(19)中华 人民共和国 国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202111554540.0 (22)申请日 2021.12.17 (71)申请人 中国科学院昆明植物研究所 地址 650201 云南省昆明市蓝黑路132号 (72)发明人 刘树柏　何智承　何英英　 (74)专利代理 机构 北京高沃 律师事务所 1 1569 代理人 苏士莹 (51)Int.Cl. C12Q 1/6886(2018.01) A61K 45/00(2006.01) A61K 31/713(2006.01) A61P 35/00(2006.01) (54)发明名称 一组检测结直肠癌转移的生物标志基因及 应用和试剂盒、 药物组合物 (57)摘要 本发明提供了一组检测结直肠癌转移的生 物标志基因及应用和试剂盒、 药物组合物， 涉及 生物医学 临床诊断技术领域。 本发 明所述生物标 志基因BGN、 THBS2、 SPARC、 CDH11、 MFAP2、 MMP11、 SPP1和THY1的表达水平异常与结肠癌转移显著 相关。 在本发明实施例中， 还采用80例 临床样本 免疫组化染色分析8个基因在临床样本中的表达 情况， 接着再通过sh ‑RNA降低对应的基因在结肠 癌细胞系中的表达量， 并通过transwell细胞小 室实验验证当目的基因表达水平被抑制， 细胞系 的侵袭能力减弱。 由此， 上述8个基因可作为结肠 癌转移的生物标志物， 并可能作为治疗结肠癌转 移的潜在靶点， 具有重要的临床应用价 值。 权利要求书1页 说明书7页 序列表4页 附图7页 CN 113999917 A 2022.02.01 CN 113999917 A 1.一组检测结直肠癌转移的生物标志基因， 其特征在于， 所述生物标志基因包括： BGN、 THBS2、 SPARC、 CDH1 1、 MFAP2、 M MP11、 SPP1和THY1中的一个或多个的组合。 2.一种检测权利要求1所述生物标志物的试剂在制备诊断和/或治疗结直肠癌的产品 中的应用。 3.根据权利要求2所述应用， 其特征在于， 所述试剂包括用于检测权利要求1所述生物 标志物的mRNA 表达量的试剂。 4.根据权利要求2或3所述应用， 其特征在于， 所述检测的方法包括： 微阵列、 RT ‑PCR、 Western Blot或测序。 5.根据权利要求2所述应用， 其特征在于， 所述检测的样品包括福尔马林固定的石蜡包 埋样品或冷冻组织切片。 6.根据权利要求2所述应用， 其特 征在于， 所述产品包括试剂盒 或药物组合物。 7.一种检测结直肠癌 转移的试剂 盒， 其特征在于， 所述试剂 盒中包括检测权利要求1所 述生物标志 物的表达量的试剂。 8.一种治疗结直肠癌转移的药物组合物， 其特征在于， 所述药物组合物包括抑制权利 要求1所述 生物标志 物的表达量的试剂。 9.根据权利要求7 所述试剂盒 或8所述药物组合物， 其特 征在于， 所述试剂包括sh ‑RNA。 10.根据权利要求9所述药物组合物， 其特征在于， 所述sh ‑RNA包括： 针对BGN设计的 BGN‑shRNA‑1F/BGN‑shRNA‑1R、 BGN‑shRNA‑2F/BGN‑shRNA‑2R、 BGN‑shRNA‑3F/BGN‑shRNA‑3R 和BGN‑shRNA‑4F/BGN‑shRNA‑4R； 针对THBS2设计的THBS2 ‑shRNA‑1F/THBS2 ‑shRNA‑1R、 THBS2 ‑shRNA‑2F/THBS2 ‑shRNA‑ 2R和THBS2 ‑shRNA‑3F/THBS2 ‑shRNA‑3R； 针对MFAP2设计的MFAP2 ‑shRNA‑1F/MFAP2 ‑shRNA‑1R、 MFAP2 ‑shRNA‑2F/MFAP2 ‑shRNA‑ 2R、 MFAP2 ‑shRNA‑3F/MFAP2‑shRNA‑3R和MFAP2 ‑shRNA‑4F/MFAP2‑shRNA‑4R； 其中BGN‑shRNA‑1F的核苷酸序列如SEQ  ID NO.1所示， BGN ‑shRNA‑1R的核苷酸序列如 SEQ ID NO.2所示， BGN ‑shRNA‑2F的核苷酸序列如SEQ  ID NO.3所示， BGN ‑shRNA‑2R的核苷 酸序列如SEQ  ID NO.4所示， BGN ‑shRNA‑3F的核苷酸序列如SEQ  ID NO.5所示， BGN ‑shRNA‑ 3R的核苷酸序列如SEQ  ID NO.6所示， BGN ‑shRNA‑4F的核苷酸序列如SEQ  