆抗体， 其特征在于： 所述抗体 是IgG1或IgG2或IgG4形式的抗体或抗原结合片段。 7.根据权利 要求1‑4中任一所述的全人源抗人CD40单克隆抗体， 其特征在于： 其抗原结 合片段是选自以下的抗体片段： Fab、 scFv或(Fab ’)2片段。 8.一种单链抗体， 其含有权利要求1 ‑4任一项所述的轻链可变区和重链可变区。 9.一种核酸分子， 其编码如权利要求1 ‑4中任一项所述的抗人CD40抗体分子或单链抗 体或抗原结合片段的轻链或重链。 10.一种表达载体或载体组， 其含有如权利要求9所述的核酸分子 。 11.一种宿主细胞， 其含有或表达 权利要求10所述的载体或载体组。 12.根据权利要求11所述宿主细胞， 其特征在于： 所述宿主细胞是原核的或真核的， 选 自酵母细胞、 哺乳动物细胞或适用于制备抗体或其 抗原结合片段的其它细胞。 13.一种药物或药物 组合物， 其含有如权利要求1 ‑4中任一项所述的抗人CD40抗体或单 链抗体或其 抗原结合片段。 14.根据权利要求13所述药物或药物 组合物， 其特征在于， 所述药物或药物组合用于诊 断、 治疗或改善与CD40信号相关的疾病。 15.根据权利要求14所述药物或药物组合物， 其特征在于： 所述疾病为癌症、 自身免疫 性疾病或炎性疾病。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114409781 A 2全人源抗人C D40单克隆抗体及其应用 技术领域 [0001]本发明涉及 基因工程， 具体涉及具有高生物学激动剂活性的全人源抗CD 40特异性 单克隆抗体及其应用。 背景技术 [0002]近年来， 治疗性抗体显示出越来越广阔的应用前景。 但由于人抗鼠抗体(human   anti‑mouse antibody,HAMA)的产生使其应用受到很大限制。 抗体库技术的出现为这一问 题的解决提供了一条新的途径， 为各种不同免疫原包括自身抗原的抗体获得提供了一条有 效途径。 抗体库技术是20世纪90年代抗体工程领域的重大进展， 它的出现得益于三大技术 的发展， 即PCR扩增技术、 大肠杆菌表达系统的优化及噬菌体展示技术， 尤其是噬菌体展示 技术是实现抗体库技 术的重要前提。 [0003]噬菌体展示蛋白质工程或分子进化是蛋白质工程中的一个富有潜力的崭新领域， 该技术的显著优点一是表达的融合蛋白或肽类直接与编 码它们的基因相关联， 将活的噬菌 体繁殖扩增即可鉴定和分析结合肽或蛋白的序列， 其二， 噬菌体展示肽或蛋白的结构和功 能常常与天然肽或 蛋白具有一样或极为相似的结构和功能， 这一技术已成为基础研究和药 物筛选的重要手段。 噬菌体抗体库技术避免了传统的从杂交瘤细胞中筛选鼠源单抗， 再进 行人源化改造的繁琐过程， 可在较 短时间内， 得到完全的人源抗体片段， 而且无需经过免疫 即可得到大量的针对各种抗原的特异性 抗体， 使人源性 抗体制备技 术获得突破性的进 展。 [0004]全合成人源噬菌体抗体库的设计， 需要选择具有代表性的骨架序列以及制定覆盖 范围广的CDR序列。 抗体库技术的发展和对抗体结构功能认识的深化使人们具备了完全人 工设计抗体可变区的能力。 随着人类抗体胚系(germline)基因测序完成， 人们对抗体结构 的认识更深入了一步， 使得对人抗体基因的操作更加简单易行。 对抗体胚系基因使用频率 分析表明， 胚系基因的使用具有较强的偏向性， 许多胚系基因从不 或很少使用(Tomlinson, 1995)， 这一特点是构建抗体库的重要基础。 为保证骨架区的代表性和保守性， 骨架区的选 择和设计通常采用人抗体胚系基因作为基础骨架。 选用多个骨架序列构建多骨架库能够更 全面地涵盖人抗体库基因。 CDR区序列的设计是合 成抗体库的关键， 这使合成抗体库具有 可 控性强的优点， 可根据需要人为设计改造抗体的基因。 合 成抗体库的组分清楚， 能够在一定 程度上改善抗体多样性的可控性， 抗体库的内容、 位点变异 性、 库的整体多样性均可根据设 计加以控制调节。 [0005]人为地控制骨架序列和CDR区的设计与合成， 可使抗体库的构成和多样性明确化。 早期抗体库构建筛选的成功证实了通过全合成技术构建抗体库的可行性， 并且为近年来新 型合成抗体库的构建积累了 丰富的经验。 [0006]CD40是肿瘤坏死因子受体超家族成员5， 属于I型跨膜糖蛋白， 由277个氨基酸组 成， 其中膜外 区、 跨膜区、 膜内区分别由193、 22和62个氨基酸组成。 CD40主要表达在B细胞、 胸腺上皮细胞、 活化的单核/巨噬细胞、 树突状细胞、 造血细胞、 上皮细胞、 内皮细胞。 几乎表 达于所有的B 细胞恶性肿瘤和多数实体瘤。说　明　书 1/10 页 3 CN 114409781 A 3