(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202111501367.8 (22)申请日 2021.12.09 (71)申请人 广西师范大学 地址 541004 广西壮 族自治区桂林市七 星 区育才路15号 (72)发明人 王恒山　覃锋　王采奕　王凡凡　 李金军　陈瑶　李梅珊　蒋京辰　 (74)专利代理 机构 南宁新途专利代理事务所 (普通合伙) 45119 专利代理师 但玉梅 (51)Int.Cl. C07D 491/056(2006.01) C07B 57/00(2006.01) A61P 35/00(2006.01) (54)发明名称 两面针中两对二氢苯并菲啶生物碱类化合 物及其提取方法和应用 (57)摘要 本发明属于药物 提取技术领域， 提供两面针 中两对二氢苯并菲啶生物碱类化合物及其提取 方法和应用。 所述化合物为式1a、 1b、 2a、 2b所示 化合物或其药学上可接受的盐。 提取方法为： 将 两面针提取物溶于酒石酸溶液， 过滤将滤液用乙 酸乙酯萃取； 将乙酸乙酯 萃取物和酸水不溶物合 并， 用石油醚、 乙酸乙酯、 正丁醇萃取， 得石油醚 部位、 乙酸乙酯部位、 正丁 醇部位； 将乙酸乙酯部 位上硅胶柱层析， 收集目标馏分， 目标馏分依次 用反相色谱柱、 葡聚糖凝胶柱、 制备液相进行分 离， 得目标化合物； 对目标化合物进行手性拆分， 得两对二氢苯并菲啶生物碱类化合物。 本发明所 得化合物具有体外抗肿瘤活性， 具有较好的潜在 药用价值， 有望用于各种抗肿瘤药物的制备。 权利要求书2页 说明书7页 CN 115304611 A 2022.11.08 CN 115304611 A 1.两面针中两对二氢苯并菲啶生物碱类化合物， 其特征在于： 所述化合物为下式1a、 1b、 2a、 2b所示 化合物或其药 学上可接受的盐： 2.权利要求1所述两面针中两对二氢苯并菲啶生物碱类化合物的提取方法， 其特征在 于： 包括以下步骤： (1)以两面针为原料， 提取获得两面针提取物； (2)将两面针提取物溶于质量分数为3％的酒石酸溶液， 滤去不溶物A后将滤液用乙酸 乙酯萃取， 分离得乙酸乙酯萃取物和酸水不溶物； (3)将乙酸乙酯萃取物和酸水不溶物合并， 依次用石油醚、 乙酸乙酯、 正丁醇萃取， 浓缩 纯化得石油醚部位、 乙酸乙酯部位、 正 丁醇部位； (4)将纯化后的乙酸乙酯部位上硅胶柱层析， 以二氯甲烷和甲醇组成的洗脱剂作为溶 剂体系进行梯度洗脱， 对馏分进行分析检测， 收集含式1a、 1b、 2a、 2b所示化合物的目标馏 分， 所得含目标化合物的目标馏分依次用反相色谱柱、 葡聚糖凝胶柱、 制备液相进行分离， 即得到目标化 合物； (5)通过手性柱对目标化合物进行拆分， 即得到所述两对二氢苯并菲啶生物碱类化合 物。 3.根据权利要求2所述的提取方法， 其特征在于： 步骤(1)中所述的提取所用的溶媒为 体积浓度为70 ‑100％甲醇或体积浓度为75 ‑95％乙醇或者丙酮； 提取的方式为常温浸提、 加 热提取、 超声 波提取或回流 提取。 4.根据权利要求2所述的提取方法， 其特征在于： 步骤(2)中， 当浸膏溶于3％的酒石酸权　利　要　求　书 1/2 页 2 CN 115304611 A 2溶液后， 得浸膏溶 液的pH＝2 ‑3； 滤去不溶物 A后滤液用乙酸乙酯萃取的次数为3 ‑4次。 5.根据权利要求2所述的提取方法， 其特征在于： 步骤(3)中依次用石油醚、 乙酸乙酯、 正丁醇萃取， 每种萃取 液萃取的次数为3 ‑4次。 6.根据权利要求2所述的提取方法， 其特征在于： 步骤(4)中， 硅胶柱层析时， 按照二氯 甲烷和甲醇按体积比为100： 1， 80： 1， 50： 1， 40： 1， 30： 1， 20： 1， 15： 1， 10： 1， 8： 1， 5： 1， 2： 1， 1： 1 进行梯度洗脱， 每个梯度浓度的洗脱剂体积为柱体积的3 ‑4倍， 每500 ml馏分进行收集， 对馏 分进行分析检测。 7.根据权利要求2所述的提取方法,其特征在于： 步骤(4)中， 在用反相色谱柱分离时， 洗脱剂由甲醇和水按不同的体积比组成的， 按甲醇含量为20％， 30％， 40％， 50％， 60％， 70％， 80％， 90％的梯度洗脱， 每3 00ml馏分进行收集， 对馏分进行检测， 收集目标馏份； 在用葡聚糖凝胶柱分离时， 洗脱剂为甲醇， 每30ml馏分进行收集， 对馏分进行检测， 收 集目标馏份； 在用制备液相分离时， 流速为7mL/min， 检测波长为210nm， 分离条件为： 流动相为： 甲醇 和水， 在为甲醇： 水的体积比为65:35时， 收集保留时间为49.0min和51min的组分， 分别为化 合物1和化 合物2。 8.根据权利要求2所述的提取方法， 其特征在于： 步骤(5)中， 进行所述手性拆分时， 流 动相流速为0.7mL/min， 色谱柱温度为30℃， 检测波长为210nm； 化合物1手性拆分的流动相 为体积比是62:38的正己烷和异丙醇， 采用等度洗脱方式， 在保留时间为20.9min得到式1a 化合物， 在保留时间为33.8min得到式1b化合物； 化合物2手性拆 分的流动相为体积比是88: 12的正己烷和异丙醇， 采用等度洗脱方式,在保留时间为36.0min得到式2a化合物， 在保留 时间为38.7mi n得到式2b化 合物。 9.权利要求1所述 化合物或其药 学上可接受的盐在制备抗肿瘤药物中的应用。 10.以权利要求1所述 化合物或其药 学上可接受的盐为活性成分制备的抗肿瘤药物。权　利　要　求　书 2/2 页 3 CN 115304611 A 3