ID NO.7所示， BGN‑shRNA‑4R的核苷酸序列如SEQ  ID NO.8所示； THBS2‑shRNA‑1F的核苷酸序列如SEQ  ID NO.9所示， THBS2 ‑shRNA‑1R的核苷酸序列如 SEQ ID NO.10所示， THBS2 ‑shRNA‑2的核苷酸序列如SEQ  ID NO.11所示， THBS2 ‑shRNA‑2R的 核苷酸序列如SEQ  ID NO.12所示， THBS2 ‑shRNA‑3F的核苷酸序列如SEQ  ID NO.13所示， THBS2‑shRNA‑3R的核苷酸序列如SEQ  ID NO.14所示； MFAP2‑shRNA‑1F的核苷酸序列如SEQ  ID NO.15所示， MFAP2 ‑shRNA‑1R的核苷酸序列如 SEQ ID NO.16所示， MFAP2 ‑shRNA‑2F的核苷酸序列如SEQ  ID NO.17所示， MFAP2 ‑shRNA‑2R 的核苷酸序列如SEQ  ID NO.18所示， MFAP2 ‑shRNA‑3F的核苷酸序列如SEQ  ID NO.19所示， MFAP2‑shRNA‑3R的核苷酸序列如SEQ  ID NO.20所示， MFAP2 ‑shRNA‑4F的核苷酸序列如SEQ   ID NO.21所示， MFAP2 ‑shRNA‑4R的核苷酸序列如SEQ  ID NO.22所示。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 113999917 A 2一组检测结直肠癌 转移的生物标志基因及应用和试剂盒、 药 物组合物 技术领域 [0001]本发明属于生物医学临床诊断技术领域， 具体涉及一组检测结直肠癌转移的生物 标志基因及应用和试剂盒、 药物组合物。 背景技术 [0002]结直肠癌(Colorectal  cancer,CRC)是全球范围内最常见的恶性肿瘤之一， 根据 2020年最新流行病学数据统计， 在所有癌症类型中结直肠癌在所有年龄段和性别中发病率 位列第三， 而其 致死率位居第二。 [0003]由于结直肠癌早期主要症状不明显， 导致患者就诊时以中晚期居多， 其中有部分 患者确诊时就已经错过了手术治疗的最佳时机， 只能采取放化疗治疗， 使得晚期结直肠癌 预后较差， 病 死率居高不下。 尽管早期筛查和治疗取得了进展， 但结直肠癌的转移(包括淋 巴转移和远处转移)仍是导致新确诊患者死亡 的主要原因， 晚期结直肠癌患者的总体生存 率仍然很低。 而目前针对晚期转移性结直肠癌 发展的治疗药物和方式， 改善了新诊断的晚 期疾病患者的生存期， 然而晚期患者的5年存活率也只有约13.9％， 因而还存在较大的空间 来改善结直肠癌转移患者的预后及生存期。 因此， 发现参与调控结直肠癌转移过程的关键 基因对于早期筛查和预判肿瘤的转移就显得 尤为重要。 [0004]分子生物标志物分析作为癌症预后评估的有力辅助手段， 已被发现并应用于开发 癌症精准治疗的诊断方法和 新的诊断策略， 从而以指导临床上对患者开展恰当的治疗。 这 些生物标志物是 由于和正常生理状态相比， 病理状态下基因突变、 基因重组导致对应基因 的表达量发生改变， 再通过对基因表达谱进行分析所获得 的。 已有很多研究对导致结直肠 癌发生的经典分子， 如P53基因突变、 KRAS基因突变、 APC基因突变等机制的阐述， 很大程度 上给人们对结直肠癌 发生、 发展的分子机制的认识提供了很有价值的参考。 介于结直肠癌 的转移是其主要致死原因， 近年来有关结直肠癌转移可能的机制的研究也层出不穷。 然而， 针对结肠癌非转移到转移过程所涉及的关键调控基因的研究报道少且没有为临床诊断和 治疗提供具有指导意义的生物标志物。 因此， 参与结肠癌转移进程的生物标志物的发现和 确认显得 尤为重要。 发明内容 [0005]有鉴于此， 本发明的目的在于提供一种检测结直肠癌转移的生物标志基 因及应用 和试剂盒、 药物组合物， 8个标志性基因异常表达可作为标记物， 单独或者联合应用于结肠 癌转移的临床诊断和/或治疗。 [0006]为了实现上述发明目的， 本发明提供以下技 术方案： [0007]本发明提供了一组检测结直肠癌转移的生物标志基因， 所述生物标志基因包括： BGN、 THBS2、 S PARC、 CDH1 1、 MFAP2、 M MP11、 SPP1和THY1中的一个或多个的组合。 [0008]本发明还提供了一种检测上述生物标志物的试剂在制备诊断和/或治疗结直肠癌说　明　书 1/7 页 3 CN 113999917 A 3